一、晶状体上皮源生长因子的基础与临床（论文文献综述）
崔双慧[1]（2021）在《抗VEGF药物对人晶状体上皮细胞增殖、上皮-间质转化的影响》文中提出目的:探讨抗VEGF药物康柏西普（conbercept）对人晶状体上皮细胞（Human Lens epithelial cells,HLECS）增殖、上皮-间质转化的影响,为临床预防和治疗PCO提供实验依据和思路。方法:实验分为5组,即对照组（0 mg/ml）和四个不同浓度的康柏西普组,康柏西普的浓度分别为（0.1 mg/ml,0.5 mg/ml,1.0 mg/ml,2.0 mg/ml）,用不同浓度的康柏西普分别处理培养的人晶状体上皮细胞株SRA01/04,用MTT法检测康柏西普对晶状体上皮细胞存活率的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）法检测Bax,Bcl-2,E-cadherin,Vimentin,Slug的表达水平。结果:随着康柏西普浓度的增加,细胞的存活率逐渐降低,与对照组相比,0.1mg/ml组的细胞存活率降低的无统计学意义（P>0.05）,0.5 mg/ml组、1.0 mg/ml组、2.0 mg/ml组的细胞存活率降低均有统计学意义（P<0.05）;随着康柏西普浓度的增加,阻滞于G0/G1期的细胞的比例逐渐升高,与对照组相比,0.1 mg/ml组、0.5mg/ml组阻滞于G0/G1期的细胞比例升高的无统计学意义,1.0 mg/ml组阻滞于G0/G1期的细胞比例升高的具有统计学意义（P<0.05）,2.0 mg/ml组阻滞于G0/G1期的细胞比例升高的具有显着差异（P<0.01）;细胞凋亡率随着康柏西普浓度的增加逐渐升高,各组与对照组相比均具有统计学意义（P<0.05）;细胞凋亡促进蛋白Bax表达水平升高,其中0.1 mg/ml组与对照组相比无统计学意义（P>0.05）,0.5mg/ml组,1.0 mg/ml组,2.0 mg/ml组与对照组相比有统计学意义（P<0.05）;细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平逐渐降低,各组与对照组相比均具有统计学意义（P<0.05）;与上皮间质转化相关的蛋白E-钙黏蛋白的表达水平逐渐降低,0.1 mg/ml组与对照组相比无统计学意义（P>0.05）,0.5 mg/ml组,1.0 mg/ml组与对照组相比有统计学意义（P<0.05）,2.0 mg/ml组与对照组相比有显着差异（P<0.01）;在0.1mg/ml组和0.5 mg/ml组,Vimentin的表达水平与对照组相比降低,但是无统计学意义（P>0.05）,1.0 mg/ml组与对照组相比,Vimentin的表达水平升高,也无统计学意义（P>0.05）,2.0 mg/ml组与对照组相比,Vimentin的表达水平升高,且具有统计学意义（P<0.05）,Slug的表达水平与对照组比升高,其中,0.1 mg/ml组,0.5mg/ml组、1.0 mg/ml组与对照组相比无统计学意义（P>0.05）,2.0 mg/ml组与对照组相比有统计学意义（P<0.05）。结论:1、一定浓度（0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0mg/ml）的康柏西普可降低晶状体上皮细胞的存活率,抑制细胞的增殖;2、一定浓度（1.0 mg/ml、2.0mg/ml）的康柏西普可将晶状体上皮细胞阻滞于G0/G1期;3、一定浓度（0.1 mg/ml、0.5mg/ml、1.0 mg/ml、2.0mg/ml）的康柏西普可促进晶状体上皮细胞的凋亡;4、高浓度（2.0mg/ml）的康柏西普可促进晶状体上皮细胞发生上皮-间质转化。
刘敏[2]（2021）在《长链非编码RNA CCAT1参与转化生长因子TGF-β2介导的晶状体上皮细胞间质化的研究》文中研究表明目的:1.应用转化生长因子-β2（transforming growth factor,TGF-β2）诱导人来源的晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLECs）发生间质化转变,构建间质化细胞模型,检测晶状体上皮细胞中长链非编码RNA结肠癌相关转录本1（Long non-coding RNA colon cancer-associated transcript-1,lncRNA CCAT1）的表达量。2.敲低CCAT1的表达,检测各分子水平间质化标志物的表达量的变化。3.探讨C CAT1在TGF-β2诱导的HLECs的间质化过程中的作用。方法:本实验以TGF-β2诱导HLECs永生系SRA01/04细胞发生间质化,建立间质化细胞模型。含有10ng/ml TGF-β2的低糖DMEM培养液培养SRA01/04细胞48小时作为实验组,以普通低糖DMEM培养基培养SRA01/04细胞作空白对照组。利用倒置显微镜观察细胞的形态学变化,通过实时荧光定量PCR以及Western blot法检测lncRNA CCAT1以及上皮间质转化标志物的相对表达量的变化。采用小干扰RNA（si RNA）沉默CCAT1的表达,采用实时荧光定量PCR以及Western blot法检测lncRNA CCAT1以及上皮间质转化标志物的相对表达量的变化。探讨LncRNA CCAT1在TGF-β2诱导的HLECs间质化过程中的作用及其对PCO形成的影响。结果:1.TGF-β2诱导人晶状体SRA01/04细胞,成功构建间质化细胞模型。倒置显微镜下,实验组细胞形态由多边形变为长梭形。实时荧光定量PCR以及western blot法检测发现,与空白对照组相比较,实验组上皮细胞标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadh erin）表达明显降低（p<0.05）,间质细胞标志物波形蛋白（vimentin）（p<0.05）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）（p<0.05）表达量明显增加,差异有统计学意义。荧光显微镜下发现,与空白对照组相比较,实验组晶状体上皮细胞内α-SMA蛋白以及波形蛋白表达量增加,荧光强度增加,同时细胞形态呈现间质化转变。实时荧光定量PCR检测不同浓度的TGF-β2因子对lncRNA CCAT1表达的影响,发现CCA T1的表达具有浓度依赖性,随着TGF-β2浓度的增加,CCAT1的表达量增加,10ng/ml时CCAT1的表达提高最为明显,所以选用10ng/ml作为处理浓度进行后续实验。2.成功筛选出高效率沉默CCAT1表达的si CCAT1,实时荧光定量PCR结果显示,si CC AT1-1,si CCAT1-2,si CCAT1-3均可沉默CCAT1的表达,但si CCAT1-2的干扰效果最明显,最终我们选择si CCAT1-2进行后续实验。3.运用实时荧光定量PCR以及w estern blot法检测不同CCAT1表达水平下上皮细胞标志蛋白E-钙黏蛋白,以及间质细胞标志蛋白波形蛋白,α-平滑肌肌动蛋白的表达变化。结果发现:与si NC组（标记为NC组）相比,经TGF-β2处理的si NC（标记为Tnc）,波形蛋白,α-平滑肌肌动蛋白的表达量增加（P<0.05）,E-钙黏蛋白的表达量降低（P<0.05）,差异有统计学意义。与Tnc组相比,TGF-β2处理的si CCAT1敲低实验组（标记为Tl nc组）,波形蛋白,α-平滑肌肌动蛋白的表达量降低（P<0.05）,E-钙黏蛋白的表达量增加（P<0.05）,差异有统计学意义。结论:LncRNA CCAT1参与TGF-β2诱导的HLECs间质化过程;沉默LncRNA CCAT1的表达,可逆转TGF-β2引起的HLECs间质化进程。
王钰池[3]（2021）在《二甲双胍对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的影响》文中研究说明目的:后发性白内障是白内障手术引发的并发症,对患者术后视觉质量造成干扰,目前尚无有效的治疗药物。尽管对该现象发生的机制尚不明确,但当前大量的研究认为术后生长因子及炎性因子等的聚积导致晶状体上皮细胞发生上皮间充质转换（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）是该现象发生的主要机制。二甲双胍（Metformin,Met）是一线降糖药,近年来发现其在抗衰老、抗肿瘤及抗纤维化研究中起效,但目前尚无Met在PCO的研究。Met主要通过诱导细胞发生自噬、抑制细胞增殖以及抑制迁移等发挥作用,自噬是降解细胞产物及细胞器的生物学过程,自噬功能异常与PCO的发病之间存在联系,但自噬与晶状体上皮细胞EMT之间尚无确切报道。文以TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生EMT作为PCO体外模型,探索Met对人晶状体上皮细胞发挥的功能及其可能的机制,为PCO的药物治疗提供可能性。方法:晶状体上皮细胞系SRA01/04根据处理条件不同分成正常对照组、TGF-β2处理组、Met处理组、Met联合TGF-β2处理组、自噬抑制剂组。