一、两种精液分析方法对精液检测结果的影响(论文文献综述)
王璐[1](2021)在《新疆驴精液保存技术的研究》文中研究指明
张继伟[2](2021)在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究》文中提出背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%~30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症(肾虚肝郁型)具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组(62例)和对照组(62例)。试验组给予金龟毓麟方(制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g)。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液(国药准字:H19990372),服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子(PR)、精子总活力(PR+NP);次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集(PPS)数据进行统计分析。1.主要疗效指标:(1)PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异(P>0.05):治疗8周、12周后可提高PR级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组(P<0.05)。(2)PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力(P<0.05)。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异(P>0.05);治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组(P<0.05)。2.次要疗效指标:(1)中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异(P>0.05);与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分(P<0.05)。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组(P<0.05)。(2)精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异(P>0.05)。(3)精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异(P>0.05)。(4)受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异(P>0.05);②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异(P>0.05)。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能(ALT、AST、BUN、CREA)、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑(Omidazole,ORN)诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、中剂量组、高剂量组)、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/(kg.d)ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/(kg·d)ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/(kg.d)ORN;左卡尼汀组 100mg/(kg·d)+400mg/(kg·d)ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/(kg.d)ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素(FSH、LH、T)、肝肾功(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:(1)大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异(P<0.05)。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组(P<0.05)。(2)大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异(P>0.05)。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:(1)大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异(P>0.05)。(2)大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降(P<0.05)。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数(P<0.05)。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)改变均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.400 mg/(kg·d)ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能(ALT、AST、UREA、BUN、CREA)及性激素(FSH、LH、T)无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组(低剂量组、高剂量组),灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高(P<0.01),SOD与GSH-Px含量降低(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低(P<0.05),SOD与 GSH-Px 含量均升高(P<0.05,P<0.01)。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:(1)线粒体膜电位(Mitochondrial membrane potential,MMP):与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加(P<0.01,P<0.001);与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率(P<0.05,P<0.01)。(2)线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异(P>0.05);高剂量组可提高精子线粒体ATP含量(P<0.01)。3.