问:dna连接酶存在那种生物?在生物中有何作用
- 答:严格来说,上述叙述不激衡正桥乱确。
大肠杆菌在一般情况下,只能将粘性末端连接起来,所以当你只想将体系中的粘性末端连接,而平端不连接时,就选这个酶。
但是当反应体系加入适量PEG,大肠杆菌dna连接酶也能将平端连接【参考文献明消做: Harrison, B. and Zimmerman, S.B.1983 Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 80:5852-5856.】
所以,E.coli dna ligase本身也具备连接平端能力,只是条件苛刻而已。
问:谁给详细解释一下DNA水解酶
- 答:DNA即脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid),其基本组成单位是核苷酸,而核苷酸又是有核酸,戊糖和磷酸组成(DNA中的戊糖为脱氧核糖)。
DNA水解酶为一类可以将组成DNA分子的脱悔宴氧核糖核苷酸之间的连接(3’,5’-磷酸二酯键)打开的酶。
具体包括:DNA聚合酶α/引发酶(引发及后随链的部分合成)悔启,DNA聚合酶δ(DNA复制主要酶),增殖细胞核抗原(滑动夹子,与合成连接性有关),拓扑异构酶(母链DNA拓扑异构化),解(螺)旋酶(能解开DNA双螺旋),单链DNA结合蛋白及复制蛋白(单链碧前如DNA结合作用),复制因子C(参与滑动夹子的装配),DNA连接酶(连接冈崎片段及参与修复),核酸酶(去除RNA引物),侧翼核酸内切酶(去除RNA引物)。
总体作用是在DNA复制过程中发挥的,在DNA复制过程中起到关键性的作用。
以上信息详见高等教育出版社《生物化学》一书第十二章:DNA的生物合成。
参考文献:高等教育出版社《生物化学》 - 答:DNA在水解酶的作用下,初步水解的产物为脱氧核苷酸,即破坏氢键和磷酸二酯键。如果是彻底水解,就能分解为磷酸罩搜、脱氧核糖和ACGT四种者耐碱基,而不是ACGU四种。U尿嘧啶只在RNA中存在。在上述两过程用的酶是不同的物嫌历。
问:DNA的重组连接实验原理和详细步骤方面的文章哪里有啊?
- 答:重组的DNA分子是在T4DNA连明携接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲液系统中,将上述二种酶切后的DNA分子进行连接。
(一)DNA连接酶的作用步骤
1.T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶-AMP复合物(腺苷酰酶)
2.酶-AMP复合物再结合到具有5´-磷酸基和3´-羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化。
3.产生一个新的磷酸二酯键,把缺口封起激陵伏来。
(二)DNA的连接方式
在T4DNA连接酶的作用下的DNA连接反应,一般是随机的,但也可汪滚以通过对载体、目的基因的处理以控制与调整DNA的有效连接。
生物帮有关于这个问题的专题你去看一下吧,
生命科学研究成果,分子,细胞生物学研究进展,生命科学研究进展。