其中,TGF-β2处理晶状体上皮细胞24 h作为TGF-β2处理组;不同浓度Met处理晶状体上皮细胞24～72 h作为Met处理组;在TGF-β2处理前提下加入Met（2.5、5、10m M）作用24 h作为Met联合TGF-β2处理组;采用5m M 3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）提前处理2 h或10μM氯喹（Chloroquine,CQ）处理24 h,分别对发生自噬的组别进行抑制作为自噬抑制组。通过细胞计数试剂盒-8（Cell counting kit-8,CCK-8）检测Met处理不同浓度和不同时间对晶状体上皮细胞增殖水平的影响;采用划痕实验和Transwell迁移试验检测晶状体上皮细胞在各处理因素下迁移能力的变化情况;采用RT-q PCR测定各处理组EMT标记物（E-cad,Vimentin和α-SMA）的转录本表达变化情况;采用Western blot检测各处理组EMT标记物（E-cad,Vimentin和α-SMA）及自噬标记物（LC-3B,p62）的蛋白表达情况。结果:1、与正常对照组相比,划痕实验和Transwell迁移试验证实（10、50ng/m L）TGF-β2处理可诱导晶状体上皮细胞发生迁移,结果均有统计学意义;通过RT-q PCR和Western blot检测证实,与对照组相比,10、50ng/m L TGF-β2处理可降低上皮间充质转化标记物E-cad的转录本和蛋白表达,诱导间充质标记物Vimentin,α-SMA的转录本表达和蛋白表达上调,证实10ng/m L TGF-β2可建立PCO的体外细胞模型;2、通过CCK-8实验证实Met在1.25～20m M浓度处理24～72 h可剂量依赖性及时间依赖性降低晶状体上皮细胞增殖能力;3、通过划痕实验和Transwell迁移试验证实Met（2.5～10m M）可浓度依赖性降低TGF-β2诱导上调的晶状体上皮细胞迁移能力,通过RT-q PCR和Western blot检测Met可抑制TGF-β2诱导下调的Ecad的转录本和蛋白表达,还能抑制TGF-β2诱导上调的Vimentin及α-SMA的转录本和蛋白表达,证实Met可抑制TGF-β2诱导上调的EMT;4、通过Western blot检测自噬标记物,发现Met联合处理组可以诱导自噬,通过3-MA及CQ对Met诱导的自噬进行抑制,可以回复Met对迁移和EMT的抑制作用,证明Met通过提高自噬水平抑制TGF-β2诱导上调的晶状体上皮细胞迁移能力和EMT。结论:本研究首次发现Met可抑制TGF-β2诱导上调的人晶状体上皮细胞迁移能力和EMT,通过自噬抑制剂回复后发现,Met可能通过提高自噬发挥抑制迁移和EMT的作用。
张荣沛[4]（2021）在《蒸馏水对人晶状体上皮细胞活性的影响及分子机制》文中指出第一部分蒸馏水对人晶状体上皮细胞的活性影响及清除作用目的:探讨蒸馏水（DW）引起年龄相关性白内障患者离体前囊膜晶状体上皮细胞（LECs）死亡的有效及最佳作用时间。探讨DW联合冲洗清除LECs的有效及最佳作用时间。观察并分析DW处理后LECs的组织病理学变化。方法:收集白内障手术取出的156片晶状体前囊膜,分别等分为312小片。157小片用于细胞活性研究,随机分为4组:阴性对照组、阳性对照组、平衡盐溶液（BSS）组和DW组（BSS或DW分别浸泡囊膜1、2或3分钟）,分析各组细胞活性指标差异。125小片囊膜随机分为2组:BSS联合冲洗组和DW联合冲洗组（BSS或DW分别浸泡囊膜1、2或3分钟后,70cm瓶高处BSS冲洗囊膜1分钟）,分析各组LECs脱落百分比差异。各取15小片囊膜分别行苏木素-伊红（HE）染色及透射电子显微镜（TEM）检查,分析DW处理后的组织病理学变化。结果:（1）DW对LECs活性的影响:DW 2、3分钟组较阴性对照组LECs密度降低,LECs死亡数和死亡率增加有统计学差异。作用时间相同时,DW与BSS相比LECs死亡数和死亡率增加有统计学差异。DW 3分钟组引起LECs死亡数和死亡率增加的作用最显着。（2）DW对LECs的清除作用:DW联合或不联合冲洗各处理组较阴性对照组LECs脱落百分比增加有统计学差异。作用时间相同时,DW联合冲洗较单用DW处理LECs脱落百分比增加有统计学差异。DW 3分钟联合冲洗组引起LECs脱落百分比增加的作用最显着。（3）DW对LECs显微结构的影响:HE染色结果示DW 1、2、3分钟组细胞破坏,DW 2、3分钟组LECs部分脱落。（4）DW对LECs超微结构的影响:TEM结果示DW 1、2、3分钟组细胞溶解破坏,细胞器肿胀,细胞间连接破坏;DW 1、2分钟组细胞与囊膜连接疏松,DW 3分钟组细胞与囊膜部分分离。结论:（1）DW处理人眼离体前囊膜LECs 2或3分钟均可明显降低细胞活性,导致LECs死亡;DW 3分钟引起LECs死亡的作用最显着。（2）DW 1、2或3分钟联合BSS冲洗均可有效清除人眼离体前囊膜LECs;DW 3分钟联合冲洗清除LECs的作用最显着。（3）DW处理后LECs的组织病理学变化提示LECs坏死。第二部分蒸馏水对人晶状体上皮细胞作用的分子机制目的:研究蒸馏水（DW）能否诱导LECs凋亡,及引起凋亡的有效及最佳作用时间。研究DW引起LECs凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9水平变化的有效及最佳作用时间。方法:选取人晶状体上皮细胞（LECs）SRA01/04细胞系,分为4组:阴性对照组、阳性对照组、平衡盐溶液（BSS）组和DW组（BSS或DW分别处理SRA01/04细胞30秒,1、2或3分钟后继续培养24小时）。通过流式细胞术检测细胞是否凋亡,分析各组细胞凋亡率差异;通过蛋白质印迹法检测细胞Bax、Bcl-2,Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白水平变化,比较各组凋亡蛋白水平差异。结果:（1）流式细胞术:DW 2和3分钟组较阴性对照组SRA01/04细胞总凋亡率和晚期凋亡率增加有统计学差异;DW 3分钟组较阴性对照组细胞早期凋亡率增加有统计学差异。作用时间为2或3分钟时,DW较BSS细胞总凋亡率及晚期凋亡率增加有统计学差异。DW 3分钟组引起细胞凋亡率增加的作用最显着。（2）蛋白质印迹法:DW 2和3分钟组较阴性对照组Bax、Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低有统计学差异。作用时间为1、2或3分钟时,DW较BSS Bax、Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低有统计学差异。DW 3分钟组引起细胞凋亡蛋白水平变化的作用最显着。结论:（1）DW处理2或3分钟可引起LECs凋亡,且主要引起细胞晚期凋亡。DW 3分钟引起LECs凋亡的作用最显着。（2）DW处理2或3分钟可引起Bax、Cleaved caspase 3和Cleaved caspase 9蛋白水平增加,Bcl-2蛋白水平降低,导致LECs凋亡。DW 3分钟组凋亡相关蛋白水平变化最显着。
朱明月[5]（2020）在《IGFBP5通过内质网应激调控人晶状体上皮细胞凋亡和增殖的作用及机制的研究》文中提出背景:白内障是占据世界首位的“可避免盲”性眼病,随着社会老龄化的进展,年龄相关性白内障（Age-related cataract,ARC）的患病率将逐渐增高。内质网应激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）介导的晶状体上皮细胞凋亡学说在众多ARC发病机制学说中占重要地位。本课题组前期研究表明胰岛素样生长因子结合蛋白5（Insulin-like growth factor binding protein 5,IGFBP5）可能是参与人晶状体上皮细胞ERS调控的重要蛋白。目前已有研究发现ARC患者晶状体上皮细胞IGFBP5表达明显低于透明晶状体,揭示了IGFBP5与ARC的发生发展密切相关。IGFBP5作为胰岛素样生长因子家族的重要成员,广泛参与胰岛素样生长因子轴信号对细胞增殖、分化和凋亡等重要生命活动的调节。但是IGFBP5在ARC发病机制中的作用相关研究尚未见报道,有待深入研究。目的:1.观察氧化应激条件下人晶状体上皮细胞中IGFBP5的表达变化。2.研究IGFBP5在人晶状体上皮细胞中通过内质网应激对细胞增殖和凋亡的调控作用以及可能机制。方法:第一部分:筛选合适的过氧化氢（H2O2）处理浓度,构建人晶状体上皮细胞系HLE-B3氧化应激细胞模型,并采用实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）和蛋白印迹法（Western blot）技术检测氧化应激条件下IGFBP5m RNA和蛋白的表达变化。第二部分:以慢病毒为转染工具,构建并筛选IGFBP5过表达及下调表达稳定转染细胞系,经适宜浓度H2O2处理细胞后进行IGFBP5基因功能验证。采用CCK-8法（Cell counting kit-8）检测细胞增殖能力,Annexin V-PE/7-ADD双染流式细胞术检测细胞凋亡百分比,q RT-PCR和western blot检测IGFBP5、IGF-1以及内质网应激相关GRP78、CHOP、caspase-12在m RNA和蛋白表达水平的变化。结果:第一部分:筛选出合适的H2O2处理浓度为155.3μmol/L。在氧化应激条件下,HLE-B3细胞中IGFBP5 m RNA和蛋白的表达明显下调。第二部分:成功构建并筛选IGFBP5过表达及干扰表达稳定转染的HLE-B3细胞系。HLE-B3细胞经H2O2处理后ERS激活,表现为GRP78、CHOP、caspase-12m RNA和蛋白表达上调,细胞增殖减低、凋亡率增加。氧化应激状态下HLE-B3细胞中IGF-1 m RNA和蛋白表达与IGFBP5同步下调。在H2O2处理细胞中:IGFBP5过表达组IGF-1 m RNA和蛋白表达上调,与对照组相比ERS受抑制,细胞增殖率增加、凋亡率减少,GRP78、CHOP、caspase-12 m RNA和蛋白表达下降;IGFBP5干扰表达组IGF-1 m RNA和蛋白表达下调,与对照组相比ERS加重,细胞增殖率下降、凋亡率增加,GRP78、CHOP、caspase-12 m RNA和蛋白表达上调。结论:1.IGFBP5与ARC的发生发展密切相关。2.在氧化应激状态下,IGFBP5过表达可以上调IGF-1并通过抑制ERS,减少人晶状体上皮细胞凋亡、促进细胞增殖;而IGFBP5干扰表达则抑制IGF-1表达,通过加剧ERS促进人晶状体上皮细胞凋亡、抑制细胞增殖。3.在人晶状体上皮细胞中,IGFBP5可通过与IGF-1相互作用来调控ERS以及相关的细胞凋亡和增殖。