线粒体自噬相关指标变化:(1)与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(2)与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加(P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(3)与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。(4)与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加(P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。(5)与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加(P<0.05,P<0.01);低剂量组TOM20蛋白表达增高(P<0.05)。(6)与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.001)。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.001)。结论:1.400mg/(kg·d)ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
李锦涛[3](2021)在《运用DNA甲基化和SNP复合标记进行体液来源鉴定和个人识别探究》文中研究指明目的:利用精液特异性甲基化位点确证混合斑中精液的存在,同时利用精液特异性甲基化位点联合的SNP位点确证人群的多态性,并可利用这种多态性进行混合斑中精液供者的个体识别。方法:本课题先利用甲基化敏感型限制性内切酶法(MSRE)对基因组进行酶切,然后利用复合扩增技术(multiplex PCR)和单碱基延伸技术(SBE)对精液、唾液、血液、阴道分泌物特异性的甲基化位点和精液甲基化位点联合的SNP进行检测。构建了针对精液特异性的12个甲基化-SNP联合标记的复合扩增体系,其中甲基化位点12个,SNP位点16个,另外还有唾液、血液、阴道分泌物甲基化位点各一个,方法如下:(1)组织特异性甲基化位点选自文献,同时利用UCSC数据库的common SNP 151数据集在甲基化位点上下游400bp内寻找SNP位点。(2)对筛选出的甲基化-SNP联合标记利用Primer 3软件设计引物,设计时要求在扩增子序列中只有HhaⅠ、HpaⅡ、HpyCH4Ⅳ、BstUⅠ这四种甲基化敏感型限制性内切酶中的一种酶切位点。(3)对设计好的引物进行引物特异性验证,同时对甲基化位点进行组织特异性验证。(4)将所有引物进行复合扩增,并调整复合扩增体系。(5)利用SNaPshot技术检测组织特异性甲基化位点,并同时检测与精液特异性甲基化位点相邻的16个SNP位点,并得出分型结果。(6)对构建好的体系计算法医学参数。结果:1.成功构建了基于毛细管电泳平台(CE)利用SNaPshot技术检测12个精液特异性甲基化-SNP联合标记的体系,其中包括12个甲基化和16个SNP位点,另外还有检测了唾液、血液、阴道分泌物组织特异性甲基化位点各一个。2.对52个中国北方男性的精液进行了多态性统计,体系的个人识别能力达到0.9998。3.成功检测10 ng以上的精液DNA样本。4.可以成功检测精液与其余体液两两构成的混合斑中含量占50%以上的混合斑,并得到其中精液供者的SNP分型。5.可以成功区分由精液、血液、唾液、阴道分泌物四种体液构成的混合斑中组织的来源并得到精液供者的SNP分型。结论:我们建立了一种检测方法可以检测混合斑中精液、唾液、血液、阴道分泌物的组织来源,并可以同时得到精液供者的SNP分型。
徐冰冰[4](2021)在《基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究》文中提出内蒙古绒山羊是我国重要的地方种质资源。优秀种公羊冷冻精液的生产推广,能够提高种公畜的利用效率,加速育种工作进程,为生产带来更高的经济效益。但内蒙古绒山羊冷冻精液活力不稳定,情期受胎率低,解冻后精液品质具有明显的个体抗冻性差异。为了建立一种高效的内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系,本研究以内蒙古绒山羊为研究对象,采集精液,利用统一的冷冻解冻程序进行精液抗冻性筛选,并将其分为高抗冻组(High Freezability,HF)和低抗冻组(Low Freezability,LF),初步评估精子和精浆对内蒙古绒山羊精液抗冻性的影响。对内蒙古绒山羊HF组和LF组精浆进行蛋白质组-代谢组学联合分析,鉴定精浆中影响精液抗冻性的可能因素,其次利用脂质组学分析方法对内蒙古绒山羊HF组与LF组解冻后精子进行脂质差异表征。主要研究结果如下:(1)内蒙古绒山羊精液在冷冻-解冻后呈现抗冻性的个体差异,HF组冷冻解冻后精子各项运动参数以及结构完整性均显着高于LF组。精子和精浆的差异会影响精液抗冻性。(2)利用TMT(Tandem mass tags)标记定量蛋白质组学分析技术,从蛋白水平检测到HF组和LF组精浆间差异显着表达的蛋白质115个,HF组精浆中上调的蛋白质44个,LF组中上调的蛋白质71个。差异蛋白质GO(Gene Ontology)功能富集到22个生物学过程,14个细胞组分,10个分子功能。通过KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析,115个差异蛋白覆盖91条通路。差异表达蛋白中UQCRC1、DNAH1、APOA1、ADAM32、HTT、CADM1、STIP1是内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。(3)利用非靶向代谢组学分析技术,从代谢水平检测HF组和LF组精浆间的差异,在正、负离子电离模式下均能很好地将HF组与LF组精浆区分,二者具有明显代谢差异。在正离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物23种,在负离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物18种,富集到17条代谢通路。变量权重值(Variable Importance for the Projection,VIP)最大的前15种差异代谢物是柠檬酸盐、Pro-Arg、酮异己酸、乙酰肉碱、L-谷氨酰胺、次黄嘌呤、L-焦谷氨酸、20-羟基-前列腺素F2a、15-酮-前列腺素E1、L-亮氨酸、酪胺、泛酸、油酸、L-苯丙氨酸和二氢胸腺嘧啶,这些代谢物可以作为内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。(4)通过蛋白质组-代谢组学联合分析将得到的差异蛋白质和差异代谢物同时向KEGG通路投射,富集到11条通路,差异蛋白质和差异代谢物在矿物质吸收通路上显着富集,其中包含的差异蛋白为LOC102172488和FTH1,差异代谢物分别是L-谷氨酰胺、L-苯丙氨酸和L-亮氨酸。差异蛋白质TF与LOC102172488具有较高的序列一致性,且TF与FTH1均富集在矿物质吸收通路。TF与FTH1在HF组与LF组解冻后精子中均有表达,且LF组中TF蛋白的表达量显着高于HF组,HF组精子中FTH1蛋白的表达量显着高于LF组。检测HF组与LF组精浆中矿物离子的含量,发现HF组精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+含量显着高于LF组。说明Fe的转运、氧化及储存可能影响内蒙古绒山羊精液抗冻性,且精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+的浓度与精液抗冻性有关。(5)利用非靶向脂质组学分析内蒙古绒山羊HF组与LF组冷冻解冻后精子的脂质特征。在正、负离子电离模式下,HF组和LF组精子均能很好的区分,说明两者间存在差异显着的脂质特征。共鉴定到29个脂质亚类,1133个脂质分子,检测到显着差异脂质分子13个,分别其中3个属磷脂酰胆碱亚类(Phosphatidylcholine,PC),10个属甘油三酯亚类(Triglyceride,TG)。说明精子膜上PC分子和TG分子能够显着影响内蒙古绒山羊精子冷冻耐受性。本研究为阐明内蒙古绒山羊精液抗冻性调控机制,基于多组学联合分析分别研究精浆和精子对抗冻性的影响。发现精子和精浆中均存在影响精液抗冻性的因素,并筛选到精浆中影响精液抗冻性的潜在生物标记,且精浆中矿物质离子含量与抗冻性有关;精子的脂质差异是影响解冻后精子活力的关键。通过以上研究,期望对内蒙古绒山羊精液抗冻性有更好的认识,为提高解冻后精液品质,建立内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系提供理论依据。