乌日古莫拉[6]（2020）在《高次非球面人工晶状体植入术后后囊膜混浊的临床效果观察》文中认为背景目的:目前全球因白内障（cataracts）致盲患者总数已经超过2千万人,占据全球视力（visual acuity,VA）低下总人数的46%。随着全球人口的普遍老龄化,白内障的发生率逐渐增多,白内障的防治工作也越来越迫切。白内障摘除联合人工晶状体（intraocular lens,IOL）植入术是目前临床上最常见的白内障的治疗方法,但术后随着时间推移会发生一系列并发症,而后囊膜混浊（posterior capsular opacification,PCO）是白内障术后最常见的长期并发症之一。如何有效避免PCO是目前国内外学者一直在研究的问题。在现代手术的日益更新和IOL的不断改良下,PCO的发生率在一定程度上降低,但仍未完全防治。IOL的材料和设计方面如何有效预防PCO是众多学者一致研究的方向。本研究旨在研究探讨高次非球面IOL植入术后PCO的临床效果,以期为临床治疗白内障提供一种理论和实验依据。资料方法:选取2018年11月至2019年11月在赤峰学院附属医院眼科住院手术的老年性白内障（senile cataract）患者79例（90眼）,其中男36例（42眼）,女43例（48眼）。年龄在60～75岁之间,根据植入IOL的不同,将老年性白内障患者分为两组,观察组（植入A1-UV:爱博诺德（北京）医疗科技有限公司生产）45眼,对照组（植入Aqua Sense PAL:美国Aaren公司生产）45眼。手术均是白内障超声乳化吸除（phacoemulsification,PHACO）联合IOL植入术。由眼科医师对其进行定期（术后1个月、3个月、6个月）随访,并分析比较两组术眼的最佳矫正视力（best corrected visual acuity,BCVA）、术后 PCO 发生率、角膜水肿（corneal edema）、眼压（intraocular pressure,IOP）、前房炎症（anterior chamber inflammation）反应等指标。结果:1.两组间性别、眼别比较,差异均无统计学意义。2.两组间年龄比较,差异无统计学意义。3.术后1个月BCVA:观察组术后1月的BCVA当中<4.5者2眼,4.5-4.7者3眼,≥4.8者40眼,与对照组比较,Z=0.263,P>0.05,两组差异无统计学意义。4.术后3个月BCVA:观察组术后3月的BCVA当中<4.5者3眼,4.5-4.7者4眼,≥4.8者38眼,与对照组比较,Z=2.476,P<0.05,两组差异有统计学意义。5.术后6个月BCVA:观察组术后6月的BCVA当中<4.5者6眼,4.5-4.7者11眼,≥4.8者28眼,与对照组比较,Z=2.333,P<0.05,两组差异有统计学意义。6.术后1个月PCO发生率:观察组术后1月的PCO的发生例数为0级45眼,1级0眼,2级0眼,3级0眼,4级0眼,与对照组比较,Z=0.978,P>0.05,两组差异无统计学意义。7.术后3个月PCO发生率:观察组术后3月的PCO的发生例数为0级41眼,1级4眼,2级0眼,3级0眼,4级0眼,与对照组比较,Z=0.689,P>0.05,两组差异无统计学意义。8.术后6个月PCO发生率:观察组术后6月的PCO的发生例数为0级34眼,1级9眼,2级2眼,3级0眼,4级0眼,与对照组比较,Z=2.074,P<0.05,两组差异有统计学差异。结论:1.PHACO联合植入A1-UV人工晶状体相比植入Aqua Sense PAL人工晶状体更能有效预防PCO。2.相比植入Aqua Sense PAL人工晶状体,植入A1-UV人工晶状体在术后能保留患者BCVA。
刘玉梅兰[7]（2020）在《RAGE在糖尿病性白内障前囊膜及体外培养的人晶状体上皮细胞中的表达》文中认为目的研究晚期糖基化终末产物受体（the receptor for advanced glycation end products,RAGE）在糖尿病性白内障（diabetic cataract,DC）患者及年龄相关性白内障（age related cataract,ARC）患者前囊膜中的表达,体外实验检测不同浓度高糖对人晶状体上皮细胞（lens epithelial cells,LECs）RAGE的表达及凋亡的影响,为研究DC的发病机制及防治方法提供新的思路。方法（1）选取DC患者26例（30只眼）,ARC患者24例（30只眼）,收集其晶状体前囊膜,记录DC患者的年龄、糖尿病病程及糖化血红蛋白（hemoglobin A1c,Hb A1c）水平,记录ARC患者的年龄。用蛋白质印迹法（Western Blot,WB）法检测RAGE在前囊膜中的表达。ARC患者根据年龄分为:A1组（50-69岁）,A2组（70-89岁）。DC患者根据年龄及Hb A1c水平分为:D1组（50-69岁,Hb A1c为7.0%-12%）,D2组（50-69岁,Hb A1c为4.0%-7.0%）,D3组（70-89岁,Hb A1c为7.0%-12%）,D4组（70-89岁,Hb A1c为4.0%-7.0%）。比较并分析RAGE在DC及ARC前囊膜表达的差异及与各项临床资料的关系。（2）体外实验培养人LECs,分组为:A0组:DMEM培养液;A1组:添加10mmol/L葡萄糖的培养液;A2组:添加20mmol/L葡萄糖的培养液;A3组:添加30mmol/L葡萄糖的培养液,A4组:添加30mmol/L甘露醇的培养液。培养于六孔板上,每组设2个复孔,培养48h后,WB法检测RAGE的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。比较各组细胞的RAGE蛋白条带灰度值及凋亡率在不同培养液中有无差异,分析细胞凋亡率与培养液添加葡萄糖的浓度的相关性。采用SPSS 24.0软件进行统计学分析,采用Kolmogorov-Smirnov检验数据的正态性,若符合正态分布采用单样本的t检验,若不符合则采用Wilcoxon检验。细胞凋亡率与葡萄糖浓度的相关性采用spearman秩相关分析。结果（1）患者前囊膜RAGE表达水平为:（1）ARC患者,A2组灰度值大于A1组,说明ARC患者年龄越大,前囊膜的RAGE表达越高;（2）DC患者,D1组灰度值大于D2组,D3组大于D4组,说明DC患者Hb A1c水平越高,前囊膜的RAGE表达越高;（3）不同年龄患者,D1组灰度值大于A2组及D4组,说明Hb A1c水平对RAGE表达程度的影响较年龄的影响大。（2）（1）RAGE在培养液添加了葡萄糖的各组细胞中的表达程度高于DMEM培养液组,差异有统计学意义（P=0.001）;RAGE在培养液添加了葡萄糖的各组细胞中的表达程度高于甘露醇培养液组,差异有统计学意义（P<0.001）。（2）培养液添加了葡萄糖的的各组细胞凋亡率高于DMEM培养液组,差异有统计学意义（P=0.002）;培养液添加了葡萄糖的的各组细胞凋亡率高于甘露醇培养液组,差异有统计学意义（P=0.002）;培养液添加了葡萄糖的的各组细胞凋亡率与所添加葡萄糖浓度呈正相关（相关系数r=0.892,P<0.001）。结论RAGE在DC患者前囊膜的表达高于ARC,同等年龄下Hb A1c越高RAGE表达越多;葡萄糖浓度越高,人LECs的RAGE表达越多,LECs凋亡率越高。推测RAGE可能参与了白内障的形成,并加速了糖尿病患者的白内障进展。
罗泓杨[8]（2020）在《胶原、HSP47、MMP-2以及TIMP-1在TAO患者眶周组织中的表达特点》文中研究表明目的:通过观察胶原（I、III、V型）、热休克蛋白47（HSP47）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）以及基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）在甲状腺相关性眼病（TAO）患者球后脂肪与眼外肌组织中的表达特点探索其在TAO患者眶周组织纤维化过程中的意义。方法:于2019.5-2019.9月期间收集明确诊断为静止期TAO患者（共8例）的球后脂肪组织4例以及眼外肌组织4例（TAO组）,同期收集因眼外伤或眼球萎缩到我院行眼球摘除术患者的球后脂肪组织4例（对照组）与因斜视到我院行斜视矫正手术患者的眼外肌4例（对照组）。TAO组和对照组患者均无活动性炎症。通过HE染色、Masson染色实验对组织行病理检测,分析样本中胶原表达及纤维化程度的差异;通过实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time Quantitative polymerase chain reaction,q RT-PCR）检测组织中的胶原（I、III、V型）、MMP-2、TIMP-1以及HSP47的m RNA相对表达水平;通过蛋白质免疫印迹实验（Western Blot,WB）检测胶原（I、III、V型）、HSP47、MMP-2以及TIMP-1蛋白表达情况;使用SPSS17.0对Western-Blot以及q RT-PCR的数据进行正态性检验,均呈正态分布,分别进行独立样本T检验并使用Graphpad Prism8.0绘制统计图。结果:1.TAO患者眼眶影像学检查的特点:与对照组相比,TAO患者双眼眼球明显突出,球后脂肪容量明显增加,间隙不清,与周围组织边界模糊。2.TAO患者球后脂肪与眼外肌组织内HE染色实验结果的特点（1）在球后脂肪组织中:TAO组患者组织结构较对照组欠完整;脂肪细胞明显增多,大小不一且形态不清晰,部分细胞明显水肿。（2）在眼外肌组织中:对照组眼外肌组织正常结构完全消失,形态模糊;肌细胞少见,排列紊乱无规则;TAO组正常结构尚存在,形态较清晰,肌纤维数量明显高于对照组,分布较为集中,排列较为规律,横截面积大小不一。3.TAO患者球后脂肪与眼外肌组织内Masson染色实验结果的特点:（1）在球后脂肪组织中:Masson染色显示TAO组胶原纤维表达明显高于对照组,且纤维弥漫性分布,排列较对照组紊乱无规律。（2）在眼外肌组织中:对照组中肌纤维明显少于TAO组,而胶原纤维表达则明显高于TAO组,呈弥漫性分布,排列紊乱无规律。4.胶原、HSP47、MMP-2及TIMP-1在TAO患者球后脂肪与眼外肌组织中m RNA相对表达水平的特点:q RT-PCR结果示与对照组相比,TAO组胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的m RNA相对表达水平均无差异;5.胶原、HSP47、MMP-2和TIMP-1在TAO患者球后脂肪与眼外肌组织中蛋白表达的特点:（1）在球后脂肪组织中:与对照组相比,TAO组胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、HSP47、MMP-2以及TIMP-1的蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义;（2）在眼外肌组织中:与TAO组相比,对照组中胶原Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ、HSP47、MMP-2以及TIMP-1的蛋白表达水平高于TAO组,差异有统计学意义;结论:1.TAO患者球后脂肪组织中I、Ⅲ、V型胶原,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的表达高于眼外伤或眼球萎缩患者,纤维化程度也更高。2.斜视患者眼外肌组织中I、Ⅲ、V型胶原,MMP-2、TIMP-1以及HSP47的表达高于TAO患者,纤维化程度也更高。3..HSP47在TAO患者眼外肌中表达,但其与眼外肌的纤维化的关系尚需要通过选择更佳的对照组行进一步研究进行验证。
陈水龄[9]（2020）在《姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究》文中研究指明第一章目的采用 532nm倍频激光建立实验性脉络膜新生血管（Choroidal Neovascularization,CNV）动物模型,为CNV的相关基础研究提供模型参考。方法1.应用532nm倍频激光光凝棕色挪威（Brown Norway,BN）大鼠建立实验性CNV模型,分别在光凝后1d、3d、5d、7d、14d、21d采用眼底照、眼底荧光血管造影（Fundus Fluorescein Angiograph,FFA）和吲哚菁绿血管造影（Indocyanine green Angiography,ICGA）观察光凝后不同时间点 CNV 的变化情况。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察光凝后不同时间点CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学染色法观察光凝后不同时间点CNV眼组织中CD105因子表达的情况。结果1.光凝后1d光斑处无荧光素渗漏;光凝后3d、5d仅有少量光斑处有荧光素渗漏。光凝后7d CNV生成率为70.18%,荧光素渗漏平均光密度值为128.30±11.21。光凝后14d CNV生成率为78.18%,平均光密度值为182.12±6.59,与光凝后7d组比较差异有统计学意义（P<0.05）。光凝后21d,CNV生成率和荧光素渗漏平均光密度值与光凝后14d组比较差异无统计学意义。2.HE染色结果显示:随着光凝后时间的增加,CNV中央厚度逐渐增加,光凝后7d CNV厚度为48.92±2.81μm,较光凝后1d显着增加（P<0.05）;光凝后14d CNV厚度为61.98±5.06μm,较光凝后7d显着增加（P<0.05）;光凝后21d CNV厚度为61.78±4.03μm,与14d组比较差异无统计学意义。3.CD105免疫组化结果显示:正常组视网膜组织CD105表达呈阴性,光凝后1d、3d、5d组光斑处可见少量棕黄色反应物表达,光凝后7d组光斑处棕黄色反应物逐渐增多（P<0.05）,光凝后14d组较光凝后7d组比较显着增加（P<0.05）,光凝后21d组与光凝后14d组比较差异无统计学意义。结论1.应用532nm激光光凝可以成功建立BN大鼠实验性CNV动物模型。2.CNV在光凝后7d至14d生长迅速,至21d逐渐稳定,此模型具有成模速度快,成模率高、重复性好、成本低的优点,可作为CNV基础研究的动物模型。3.眼底照、FFA、ICGA、HE染色和免疫组化检查可以动态观察CNV的变化。第二章目的观察中药单体姜黄素对BN大鼠实验性CNV的抑制作用,以及对AKT/p-AKT/HIF-1 α/VEGF信号通路活性的影响,为姜黄素治疗CNV提供实验依据。方法1.应用532nm倍频激光光凝诱导BN大鼠建立CNV模型,造模后的大鼠被随机分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组,在光凝后14d进行眼底照、FFA与ICGA检查。2.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用HE染色法观察不同组CNV中央厚度。3.制作BN大鼠CNV眼组织病理学标本,采用免疫组织化学法观察不同组CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的表达情况。4.采用RT-qPCR法检测CNV眼组织中AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子mRNA的相对表达量。5.采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测CNV眼组织中AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路各因子蛋白的相对表达量。结果1.正常组未打激光,模型组,雷珠单抗组,姜黄素低、中、高剂量组CNV生成率分别为78.18%、73.21%、77.19%、75.86%、74.55%,组间比较差异无统计学意义;荧光素渗漏平均光密度值分别为182.12±6.59、119.22±8.03、166.45±8.33、164.34±5.69、149.22±6.45;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中、高剂量组较雷珠单抗组显着升高（P<0.05）,其中姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。2.HE染色结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织各层结构清晰、排列整齐。光凝后14d,雷珠单抗组CNV中央厚度较模型组显着减少（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着减少（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。3.免疫组化结果显示:正常组BN大鼠视网膜组织结构中AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子表达呈阴性,未见棕黄色反应物。光凝后14d,模型组光斑处AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）;姜黄素低剂量组、中剂量组AKT、p-AKT、HIF-1α、VEGF因子的表达与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组的表达较模型组显着降低（P<0.05）;较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。