赵建清[5](2021)在《超长时间低温保存绵羊精液对精子遗传物质的影响》文中研究表明本研究基于绵羊精液稀释液的发展趋势与超长时间低温保存绵羊精液对精子遗传物质的影响,选取大豆卵磷脂稀释液(试验组1)、专利卵黄稀释液(试验组2)及葡-柠稀释液(对照组)对采集的新鲜绵羊精液进行超长时间低温保存,检测在不同时段精子DNA、RNA完整性以及应用效果,以期揭示绵羊精子遗传物质随保存时间变化情况及遗传物质变化对精子质量与辅助生殖结局的影响,为后续超长时间低温保存绵羊精液的生产应用及制定标准制定提供理论基础与试验依据。1.为了确定超长时间低温保存对绵羊精子DNA完整性的影响。本试验采用假阴道法采集新鲜绵羊精液,用三组稀释液进行低温保存,分别选取保存至第0 h、24 h、72 h、144 h、216 h和288 h的绵羊精液进行活率检测,采用TUNEL法及SCGE法进行DNA完整性测定。结果显示:三组稀释液低温保存绵羊精液,随着低温保存时间的延长,绵羊精子DNA损伤呈逐渐上升趋势,其中葡-柠稀释液从第24 h开始极显着高于大豆卵磷脂稀释液和专利卵黄稀释液(P<0.01);而大豆卵磷脂稀释液与专利卵黄稀释液在不同时间点差异不显着,且两种稀释液在保存精液至第216 h时,精子DNA损伤出现显着增加;且试验数据表明精子活率与精子DNA损伤率呈负相关,SCGE法与TUNEL法检测均可作为评价绵羊精子质量的有效方法。2.为了建立绵羊精子RNA有效提取方法并检测精子RNA完整性随超长时间低温保存的变化情况。采用试剂盒法对新鲜绵羊精液进行精子RNA的提取,反转录c DNA及精子RNA质量验证;对三组稀释液低温保存的绵羊精液,分别选取保存至0 h、24 h、72 h、144 h、216 h和288 h的绵羊精液精子进行RNA提取及RNA完整性检测。结果:建立的绵羊精子RNA提取方法,可稳定的提取绵羊精子RNA,所获得的RNA纯度高,质量好,无其他非精子细胞的污染,首次获得绵羊单个精子细胞RNA含量约为40.54 fg;三组稀释液低温保存绵羊精子后,葡-柠稀释液在0-24 h精子RNA完整性与其他两组稀释液无显着性差异,但72 h后就无法获得精子RNA;大豆卵磷脂稀释液与专利卵黄稀释液低温保存绵羊精液,单个精子RNA含量(36.2~45.7 fg)及RNA完整性随保存时间的延长而无下降趋势。3.为了验证绵羊精液超长时间低温保存后是否能够生产健康后代。试验采集新鲜绵羊精液分别用大豆卵磷脂稀释液和专利卵黄稀释液进行低温保存,在低温保存的不同时间点进行精子活率、顶体完整率、质膜完整性及顶体蛋白酶活性检测;并用经两种稀释液低温保存至216 h的绵羊精液及葡-柠稀释液稀释的鲜精对329只同期发情母羊进行人工授精,在授精后进行受胎率、产羔率、母羔率及公母羔初生重检测。结果显示:大豆卵磷脂稀释液与专利卵黄稀释液超长时间低温保存绵羊精液,其精子活率、顶体完整率、质膜完整性及顶体蛋白酶活性均呈逐渐下降趋势;而采用大豆卵磷脂稀释液与卵黄稀释液低温保存第216 h的精液人工授精的受胎率(72.4%vs 73.2%vs 78.5%)、产羔率(126%vs 125%vs 130%)、母羔率(47.88%vs 46.47%vs 51.22%)及公母羔平均初生重均与葡-柠稀释液稀释的鲜精输精无显着性差异。综上所述,大豆卵磷脂稀释液与专利卵黄稀释液超长时间低温保存绵羊精液,精子DNA完整性随保存时间的延长呈逐渐下降趋势,在第216 h出现极显着下降;精子RNA完整性在288h内并不随保存时间的延长而出现显着下降趋势;且绵羊精液超长时间低温保存后人工授精仍可达到良好的受胎效果及产生健康后代。本研究揭示了绵羊精子遗传物质随超长时间低温保存变化的情况及对后代的影响,并有助于超长时间低温保存绵羊精液的生产应用及制定标准。
王艺蒙[6](2021)在《低剂量PAEs及环境多维暴露与男性生殖损害的数学建模研究》文中提出研究背景邻苯二甲酸酯(Phthalates,PAEs)是地表分布最广泛的有机污染物之一,主要作为增塑剂应用于数百种产品中。PAEs作为环境激素类物质可以干扰人体的内分泌功能,长期暴露于PAEs会影响生殖健康,其中包括对于精液质量和性激素水平的影响。鉴于PAEs对健康的危害作用,世界各地对其广泛关注并分别制定了人类摄入量的安全限值。例如美国环保署(Environmental Protection Agency,EPA)制定的参考剂量(Reference doses,RfD)、欧洲食品安全局(European Food Safety Authority,EFSA)制定的每日可容忍摄入量(Tolerable Daily Intakes,TDI)、我国国家食品安全风险评估中心制定的健康指导值等。其中EPA的RfD相对比较严格且全面。然而,现有PAEs的安全限值在生殖损害方面考虑相对较少且缺少人群研究数据的支撑,因此需要结合人群研究,探究现有安全限值在保护男性生殖健康上是否有效。随着研究的深入,科学家们逐渐认识到男性生殖健康受包括环境、心理、行为等多方面因素的调控。无论地方人员还是军队等特殊人群均是如此。现有观点认为单一因素对男性生殖损害的影响较小,而联合多维暴露因素可能更有利于预测男性生殖损伤风险。然而,以往的研究主要是探究单暴露因素和单结局指标间的关联,可能增加研究的发表偏倚。其次,传统的统计方法难以整合多维暴露因素对男性生殖指标进行综合评价。现有资料显示,国内外综合考量多维暴露因素全面评价男性生殖损伤状况的研究方法仍缺乏。为解决上述问题,本研究基于课题组前期建立的重庆市男性大学生生殖健康调查(Male Reproductive Health in Chongqing College Students,MARHCS)人群,探究低剂量PAEs及环境等复杂暴露与男性生殖损害的关系。首先,采用最优尺度回归和Joinpoint模型方法,探究具有RfD的PAEs与男性精液常规参数和性激素水平的关联和阈剂量。其次,采用graph-guided fused lasso(GFLASSO)模型探究包括PAEs在内的环境-心理-行为多维暴露因素与多种男性生殖指标的关联,通过多维暴露因素构建各生殖指标的预测模型。进而基于上述模型,采用层次聚类识别人群中具有不同生殖损害特征的亚群并分析PAEs在不同亚群中的分布特征。研究内容1.低剂量PAEs与精液参数和性激素水平的关联研究及RfD水平下PAEs的男性生殖损害风险评估本研究的研究对象是MARHCS人群在2013年6月招募的796名男性大学生志愿者,采集了研究对象血液、尿液和精液样本。根据《WHO人类精液检验与处理实验室手册》(2010第5版)的要求收集志愿者精液样本并进行精子总数、前向运动和正常形态率等精液常规参数的检测。采用全自动免疫分析仪检测志愿者静脉血中6种性激素:雌激素、卵泡刺激素、黄体生成素、泌乳素、孕酮、睾酮。