4.mRNA结果显示:光凝后14d,模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。5.Westernblot结果显示:光凝后14d,AKT蛋白各组间比较差异无统计学意义。p-AKT蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。HIF-1α蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低、中剂量与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,较雷珠单抗组显着增加（P<0.05）。VEGF蛋白相对表达量模型组较正常组显着增加（P<0.05）,雷珠单抗组较模型组显着降低（P<0.05）,姜黄素低剂量组与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）。结论1.高剂量姜黄素（400mg/Kg/d）对激光诱导的BN大鼠实验性CNV的形成具有抑制作用。2.姜黄素抑制BN大鼠实验性CNV的机制可能与抑制AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路的激活,降低相关因子的表达有关。第三章目的观察姜黄素对氯化钴（CoCl2）诱导的人视网膜色素上皮细胞株-19（adult retinal pigment epithelial cell line-19,ARPE-19）细胞缺氧模型中 AKT、HIF-1 α 和VEGF因子mRNA及蛋白表达的影响。方法1.采用CoCl2诱导ARPE-19细胞建立化学性缺氧模型,应用CCK-8法筛选造模试剂CoCl2、实验药物姜黄素和阳性对照药雷珠单抗的浓度,同时检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞活性的影响。2.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用RT-qPCR法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、HIF-1α和VEGF mRNA表达量的影响。3.将ARPE-19细胞分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,应用Westernblot法检测姜黄素对CoCl2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型AKT、p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达量的影响。结果1.CCK-8细胞活性检测:随着CoCl2浓度的增加,ARPE-19细胞活性呈现先增长后抑制,当CoCl2终浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。姜黄素终浓度在0-100μM时,ARPE-19细胞活性未见异常;当浓度≥200μM时,细胞活性显着降低（P<0.05）。雷珠单抗在终浓度为20μg/mL时,细胞活性较CoCl2组显着降低（P<0.05）,与正常组比较差异无统计学意义;当浓度为40μg/mL、80μg/mL时,细胞活性较CoCl2组和正常组均显着降低（P<0.05）。因此,我们选择终浓度100μM的CoCl2作为造模浓度;终浓度6.25μM、25μM、100μM的姜黄素作为低、中、高剂量组浓度;终浓度为20μg/mL的雷珠单抗作为阳性对照药物的浓度。2.RT-qPCR结果显示:模型组AKT、HIF-1α和VEGF mRNA相对表达量均高于正常组（P<0.05）;雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）;姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）;姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）;与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.Westernblot结果显示:AKT蛋白相对表达量各组间比较差异无统计学意义。p-AKT和HIF-1α蛋白相对表达量模型组均高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组均低于模型组（P<0.05）,姜黄素低、中剂量组与模型组比较差异无统计学意义（P<0.05）,姜黄素高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。VEGF蛋白相对表达量模型组高于正常组（P<0.05）,雷珠单抗组低于模型组（P<0.05）,姜黄素低剂量与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中、高剂量组较模型组显着降低（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.应用CoCl2可成功建立APRE-19细胞化学缺氧模型。2.CoCl2在终浓度为100μM时可增加细胞中AKT、HIF-1α和VEGF mRNA及p-AKT、HIF-1α和VEGF蛋白的表达量。3.高剂量姜黄素（100μM）可降低CoCl2诱导的ARPE-19细胞中AKT、HIF-1α和 VEGF mRNA 及 p-AKT、HIF-1α 和 VEGF 蛋白的表达。4.姜黄素（100μM）对CoCl2诱导ARPE-19细胞缺氧具有保护作用。第四章目的观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）细胞增殖、迁移、侵袭和管腔形成的影响。方法1.将ARPE-19细胞条件培养液分为正常组、模型组、雷珠单抗组、姜黄素低、中、高剂量组,分别作用于HUVEC细胞;采用CCK-8法观察ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响。2.采用细胞划痕实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的水平迁移的影响。3.采用Transwell小室迁移实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的垂直迁移的影响。4.采用Transwell小室侵袭实验观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞的侵袭的影响。5.采用Matrigel基质胶管腔形成实验,观察在非接触情况下ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞管腔形成的影响。结果1.ARPE-19细胞的各组条件培养液对HUVEC细胞活性的影响,组间差异无统计学意义。2.HUVEC细胞水平迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞水平迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组水平迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）、高（100μM）剂量组水平迁移较模型组显着减少（P<0.05）,其中,高剂量组与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。3.HUVEC细胞垂直迁移实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞垂直迁移显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组垂直迁移显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组垂直迁移与模型组比较差异无统计学意义,姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组垂直迁移较模型组显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。4.HUVEC细胞侵袭实验结果显示:与正常组比较模型组HUVEC细胞侵袭显着增加（P<0.05）;与模型组比较雷珠单抗组细胞侵袭显着减少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）、中（25μM）剂量组细胞侵袭与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素条件培养液高（100μM）剂量组较模型组细胞侵袭显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。5.HUVEC细胞管腔形成实验结果显示:模型组管腔形成较正常组显着增加（P<0.05）;雷珠单抗组管腔形成较模型组显着较少（P<0.05）;姜黄素条件培养液低（6.25μM）剂量组管腔形成与模型组比较差异无统计学意义;姜黄素中（25μM）、高（100μM）剂量组管腔形成与模型组比较显着减少（P<0.05）,与雷珠单抗组比较差异无统计学意义。结论1.ARPE-19细胞姜黄素低（6.25μM）、中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可显着抑制HUVEC细胞水平迁移;其中高剂量组条件培养液可显着抑制HUVEC细胞垂直迁移。2.ARPE-19细胞姜黄素高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞侵袭。3.ARPE-19细胞姜黄素中（25μM）、高剂量组（100μM）条件培养液可抑制HUVEC细胞管腔形成。4.姜黄素可在细胞水平抑制血管的生成。