收集志愿者的中段尿样本,采用高效液相色谱串联质谱(High Performance Liquid Chromatography-tandem mass Spectrometry,HPLC-MS/MS)法对尿液中PAEs代谢产物的浓度进行检测。为进行RfD水平下PAEs的男性生殖损害的风险评估,采用最优尺度回归模型分析探究4种具有RfD的PAEs对应的7种代谢产物(MEP、Mn BP、MBz P、MEHP、MEOHP、MECPP、MEHHP)与精液参数和性激素水平的关联,通过Joinpoint模型识别PAEs与生殖指标关系中是否存在拐点(阈剂量)。对具有阈剂量的PAEs,采用Wittassek等提出的方法计算相应的外暴露水平,并与RfD比较,进行RfD的男性生殖损害风险评估。2.环境/行为/心理因素等多维暴露情况下PAEs与精液参数和性激素水平的关联分析为综合分析复杂暴露情况下PAEs与精液参数和性激素水平的关联,通过问卷调查、生物标志物检测和物理测量方法,调查上述志愿者的生殖健康状况及潜在的影响因素。主要收集了包括PAEs在内的环境、心理、行为等多维暴露因素共138项,测量了包括精液参数和性激素水平、精子染色质结构在内的32项生殖指标。采用GFLASSO模型综合分析每一种暴露因素与生殖指标的关系,筛选标准化回归系数正值最大的2.5%和负值最小的2.5%共220项,构建了对于每一种生殖指标的预测模型。基于上述预测模型,采用层次聚类和T-distributed stochastic neighbor embedding(t-SNE)方法将人群分为不同亚群,探究PAEs在精液质量或性激素水平异常亚群中的水平。研究结果1.低剂量PAEs与精液参数和性激素水平的关联研究及RfD水平下PAEs的男性生殖损害风险评估MARHCS人群中BBz P检出率较低,其余三种PAEs(DEP、Dn BP、DEHP)的暴露水平总体远低于各安全限值:高于RfD的比例分别为0%、0.8%和1.6%;高于Dn BP和DEHP的每日可容忍摄入量(Tolerable Daily Intakes,TDI)的比例分别为2.3%和0.6%;高于DEP、Dn BP、DEHP的健康指导值的比例分别为0.2%、2.3%和0.6%。7种PAEs的代谢产物与性激素和精液常规参数共有12种关联,其中DEP的代谢产物MEP与精子前向运动、正常形态率和睾酮水平相关(P<0.01);Dn BP的代谢产物Mn BP与正常形态率相关(P<0.05);DEHP的4种代谢产物中,MEHHP和MECPP与雌激素水平相关(P<0.05)、MEOHP和MEHP与雌激素和孕酮水平相关(P<0.01)、DEHP总代谢产物与孕酮和雌激素水平相关(P<0.01)。上述关联中,仅DEHP的代谢产物与部分参数的关联中存在拐点。拐点处反推的DEHP外暴露水平低于EPA的RfD(20μg/(kg·d))。2.环境/行为/心理因素等多维暴露情况下PAEs对精液常规参数和性激素水平的关联分析采用GFLASSO的方法分析多维暴露和多种生殖指标的关联。结果提示,各生殖指标均与多种暴露因素相关,在PAEs暴露低于RfD的人群中得出的结果与总体人群基本一致。筛选GFLASSO回归系数正值最大的2.5%和负值最小的2.5%,共220项暴露-结局的关联。其中,PAEs与生殖指标间共存在32项关联。根据筛选出的220项暴露-结局关联搭建各生殖指标的预测方程,预测结果与真实指标之间均呈正相关。通过构建的预测方程可以识别研究人群中存在5个具有不同生殖损伤特征的亚群,分别为(1)精子数量少和精子形态异常;(2)精子DNA碎片化程度较高;(3)精子染色质高染色性;(4)性激素水平异常;(5)精子DNA链断裂等五种。亚群4表现为雌激素和孕酮水平的异常,且PAEs总代谢物的暴露水平为5个亚群中较高。结论:本研究基于MARHCS人群,探究了DEHP等具有RfD的PAEs与精液常规参数和性激素水平的关联和阈剂量。PAEs的代谢产物与性激素水平和精液参数存在12种关联,DEHP与孕酮和雌激素水平的关联存在拐点,对应的人群中外暴露水平远低于RfD,而其它PAEs未发现拐点且在低剂量下仍与性激素水平和精液参数相关,提示PAEs对于男性精液参数和性激素水平可能存在影响,现有的安全限值在保护男性生殖健康方面可能存在不足。在此基础上,通过GFLASSO方法探究多维暴露情况下PAEs等多维暴露因素与精液参数和性激素水平的关联,成功构建了基于多维暴露因素的生殖指标预测模型,且能用于识别人群中具有不同生殖损伤特征的亚群。本研究提出了基于多维暴露因素综合评估人群生殖损伤特征的新方法,对社区男性生殖损伤的防护具有重要的参考价值,同时对保障军人的生殖健康也具有一定的借鉴意义。
窦英杰[7](2021)在《奶绵羊精液冷冻稀释液优化研究》文中研究表明目前,绵羊冻精生产应用还较为局限,原因之一是冷冻后精液的质量较低,导致受胎率偏低。精液冷冻稀释液的优化是提高冷冻精液质量的主要途径。戴瑞(Dairy Meade,DM)奶绵羊体型较大,母羊一胎多羔,具有较高的生产经济效益。本研究旨在通过配方优化探索出适用于奶绵羊的精液冷冻稀释液,为冷冻精液生产应用提供技术支撑。本研究首先对Tris稀释液的甘油浓度进行了优化探索;之后与国标绵羊和山羊稀释液进行冻精质量对比;最后,通过添加不同浓度的白藜芦醇对Tris稀释液进行优化。检测指标包括精子活力、畸形率、顶体完整性、质膜完整性、抗氧化指标和受胎率。研究结果如下:1.添加5%甘油的Tris稀释液冻后精子活力、畸形率、顶体完整性和质膜完整性显着优于4%和6%(P<0.05),表明5%甘油为奶绵羊冻精最适添加浓度。2.与国标绵羊和山羊稀释液相比,添加5%甘油的Tris稀释液冻后精子各项指标显着提高(P<0.05),表明其更适于奶绵羊精液冷冻。3.不同浓度白藜芦醇添加实验结果显示,在0~80μM浓度范围内,精子质量和抗氧化能力随着浓度的增加而提升;而大于80μM时,呈现相反趋势。80μM白藜芦醇添加组的精子活率、顶体完整率、质膜完整率、T-AOC和GSH-Px含量高于其他组,分别为61.36%、54.08%、40.31%、770.21 mmol/L和65.49 U;精子畸形率和MDA含量低于其他组,分别为14.27%和31.98μmol/L。80μM白藜芦醇添加组的冻精进行腹腔镜子宫角输精,情期受胎率高达88.89%。结果表明80μM白藜芦醇为最适添加浓度。综上所述,5%甘油的Tris稀释液中添加80μM白藜芦醇,能够显着提高精子质量和抗氧化能力,该研究为奶绵羊冷冻精液的生产应用提供了技术理论基础。
董贺孟[8](2021)在《秦岭大熊猫精液超低温冷冻保存技术研究》文中研究说明目前大熊猫人工授精的受孕率偏低,使得人工圈养大熊猫的繁殖变得十分困难,及时的开展大熊猫精液品质的研究及其冷冻保存技术研发,对于维持秦岭大熊猫种群数量,建立秦岭亚种种质资源库,走出大熊猫濒危困境具有十分重要的意义。冷冻过程中精子遭受的氧化损伤是影响冻精质量的主要因素,在精子冷冻保存液中添加抗氧化剂,已成为提高家畜冷冻精液品质的重要方法。本试验采用ELISA等技术,通过对秦岭大熊猫精浆指标检测的基础上,探寻精浆指标与秦岭大熊猫精液品质的相关性;分析海带多糖、枸杞多糖和白藜芦醇对大熊猫冷冻精液常规质量指标与线粒体活性等影响,筛选出抗氧化剂添加最佳剂量;观察大熊猫精子冷冻-解冻后超微结构变化,为建立秦岭大熊猫精液超低温冷冻保存技术和提高人工授精的受孕率提供试验数据。试验结果如下:1.采集4只年龄为12~17岁的雄性秦岭大熊猫精液,其鲜精的平均精子活率、质膜完整性和顶体完整性分别为82.75±5.74%、81.04±4.35%以及47.10±8.11%,Panda B和Panda C的精子活率、质膜完整性和顶体完整性显着高于Panda A和Panda D;精浆指标分析结果表明,精浆中酸性磷酸酶和Zn的含量与精子活率、质膜完整性和顶体完整性呈显着正相关;Panda D精浆中ROS含量的增加对精液品质呈显着负相关。2.通过制作冷冻-解冻后大熊猫精子电镜样本,使用扫描和透射电镜技术观察超低温冷冻对大熊猫精子的影响,研究发现超低温冷冻保存后主要对精子头部、颈部造成损伤。3.在冷冻前添加三种抗氧化剂于精液中,通过ELISA等技术进行检测,结果表明,50μM、100μM白藜芦醇和2.0 mg/m L枸杞多糖添加组显着增加冻精解冻后的精子质量和抗氧化能力,且100μM白藜芦醇添加组显着下调ROS的含量;1.0 mg/m L海带多糖、4.0 mg/m L枸杞多糖和联合添加组均可以显着提高精子的抗氧化能力,且联合添加组显着上调精子活力;2.0 mg/m L、4.0 mg/m L枸杞多糖显着上调了精子顶体蛋白酶的活性。白藜芦醇、海带多糖、枸杞多糖通过增加抗氧化酶活性并抑制冷冻过程中ROS的产生,显着提高精子质量。其中50μM白藜芦醇和2.0 mg/m L枸杞多糖在冷冻保护过程中对精子的保护效果最好。综上所述,本研究结果表明,超低温冷冻对大熊猫精子结构造成一定的损伤,通过冷冻保护剂中添加2.0mg/m L枸杞多糖或添加50μM白藜芦醇可以减少大熊猫精液冷冻保存过程中的氧化损伤,提高大熊猫精液冷冻保存后的精子质量。
朱逸峰[9](2021)在《不同稀释液稀释后不同放置温度及去精清对白羽肉鸡精液品质的影响》文中研究说明随着肉鸡产业不断向规模化与产业化方向发展,无论是在人工授精还是自然繁育过程中,种公鸡的精液品质是影响肉鸡繁殖力的关键。适当稀释原精并通过一定条件的预处理有利于提升精液在常温和低温条件下的质量,有利于充分利用良种公鸡。本研究以AA白羽肉鸡种公鸡为试验素材,采用单因子或多因子试验设计方法,研究比较经过不同稀释液稀释后的精液,在不同放置温度以及去精清条件下对白羽肉鸡精液品质的影响,研究结果为白羽肉鸡良种繁育提供技术支撑。主要研究结果如下:1.不同稀释液不同时间常温保存条件下制备三种精液稀释液(自配A液、自配B液、BPSE液),三种稀释液按照1:2的比例配比精液原液。随着保存时间的增加,经过2h稀释液保存后的B液精子活力极显着高于A液和C液(P<0.01),A液与C液则无显着变化(P>0.05)。在常温(37℃)放置2h后B液的有效精子数极显着高于(P<0.01)A液且显着高于(P<0.05)C液。并且从总体上来看B液的精子活力、活率与有效精子数和其他两组相比基本保持在一个较高水平。2.不同稀释液不同时间低温条件保存下制备三种精液稀释液(B液、D液、E液),三种稀释液按照1:2的比例配比精液原液,在低温4℃保存放置0、2、4、8、24h,对其精液品质进行测定。结果显示:在4h时,经过稀释液E液保存的精液精子活力显着高于(P<0.05)B液与D液。8h过后,E液精子活力显着高于(P<0.05)B液,并且E液的精子活率显着高于(P<0.05)D液。从总体看来,精子活力总体上保持着一个较高的水平,且E液活力高于其他两组。3.不同稀释液不同时间、比例与去精清条件保存将混合精液等量分为4组,2份精清组、2份去精清组按照不同比例稀释并低温保存192h,期间每隔24h检查一次精液品质。结果显示:精清组与去精清组在精液组别、稀释液比例、稀释液之间精子活力、活率与有效精子数均表现出极显着差异(P<0.01)并且在组别*稀释液、组别*稀释比例、稀释液*稀释比例之间对精子活率的交互作用均表现出极显着差异(P<0.01)。
胡惠敏[10](2021)在《针刺联合宁泌泰胶囊治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常的临床疗效观察》文中研究指明目的:用针刺联合宁泌泰胶囊疗法治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常,观察其临床治疗效果,探索其机理,以期开阔临床对于此种疾病的诊疗思路,为临床上治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常提供治疗依据。方法:选取安徽省中医院男科门诊就诊的患者中被诊断为慢性非细菌性前列腺炎合并有精液液化异常的患者60例,将60例患者用随机对照的原则分为观察组和对照组,每组各30例病例。对照组用宁泌泰胶囊口服治疗,一天三次,一次三粒;观察组在对照组基础上施以针刺治疗,一周三次。两组治疗疗程均为12周。绘制表格,记录试验期间对照组和观察组治疗前后NIH-CPSI症状评分、中医症候积分、精液液化时间、精液PH值、精浆锌浓度、精浆PSA含量指标的数值。完成数据收集后,用SPSS 21.0进行数据统计分析。结果:1.在NIH-CPSI症状评分方面:治疗后两组症状评分均比治疗前改善(P<0.05)。观察组的评分改善明显优于对照组(P<0.05)。2.在中医症候积分方面:两组患者治疗后的中医症候积分与治疗前相比均有明显改善(P<0.01),观察组改善更为显着(P<0.05)。3.在精液液化时间方面:治疗后两组患者的液化时间与治疗前相比均有改善(P<0.05)。同时,观察组对液化时间的缩短明显优于对照组(P<0.05)。4.在pH值改变方面:两组患者治疗后精液pH值明显较治疗前有所改善(P<0.05)。5.在精浆锌浓度方面:两组患者治疗后精浆锌浓度与治疗前相比均有所改善(P<0.05)。观察组对精浆锌浓度的升高优于对照组(P<0.05)。6.在精浆PSA含量方面:两组患者治疗后精浆PSA含量与治疗前相比均有所改善(P<0.05)。观察组对精浆PSA含量的升高优于对照组(P<0.05)。7.安全性方面:所有患者在治疗中未出现不良反应。结论:针刺联合宁泌泰胶囊治疗能够降低慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常患者的前列腺症状评分,降低患者中医症候积分,促进精液液化,缩短液化时间,改善患者pH值,在提高精浆锌浓度、精浆PSA含量方面显着优于单纯使用宁泌泰组,提示针刺联合宁泌泰治疗方案在治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常方面安全有效。
二、两种精液分析方法对精液检测结果的影响(论文开题报告)
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、两种精液分析方法对精液检测结果的影响(论文提纲范文)
(2)金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文缩略语 |
第一部分 文献综述 |
综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
1. 男性不育症中医病名认识 |
2. 男性不育症病因病机 |
3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
参考文献 |
综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
1. 特发性弱精子症流行病学 |
2. 特发性弱精子症诊断 |
3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
3.1 氧化应激损伤 |
3.2 线粒体功能障碍 |
3.3 表观遗传学作用 |
3.4 基因异常 |
3.5 精子蛋白组差异 |
3.6 翻译后修饰 |
3.7 环境因素 |
3.8 不良生活方式 |
3.9 精神心理因素 |
4. 特发性弱精子症的治疗 |
4.1 一般治疗 |
4.2 药物治疗 |
4.3 辅助生殖技术 |
参考文献 |
第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
前言 |
1. 研究伦理 |
2. 研究对象 |
2.1 病例来源 |
2.2 诊断标准 |
2.3 纳入标准 |
2.4 排除标准 |
2.5 中止/退出标准 |
2.6 中止/退出病例的处理 |