王蕊[10]（2020）在《microRNA-34a-Notch在后发性白内障、晶状体再生及角膜上皮损伤修复的表达特征及作用初探》文中研究表明目的后发性白内障（posterior capsular opacification,PCO）是现代白内障手术后常见并发症之一,残留的晶状体上皮细胞（lens epithelial cells,LECs）发生上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是PCO发生的病理基础。EMT也是恶性肿瘤发生的关键机制,Notch信号的上调、下调或结构改变与多种恶性肿瘤的发生关系密切。micro RNA34a（mi R-34a）作为一种有效的抑癌基因,其上调可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。本研究通过活体动物模型探讨mi R-34a/Notch信号通路在LECs-EMT表型获得中的作用。鉴于晶状体再生过程是PCO进程的延续;角膜上皮与晶状体在胚胎发育早期具有相同的组织来源;活体动物前房内注入Notch信号通路阻滞剂（DAPT）对眼前节所有组织结构都会产生相应影响等原因,本研究一并观察mi R-34a/Notch信号通路在晶状体再生及角膜上皮损伤修复中的作用机制,以及其改变对这两种生物学进程的影响。方法第一部分:构建大鼠PCO模型,眼前节照相、HE染色比较正常组及前房内分别注入1μmol、5μmol DAPT组PCO的发展变化,RT-q PCR检测各组中后囊膜组织标本的Notch信号通路标志物表达,包括受体Notch1、Notch2,配体Jag1、DLL1及下游基因Hes1;EMT过程转化因子标志物表达,包括Snail,Slug及锌指E-box结合同源框1;间充质细胞标志物表达,包括α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白及细胞核增殖标志Ki67以及mi R-34a的表达;第二部分:构建大鼠晶状体再生模型,眼前节照相、HE染色观察晶状体再生的形态学改变,RT-q PCR检测再生晶状体组织标本的Notch信号通路标志物表达,包括受体Notch1、Notch2,配体Jag1;晶状体纤维标志物表达,包括晶状体蛋白,串珠状纤维结构蛋白1及水通道蛋白;晶状体生长诱导因子表达,包括纤维母细胞生长因子2以及mi R-34a的表达;第三部分:构建大鼠角膜上皮损伤修复模型,眼前节照相、HE染色比较正常组及结膜下注射1μmol、5μmol DAPT组上皮损伤修复的发展变化,RT-q PCR检测各组中角膜组织标本的Notch信号通路标志物表达,包括受体Notch1、Notch2,配体Jag1;角膜上皮细胞标志物表达,包括闭锁连接蛋白1,角蛋白12及细胞核增殖标志Ki67以及mi R-34a的表达。结果1.大鼠PCO模型研究发现,Notch信号通路表达在晶状体囊外摘出术（extracapsular lens extraction,ECLE）术后3天（day,d）开始升高,7-14d达到高峰,21-28d左右回到基线,EMT重要转化因子和间充质细胞标志物随时间轴的变化规律与其高度一致;mi R-34a表达在ECLE术后渐降低,7d左右达到低谷,14d开始逐渐升高,28d时成倍数增加。5μmol DAPT前房内注射后,抑制Notch通路的同时也抑制了EMT的发展进程,3-14d时抑制效果更为显着;而mi R-34a的表达升高,7-14d时与正常组相比差异具有统计学意义;2.大鼠晶状体再生模型研究发现,ECLE术后30d左右,再生晶状体纤维细胞增殖较快,至术后60d-90d时基本达到正常晶状体大小,但再生晶状体内部可见部分混浊,结构错乱、松散。晶状体再生过程中,mi R-34a表达升高,靶向负调控Notch信号通路相关标志物表达下降,促进已分化的晶状体纤维细胞增殖,但晶状体纤维标志物及晶状体生长诱导因子的表达均低于正常,差异具有统计学意义;3.大鼠角膜上皮损伤模型研究发现,Notch通路相关标志物表达在伤后逐渐降低,24-48h达到最低谷,后逐渐回升,至72h时仍未升至正常未损伤状态时的表达水平;而mi R-34a表达在伤后逐渐升高,至24h左右达到高峰,后逐渐降低,至观察结束时,其表达尚未回到正常未损伤状态,mi R-34a的表达变化与Notch信号通路的表达变化呈负相关。修复早期,mi R-34a表达升高,Notch信号通路表达降低,促进上皮细胞增殖,创面快速愈合;修复中晚期,mi R-34a表达降低,Notch信号通路表达升高,抑制上皮细胞过度增殖,促进分化,从而促进了角膜上皮层屏障功能的恢复。5μmol DAPT结膜下注射后,有效抑制Notch信号通路的同时促进上皮细胞分化及屏障功能的恢复,但对增殖无明显影响。结论PCO发生过程中,mi R-34a-Notch信号通路调控LECs-EMT的变化,5μmol DAPT前房内注射的抑制效果更为显着,将mi R-34a-Notch信号通路作为靶点可能为未来PCO的治疗提供新的思路和方向;晶状体再生过程中,mi R-34a表达升高,靶向负调控Notch信号通路,促进已分化的晶状体纤维细胞增殖,但再生晶状体相关功能和结构低于正常;角膜上皮损伤修复过程中,mi R-34a-Notch信号通路调控上皮细胞在不同时间段增殖和分化的程度,5μmol DAPT结膜下注射,促进修复中晚期上皮细胞的分化及屏障功能的恢复,但对增殖无明显影响。
二、晶状体上皮源生长因子的基础与临床（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、晶状体上皮源生长因子的基础与临床（论文提纲范文）
（1）抗VEGF药物对人晶状体上皮细胞增殖、上皮-间质转化的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 实验结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录A 英文缩略词 |
| 附录B 主要试剂配制 |
| 附录C 个人简历 |
| 附录D 攻读学位期间发表文章情况 |
| 附录E 综述 生长因子对晶状体上皮细胞的作用研究进展 |
| 参考文献 |
（2）长链非编码RNA CCAT1参与转化生长因子TGF-β2介导的晶状体上皮细胞间质化的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英汉缩略词对照表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 综述 LncRNA和转化生长因子在后发性白内障中的应用 |
| 第3章 TGF-β2 诱导晶状体上皮细胞间质转分化以及lncRNA CCAT1 的表达测定 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验试剂及配置方法 |
| 3.1.3 主要实验仪器 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.1.5 统计学处理 |
| 3.2 结果:TGF-β_2诱导SRA01/04 晶体上皮细胞发生EMT过程 |
| 3.2.1 TGF-β_2对SRA01/04 晶体上皮细胞形态学影响 |
| 3.2.2 qPCR检测TGF-β2 诱导SRA01/04 晶体上皮细胞EMT过程 |
| 3.2.3 Western blot检测TGF-β2 诱导SRA01/04 细胞EMT过程 |
| 3.2.4 免疫荧光检测TGF-β2 诱导SRA01/04 细胞EMT过程 |
| 3.2.5 TGF-β2 促进SRA01/04 晶状体上皮细胞CCAT1 的表达 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 lncRNA的低表达扭转TGF-β2 介导的间质化过程 |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.1.1 实验试剂 |
| 4.1.2 实验仪器 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 siRNA沉默CCAT1 的表达 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR检测CCAT1对TGF-β2 诱导的EMT相关蛋白表达的影响 |