3. 研究方法 |
3.1 分组及样本量计算 |
3.2 研究用药及疗程 |
3.3 观察指标及观察时点 |
3.4 精液采集及精液分析 |
4. 统计学分析 |
5. 研究结果 |
5.1 试验入组及完成情况 |
5.2 一般资料分析 |
5.3 有效性分析 |
5.4 安全性分析 |
6. 讨论 |
7. 小结 |
参考文献 |
第三部分 实验研究 |
实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
前言 |
1. 材料与方法 |
1.1 动物伦理 |
1.2 实验动物 |
1.3 主要实验仪器 |
1.4 主要实验试剂与药品 |
1.5 实验方法 |
1.6 实验检测指标 |
1.7 统计学分析 |
2. 结果 |
2.1 大鼠一般情况变化 |
2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
2.4 大鼠精子浓度变化 |
2.5 大鼠精子活力变化 |
2.6 大鼠性激素水平变化 |
2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
3. 讨论 |
3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
4. 小结 |
实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
前言 |
1. 材料与方法 |
1.1 实验动物 |
1.2 主要实验仪器 |
1.3 主要实验试剂 |
1.4 实验方法 |
1.5 实验检测指标 |
1.6 统计学分析 |
2. 结果 |
2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
3. 讨论 |
4. 小结 |
参考文献 |
结论 |
创新点 |
不足与展望 |
致谢 |
个人简历 |
附件 |
附件1 |
附件2 |
中医药科技查新报告书 |
(3)运用DNA甲基化和SNP复合标记进行体液来源鉴定和个人识别探究(论文提纲范文)
摘要 |
Abstract |
常用缩写词中英文对照表 |
前言 |
第一部分 精液特异性CpG-SNP复合检测体系构建 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.1.1 样本采集 |
1.1.2 主要试剂及耗材 |
1.1.3 主要实验仪器 |
1.2 方法 |
1.2.1 不同体液DNA的提取、纯化和定量 |
1.2.2 CpG-SNP联合区域筛选 |
1.2.3 引物设计 |
1.2.4 酶切样本的制备 |
1.2.5 组织特异性验证 |
1.2.6 SNP多态性验证 |
1.2.7 MSRE-PCR复合扩增体系的建立 |
2 结果 |
2.1 CpG-SNP联合区域筛选 |
2.2 酶切效能的评估 |
2.3 组织特异性验证 |
2.4 SNP多态性验证 |
2.5 MSRE-PCR复合扩增结果 |
3 讨论 |
3.1 单碱基延伸反应体系构建 |
3.2 组织特异性评估以及位点阈值的划定 |
3.3 DNA纯化对酶切效率的影响 |
4 结论 |
第二部分 CpG-SNP复合检测体系法庭科学有效性的评估 |
1 材料与方法 |
1.1 材料 |
1.2 方法 |
1.2.1 种属特异性的验证 |
1.2.2 年龄相关性验证 |
1.2.3 灵敏度检测 |
1.2.4 含精液混合斑检测 |
1.2.5 法医学参数统计与计算 |
2 结果 |
2.1 种属特异性验证 |
2.2 年龄相关性验证 |
2.3 灵敏度检测 |
2.4 混合斑检测 |
2.4.1 两种体液构成混合斑的检测 |
2.4.2 等比例混合斑的检测 |
2.5 法医学参数统计与计算结果 |
3 讨论 |
4 结论 |
参考文献 |
综述 从生物学标记角度分析混合斑问题的发展现状 |
参考文献 |
附录Ⅰ 112个样本的峰高 |
附录Ⅱ 112个样本的CML值 |
致谢 |
个人简介 |
(4)基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略语表 |
1 引言 |
1.1 山羊精液冷冻保存 |
1.2 影响精液抗冻性的因素 |
1.2.1 精浆 |
1.2.2 精子 |
1.2.3 冷冻保存程序 |
1.2.4 营养因素 |
1.3 蛋白质组学 |
1.3.1 TMT标记定量蛋白质组学概况 |
1.3.2 蛋白质组学在雄性生殖中的应用 |
1.4 代谢组学 |
1.4.1 非靶向代谢组学概况 |
1.4.2 代谢组学在雄性生殖中的应用 |
1.5 脂质组学 |
1.5.1 脂质组学概况 |
1.5.2 脂质组学在雄性生殖中的应用 |
1.6 研究目的与意义 |
1.7 技术路线图 |
2 研究一内蒙古绒山羊精液抗冻性筛选 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 主要试剂与仪器 |
2.1.2 试验动物 |
2.1.3 精液采集与稀释液配置 |
2.2 精液冷冻保存及抗冻性筛选 |
2.2.1 个体抗冻性的分类 |
2.2.2 去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
2.2.3 交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
2.3 精子质量检测 |
2.3.1 精子运动性能检测 |
2.3.2 精子结构完整性检测 |
2.3.3 冷冻精液的人工输精 |
2.3.4 数据分析 |
2.4 结果 |
2.4.1 绒山羊精液抗冻性的分类 |
2.4.2 去除精浆对精子抗冻性的影响 |
2.4.3 交换精浆对精子抗冻性的影响 |
2.5 讨论 |
2.5.1 抗冻性对内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
2.5.2 抗冻性对去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
2.5.3 抗冻性对交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
2.6 小结 |
3 研究二基于TMT标记定量蛋白质组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
3.1 试验材料 |
3.1.1 试验样品 |
3.1.2 主要仪器与分析软件 |
3.1.3 主要试剂和耗材 |
3.2 试验方法 |
3.2.1 蛋白质提取和肽段裂解 |
3.2.2 SDS-PAGE电泳 |
3.2.3 FASP酶解 |
3.2.4 TMT标记 |
3.2.5 High pH Reversed-Phase肽段分级 |
3.2.6 高效液相色谱-质谱分析(LC-MS/MS) |
3.2.7 蛋白质鉴定和定量分析 |
3.2.8 生物信息学分析 |
3.3 结果 |
3.3.1 蛋白质提取质控评价 |
3.3.2 质谱稳定性与重复性质控结果 |
3.3.3 蛋白质鉴定结果 |
3.3.4 差异表达蛋白质筛选 |
3.3.5 差异表达蛋白质聚类分析(Clustering) |
3.3.6 差异表达蛋白质Gene Ontology(GO)功能富集分析 |
3.3.7 差异表达蛋白质KEGG通路富集分析 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
4 研究三基于非靶向代谢组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
4.1 试验材料 |
4.1.1 试验样品 |
4.1.2 主要仪器和试剂 |
4.2 试验方法 |
4.2.1 样品预处理方法 |
4.2.2 色谱-质谱分析 |
4.2.3 数据处理 |
4.3 结果 |
4.3.1 试验质量控制 |
4.3.2 数据分析 |
4.3.3 显着性差异代谢物筛选 |
4.3.4 差异代谢物聚类分析 |
4.3.5 差异代谢物KEGG通路分析 |
4.4 讨论 |
4.5 小结 |
5 研究四蛋白质组-代谢组联合分析内蒙古绒山羊精浆抗冻性相关生物标记 |
5.1 材料与方法 |
5.1.1 试验样品 |
5.1.2 主要试剂与仪器 |
5.1.3 蛋白质组和代谢组联合分析 |
5.1.4 Western Blot实验步骤 |
5.1.5 精浆矿物质离子检测 |
5.2 结果 |
5.2.1 差异蛋白质和差异代谢物KEGG通路整合分析 |
5.2.2 FTH1 蛋白和TF蛋白的Western Blot结果 |
5.2.3 内蒙古绒山羊精浆中矿物质离子浓度检测 |
5.3 讨论 |
5.4 小结 |
6 研究五基于非靶向脂质组学对内蒙古绒山羊精子抗冻性的研究 |
6.1 试验材料 |
6.1.1 试验样品 |
6.1.2 实验仪器和试剂 |
6.2 试验方法 |
6.2.1 样本预处理方法 |
6.2.2 色谱-质谱分析 |
6.2.3 数据分析 |
6.3 结果 |
6.3.1 试验质量控制 |
6.3.2 脂类化合物鉴定数量 |
6.3.3 脂质亚类(Lipid class)水平分析 |
6.3.4 脂质分子(Lipid species)水平分析 |
6.4 讨论 |
6.5 小结 |
7 结论、创新点及展望 |
7.1 结论 |
7.2 创新点 |
7.3 展望 |
致谢 |
参考文献 |
附录 |
作者简介 |
(5)超长时间低温保存绵羊精液对精子遗传物质的影响(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词表 |
第1章 绪论 |
1.1 绵羊精液低温液态保存的研究现状 |
1.2 稀释液低温保护剂的研究进展 |
1.3 精子DNA损伤机制及检测的研究进展 |
1.3.1 TUNEL法检测原理及应用 |
1.3.2 SCGE法检测DNA损伤的机理及应用 |
1.4 精子RNA研究进展 |
1.5 精子品质的检测指标 |
1.5.1 精子活率 |
1.5.2 质膜完整性 |
1.5.3 顶体完整性 |
1.5.4 精子顶体蛋白酶活性 |
1.6 拟解决的关键技术问题及应用前景 |
1.7 技术路线 |
第2章 超长时间低温保存绵羊精液对精子DNA完整性变化的影响 |
2.1 材料与方法 |
2.1.1 试验材料 |
2.1.2 主要试剂与仪器 |
2.1.3 稀释液的制备与使用 |
2.1.4 TUNEL检测方法步骤 |
2.1.5 SCGE检测方法步骤 |
2.1.6 数据统计与分析 |
2.2 结果与分析 |
2.2.1 TUNEL法检测绵羊精子DNA损伤 |
2.2.2 SCGE法检测绵羊精子DNA损伤 |
2.2.3 TUNEL法与SCGE法对绵羊精子DNA损伤的检测 |
2.3 讨论 |
2.4 小结 |
第3章 超长时间低温保存绵羊精液对精子RNA完整性的影响 |
3.1 材料与方法 |
3.1.1 试验材料 |
3.1.2 主要试剂和仪器 |
3.1.3 方法 |
3.1.4 数据分析 |
3.2 结果 |
3.2.1 绵羊精子的纯化结果 |
3.2.2 精子总RNA纯度检测 |
3.2.3 基因组DNA去除效果检测 |
3.2.4 体细胞去除效果检测 |
3.2.5 三种稀释液低温保存精液不同时间段精子RNA含量检测 |
3.2.6 三种稀释液低温保存精液不同时间段精子RNA完整性检测 |
3.3 讨论 |
3.4 小结 |
第4章 超长时间低温保存绵羊精液的效果研究 |
4.1 材料与方法 |
4.1.1 试验材料 |
4.1.2 主要试剂与仪器 |
4.1.3 溶液的配制 |
4.1.4 稀释液的制备与储存 |
4.1.5 明胶膜片的制备 |
4.1.6 精液采集与保存 |
4.1.7 精子活率检测 |
4.1.8 精子顶体完整率检测 |
4.1.9 精子质膜完整性检测 |
4.1.10 精子顶体蛋白酶活性的测定 |
4.1.11 人工授精及受胎率检测 |
4.1.12 数据统计与分析 |
4.2 结果与分析 |
4.2.1 三种稀释液超长时间低温保存绵羊精液对精子活率的影响 |
4.2.2 两种稀释液超长时间低温保存绵羊精液对精子顶体完整率的影响 |
4.2.3 两种稀释液超长时间低温保存绵羊精液对精子质膜完整性的影响 |
4.2.4 两种稀释液超长时间低温保存绵羊精液对精子顶体蛋白酶活性的影响 |
4.2.5 三种稀释液人工授精后母羊产羔情况 |
4.3 讨论 |
4.4 小结 |
第5章 结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简介 |
(6)低剂量PAEs及环境多维暴露与男性生殖损害的数学建模研究(论文提纲范文)
缩略语表 |
abstract |
摘要 |
第一章 前言 |
第二章 低剂量PAEs与精液参数和性激素水平的关联研究及RfD水平下PAEs的男性生殖损害风险评估 |
2.1 引言 |
2.2 研究对象与方法 |
2.3 研究结果 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 环境等多维暴露情况对男性生殖损害的建模研究 |
3.1 引言 |
3.2 研究对象与方法 |
3.3 研究结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
全文总结 |
参考文献 |
文献综述 邻苯二甲酸酯对男性生殖健康影响的研究进展 |
参考文献 |
附录 生殖指标的检测 |
攻读硕士期间发表的论文 |
致谢 |
(7)奶绵羊精液冷冻稀释液优化研究(论文提纲范文)
摘要 |
abstract |
缩略词表 ABBREVIATIONS |
一 引言 |
1.1 精液冷冻保存技术研究进展 |
1.1.1 精液冷冻保存的意义 |
1.1.2 家畜精液冷冻保存研究历史 |
1.1.3 绵羊精液冷冻保存研究进展 |
1.1.4 绵羊精液冷冻存在的问题 |
1.2 精液冷冻保存的影响因素 |
1.2.1 稀释液组分 |
1.2.2 冷冻程序 |
1.2.3 其他影响因素 |
1.3 本研究的目的意义及内容 |
二 Tris精液冷冻稀释液配方优化 |
2.1 实验材料 |
2.1.1 样品来源 |
2.1.2 主要仪器 |
2.1.3 主要试剂 |
2.2 实验方法 |
2.2.1 稀释液的配制 |
2.2.2 鲜精采集 |
2.2.3 冷冻精液的制备及解冻 |
2.2.4 精子指标检测 |
2.3 统计分析 |
2.4 实验结果 |
2.4.1 冻后精子活力 |
2.4.2 冻后精子畸形率 |
2.4.3 冻后精子质膜完整性 |
2.4.4 冻后精子顶体完整性 |
2.5 讨论 |
2.6 小结 |
三 不同冷冻稀释液的奶绵羊冻精比较分析 |
3.1 实验材料 |
3.1.1 样品来源 |
3.1.2 主要仪器 |
3.1.3 主要试剂 |
3.2 实验方法 |
3.2.1 稀释液的配制 |
3.2.2 鲜精采集 |
3.2.3 冷冻精液的制备及解冻 |
3.2.4 精子指标检测 |
3.3 统计分析 |
3.4 实验结果 |
3.4.1 冻后精子活力 |
3.4.2 冻后精子畸形率 |
3.4.3 冻后精子质膜完整性 |
3.4.4 冻后精子顶体完整性 |
3.5 讨论 |
3.6 小结 |
四 白藜芦醇对奶绵羊冻精质量提升研究 |
4.1 实验材料 |
4.1.1 样品来源 |
4.1.2 主要仪器 |
4.1.3 主要试剂 |