| 4.2.3 western blotting检测CCAT1对TGF-β2 诱导的EMT相关蛋白表达的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）二甲双胍对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英汉缩略词 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要实验试剂及实验设备 |
| 2.1.1 实验细胞 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验试剂配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 人晶状体上皮细胞的培养 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 CCK-8 实验 |
| 2.2.4 划痕实验 |
| 2.2.5 Transwell试验 |
| 2.2.6 RT-qPCR实验 |
| 2.2.7 Western blot实验 |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 构建PCO体外模型 |
| 3.1.1 细胞迁移能力检测 |
| 3.1.2 EMT相关分子标记物检测 |
| 3.2 二甲双胍对晶状体上皮细胞增殖能力的影响 |
| 3.3 二甲双胍抑制晶状体上皮细胞迁移和EMT |
| 3.3.1 迁移能力检测 |
| 3.3.2 EMT相关分子标记物检测 |
| 3.4 二甲双胍通过诱导自噬抑制晶状体上皮细胞迁移和EMT |
| 3.4.1 自噬相关分子标记物检测 |
| 3.4.2 迁移能力检测 |
| 3.4.3 EMT相关分子标记物检测 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 后发性白内障防治的最新研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）蒸馏水对人晶状体上皮细胞活性的影响及分子机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 蒸馏水对人晶状体上皮细胞的活性影响及清除作用 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 蒸馏水对人晶状体上皮细胞作用的分子机制 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 药物预防白内障术后晶状体囊膜混浊的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录:中英文缩略词对照 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（5）IGFBP5通过内质网应激调控人晶状体上皮细胞凋亡和增殖的作用及机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 氧化应激条件下IGFBP5在人晶状体上皮细胞中的表达变化 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 第二部分 IGFBP5过表达和干扰表达对人晶状体上皮细胞增殖及内质网应激介导的细胞凋亡的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 胰岛素样生长因子结合蛋白5的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历及在学期间发表的学术论文与研究成果 |
| 致谢 |
（6）高次非球面人工晶状体植入术后后囊膜混浊的临床效果观察（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.1.1 纳入标准 |
| 2.1.2 排除标准 |
| 2.1.3 人工晶状体 |
| 2.1.4 主要仪器、药品 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 术前准备 |
| 2.2.2 手术方法 |
| 2.2.3 术后用药 |
| 2.3 观察指标检查方法 |
| 2.3.1 视力及术后BCVA |
| 2.3.2 术后PCO情况评价 |
| 2.3.3 角膜水肿 |
| 2.3.4 眼压 |
| 2.3.5 前房炎症反应 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 —般资料 |
| 3.1.1 两组间性别、眼别比较 |
| 3.1.2 两组间年龄比较 |
| 3.2 术后BCVA: |
| 3.2.1 术后1个月BCVA |
| 3.2.2 术后3个月BCVA |
| 3.2.3 术后6个月BCVA |
| 3.3 术后PCO发生率 |
| 3.3.1 术后1个月PCO发生率 |
| 3.3.2 术后3个月PCO发生率 |
| 3.3.3 术后6个月PCO发生率 |
| 3.3.4 附图:PCO分级图 |
| 3.4 其他指标的观察 |
| 3.4.1 角膜水肿 |
| 3.4.2 眼压 |
| 3.4.3 前房炎症反应 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 人工晶状体预防后囊膜混浊的研究进展 |
| 1 PCO发生机制 |
| 1.1 晶状体上皮细胞的参与 |
| 1.2 细胞因子的参与 |
| 2 PCO影响因素 |
| 2.1 年龄因素 |
| 2.2 原有疾病因素 |
| 2.3 手术影响因素 |
| 3 IOL预防PCO的作用 |
| 3.1 IOL的材料 |
| 3.2 IOL的光学设计 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）RAGE在糖尿病性白内障前囊膜及体外培养的人晶状体上皮细胞中的表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 RAGE在 DC及 ARC患者前囊膜中的表达 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 RAGE在体外培养的人晶状体上皮细胞中的表达 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 晚期糖基化终末产物及其受体与糖尿病性白内障发生机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历和在校期间论文发表情况 |
| 致谢 |
（8）胶原、HSP47、MMP-2以及TIMP-1在TAO患者眶周组织中的表达特点（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 患者资料与实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 创新点与待完善点 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（9）姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一章 532nm倍频激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型的建立 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 532nm倍频激光建立CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 制备病理学标本 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA及ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 CD105免疫组化结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 CNV模型建立的方法 |
| 5.2 532nm倍频激光诱导BN大鼠建立实验性CNV模型的机制 |
| 5.3 532nm倍频激光诱导BN大鼠CNV模型的评价 |
| 6. 结论 |
| 第二章 姜黄素通过AKT/p-AKT/HIF-1α/VEGF信号通路抑制BN大鼠CNV的实验研究 |
| 1. 实验动物、仪器、耗材与试剂 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器与耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.0 实验药物配制 |
| 2.1 实验分组及给药 |
| 2.2 532nm倍频激光建立实验性CNV模型 |
| 2.3 眼底照相、FFA及ICGA观察CNV变化 |
| 2.4 病理学标本制备 |
| 2.5 HE染色 |
| 2.6 免疫组织化学检测 |
| 2.7 RT-qPCR检测mRNA表达 |
| 2.8 Westernblot检测蛋白表达 |
| 3. 图像分析与统计学方法 |
| 3.1 眼底照、FFA与ICGA图像 |
| 3.2 HE染色图像 |
| 3.3 免疫组化图像 |
| 3.4 RT-qPCR结果分析 |
| 3.5 Westernblot结果分析 |
| 3.6 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 眼底照、FFA与ICGA结果 |
| 4.2 HE染色结果 |
| 4.3 免疫组化结果 |
| 4.4 RT-qPCR结果 |
| 4.5 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 新生血管与中药单体 |
| 5.2 姜黄与姜黄素 |
| 5.3 姜黄素与眼部新生血管 |
| 5.4 CNV的中医认识 |
| 5.5 姜黄素抑制CNV的机制 |
| 6. 结论 |
| 第三章 姜黄素对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞缺氧模型中AKT、HIF-1α和VEGF因子的影响 |
| 1. 实验细胞、试剂、药物及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验药物及溶液的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 ARPE-19细胞复苏、传代与冻存 |
| 2.2 造模试剂CoCl_2、实验药物姜黄素及阳性对照药雷珠单抗浓度的筛选 |
| 2.3 实验分组与干预 |
| 2.4 CCK-8法检测实验各组ARPE-19细胞的活性 |
| 2.5 RT-qPCR检测 |
| 2.6 Westernblot检测 |
| 3. 结果分析与统计学方法 |
| 3.1 CCK-8检测细胞活性结果分析 |
| 3.2 RT-qPCR结果分析 |
| 3.3 Westernblot结果分析 |
| 3.4 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常ARPE-19细胞形态 |
| 4.2 CoCl_2对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.3 姜黄素对ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.4 雷珠单抗对CoCl_2诱导的ARPE-19细胞活性的影响 |
| 4.5 RT-qPCR结果 |
| 4.6 Westernblot结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞缺氧模型的建立 |
| 5.2 CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧模型的机制 |
| 5.3 姜黄素对CoCl_2诱导ARPE-19细胞缺氧的保护作用 |
| 6. 结论 |
| 第四章 非接触共培养体系观察ARPE-19细胞姜黄素的条件培养液对HUVEC细胞形态学的影响 |
| 1. 实验细胞、药物、试剂及仪器 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验试剂的配制 |
| 1.4 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 HUVEC细胞株复苏培养、传代与冻存 |
| 2.2 CCK-8检测 |
| 2.3 划痕实验检测细胞水平迁移 |
| 2.4 Transwell小室法检测细胞垂直迁移 |
| 2.5 Transwell小室法检测细胞侵袭 |
| 2.6 Matrigel基质胶法检测细胞管腔形成 |
| 3. 统计学方法 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 正常HUVEC细胞形态 |
| 4.2 CCK-8结果 |
| 4.3 划痕实验细胞水平迁移结果 |
| 4.4 Transwell小室实验细胞垂直迁移结果 |
| 4.5 Transwell小室实验细胞侵袭结果 |
| 4.6 Matrigel基质胶实验细胞管腔形成结果 |
| 5. 讨论 |
| 5.1 细胞迁移 |
| 5.2 细胞侵袭 |
| 5.3 细胞管腔形成 |
| 6. 结论 |
| 参考文献 |
| 创新性 |
| 不足与展望 |
| 综述一 脉络膜新生血管的发病机制及中西医治疗的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 姜黄素在眼科疾病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间学术表现 |
| 致谢 |
| 附: 查新报告 |
（10）microRNA-34a-Notch在后发性白内障、晶状体再生及角膜上皮损伤修复的表达特征及作用初探（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、miRNA-34a-Notch信号通路在大鼠后发性白内障中的表达特征 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验对象和分组 |
| 1.1.2 实验材料 |
| 1.1.3 实验方法 |
| 1.1.4 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 裂隙灯眼前节像整体观察大鼠PCO状况 |
| 1.2.2 HE染色观察各个时间点PCO发生发展变化特点 |
| 1.2.3 RT-qPCR检测三组大鼠PCO模型生长过程中相关标志物的表达 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 二、miRNA-34a-Notch信号通路在大鼠晶状体再生中的表达特征 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验对象及分组 |
| 2.1.2 实验材料 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 大鼠晶状体再生模型建立并观察模型再生过程 |
| 2.2.2 HE染色观察大鼠晶状体再生结构 |
| 2.2.3 RT-qPCR检测正常对照组和晶状体再生组相关标志物的表达 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、miRNA-34a-Notch信号通路在大鼠角膜上皮损伤修复的表达特征 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验对象及分组 |
| 3.1.2 实验材料 |
| 3.1.3 实验方法 |
| 3.1.4 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 裂隙灯眼前节照相系统观察大鼠角膜上皮损伤修复过程 |
| 3.2.2 HE染色观察观察大鼠角膜上皮损伤修复过程 |
| 3.2.3 RT-qPCR检测大鼠角膜上皮损伤修复过程相关标志物的表达 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 后发性白内障发生发展及治疗的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、晶状体上皮源生长因子的基础与临床（论文参考文献）
- [1]抗VEGF药物对人晶状体上皮细胞增殖、上皮-间质转化的影响[D]. 崔双慧. 蚌埠医学院, 2021(01)
- [2]长链非编码RNA CCAT1参与转化生长因子TGF-β2介导的晶状体上皮细胞间质化的研究[D]. 刘敏. 吉林大学, 2021(01)
- [3]二甲双胍对TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮间充质转化的影响[D]. 王钰池. 中国医科大学, 2021(02)
- [4]蒸馏水对人晶状体上皮细胞活性的影响及分子机制[D]. 张荣沛. 大连医科大学, 2021(01)
- [5]IGFBP5通过内质网应激调控人晶状体上皮细胞凋亡和增殖的作用及机制的研究[D]. 朱明月. 郑州大学, 2020(02)
- [6]高次非球面人工晶状体植入术后后囊膜混浊的临床效果观察[D]. 乌日古莫拉. 内蒙古民族大学, 2020(02)
- [7]RAGE在糖尿病性白内障前囊膜及体外培养的人晶状体上皮细胞中的表达[D]. 刘玉梅兰. 郑州大学, 2020(02)
- [8]胶原、HSP47、MMP-2以及TIMP-1在TAO患者眶周组织中的表达特点[D]. 罗泓杨. 遵义医科大学, 2020(01)
- [9]姜黄素抑制实验性脉络膜新生血管的机制研究[D]. 陈水龄. 中国中医科学院, 2020(01)
- [10]microRNA-34a-Notch在后发性白内障、晶状体再生及角膜上皮损伤修复的表达特征及作用初探[D]. 王蕊. 天津医科大学, 2020(06)