4.2 实验方法 |
4.2.1 稀释液的配制 |
4.2.2 鲜精采集 |
4.2.3 冷冻精液的制备及解冻 |
4.2.4 精子指标检测 |
4.2.5 受胎率检测 |
4.2.6 精子基本质量指标和抗氧化指标的相关性 |
4.3 统计分析 |
4.4 实验结果 |
4.4.1 冻后精子活力 |
4.4.2 冻后精子畸形率 |
4.4.3 冻后精子质膜完整性 |
4.4.4 冻后精子顶体完整性 |
4.4.5 冻后精子抗氧化指标 |
4.4.6 冻后精子对受胎率的影响 |
4.4.7 冻后精子基本质量指标和抗氧化指标的相关性 |
4.5 讨论 |
4.5.1 白藜芦醇对冻精质量的提升作用 |
4.5.2 白藜芦醇对冻精的抗氧化作用 |
4.6 小结 |
五 全文结论 |
参考文献 |
致谢 |
(8)秦岭大熊猫精液超低温冷冻保存技术研究(论文提纲范文)
摘要 |
ABSTRACT |
文献综述 |
第一章 大熊猫精液冷冻保存及其研究进展 |
1.1 雄性大熊猫发情特点 |
1.2 大熊猫精液采集 |
1.3 大熊猫精液品质检测 |
1.4 大熊猫精液冷冻方法 |
1.5 大熊猫精液解冻 |
1.6 大熊猫精液冷冻保护稀释液的研究 |
1.6.1 大熊猫精液稀释液 |
1.6.2 大熊猫精液冷冻保护剂 |
1.7 本研究的目的意义 |
试验研究 |
第二章 秦岭大熊猫精浆指标对精液品质的影响 |
2.1 试验材料 |
2.1.1 试验样品 |
2.1.2 主要仪器 |
2.1.3 主要试剂 |
2.2 方法 |
2.2.1 精液的采集与处理 |
2.2.2 精子活率检测 |
2.2.3 质膜完整性检测 |
2.2.4 顶体完整性检测 |
2.2.5 精浆指标测定 |
2.2.6 统计分析 |
2.3 结果 |
2.3.1 秦岭大熊猫精液品质的检测 |
2.3.2 秦岭大熊猫精浆指标检测 |
2.3.3 秦岭大熊猫精浆指标与精液品质相关性分析 |
2.4 讨论 |
2.5 小结 |
第三章 超低温冷冻对大熊猫精子超微结构的影响 |
3.1 试验材料 |
3.1.1 主要仪器 |
3.1.2 主要试剂 |
3.2 方法 |
3.2.1 精液的采集 |
3.2.2 大熊猫精液冷冻程序 |
3.2.3 样本制备 |
3.3 结果 |
3.4 讨论 |
3.5 小结 |
第四章 抗氧化剂对秦岭大熊猫精液冷冻保存效果的研究 |
4.1 试验材料 |
4.1.1 试验样品 |
4.1.2 主要仪器 |
4.1.3 主要试剂 |
4.2 方法 |
4.2.1 精液的采集与处理 |
4.2.2 大熊猫精液冷冻程序与试验分组 |
4.2.3 精液品质检测 |
4.2.4 线粒体活性检测 |
4.2.5 DNA完整性检测 |
4.2.6 ROS、MDA、SOD和 GSH-Px含量测定 |
4.2.7 HAase和 ACE含量测定 |
4.2.8 统计分析 |
4.3 结果 |
4.3.1 抗氧化剂组与对照组精子活率、活力的比较 |
4.3.2 抗氧化剂组与对照组质膜完整性、顶体完整性的比较 |
4.3.3 抗氧化剂组与对照组线粒体活性和DNA完整性的比较 |
4.3.4 抗氧化指标ROS、MDA、SOD、GSH-Px的比较 |
4.3.5 抗氧化剂组与对照组HAase和 ACE的比较 |
4.4 讨论 |
4.5 小结 |
结论 |
参考文献 |
致谢 |
作者简介 |
(9)不同稀释液稀释后不同放置温度及去精清对白羽肉鸡精液品质的影响(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
第一章 文献综述 |
1. 公鸡精液稀释液研究进展简况 |
2. 精液稀释液配置的原则 |
3. 种公鸡精液的特点 |
4. 影响精液稀释液保存的因素 |
4.1 酸碱度(PH值) |
4.2 糖类供能物质 |
4.3 抗氧化类物质 |
4.4 稀释液稀释比例的影响 |
4.5 其他影响精液稀释液保存的因素 |
5. 评价精液稀释液效果的指标 |
5.1 精子活率 |
5.2 精子活力 |
5.3 精子密度 |
5.4 有效精子数与精子畸形率 |
6. 研究的目的与意义 |
第二章 常温下不同稀释液对白羽肉鸡精液品质的影响 |
1. 材料与方法 |
1.1 试验动物的选取、分组及处理安排 |
1.2 稀释液配方与稀释液制备 |
1.3 试验主要设备仪器与试剂 |
1.4 测定指标 |
1.5 数据分析 |
2. 结果与分析 |
2.1 常温(37C°)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡精子活力的影响 |
2.2 常温(37C°)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡精子活率的影响 |
2.3 常温(37C°)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡有效精子数的影响 |
3. 讨论 |
4. 小结 |
第三章 低温保存下不同稀释液对白羽肉鸡精液品质的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 试验材料和试验方法 |
1.2 稀释液配方与稀释液制备 |
1.3 试验主要设备仪器与试剂 |
1.4 测定指标 |
1.5 数据分析 |
2. 结果与分析 |
2.1 低温(4℃)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡精子活力的影响 |
2.2 低温(4℃)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡精子活率的影响 |
2.3 低温(4℃)条件下不同稀释液处理对白羽肉鸡有效精子数的影响 |
3 讨论 |
4 小结 |
第四章 不同稀释液、稀释比例对去精清后白羽肉鸡精液品质的影响 |
1 材料与方法 |
1.1 试验材料和试验方法 |
1.2 稀释液配方与稀释液制备 |
1.3 试验主要设备仪器与试剂 |
1.4 测定指标 |
1.5 数据分析 |
2 结果与分析 |
2.1 不同稀释液及稀释比例去精清后存放不同时间对精液活率的影响 |
2.2 不同稀释液及稀释比例去精清后存放不同时间对精液活力的影响 |
2.3 不同稀释液及稀释比例去精清后存放不同时间对有效精子数的影响 |
3 讨论 |
4 小结 |
全文结论 |
参考文献 |
致谢 |
(10)针刺联合宁泌泰胶囊治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常的临床疗效观察(论文提纲范文)
中文摘要 |
Abstract |
英文缩略词表 |
前言 |
文献研究 |
1.中医对慢性前列腺炎的认识 |
1.1 病名探究 |
1.2 病位探析 |
1.3 病因病机 |
1.4 现代中医症候分型 |
1.5 中医临床治疗 |
2.现代医学对慢性前列腺炎的认识 |
2.1 流行病学认识 |
2.2 病因、发病机制的认识 |
2.3 现代医学治疗方法 |
3.精液液化机制及影响因素 |
3.1 液化机制认识 |
3.2 影响因素 |
临床研究 |
1.病例资料 |
2.诊断标准 |
2.1 慢性非细菌性前列腺炎的诊断标准 |
2.2 精液液化异常的诊断标准 |
2.3 中医证型诊断标准 |
2.4 纳入标准 |
2.5 排除标准 |
2.6 剔除和脱落标准 |
2.7 伦理问题 |
2.8 事件观察 |
3.研究方案 |
3.1 病例分组 |
3.2 治疗方法 |
4.指标观察 |
5.临床疗效评定标准 |
5.1 中医证候量化评分 |
5.2 症候疗效判定标准 |
6.试验设备与试剂 |
7.统计学处理 |
统计学分析 |
1.年龄和病程分析 |
2.安全性观察 |
3.试验结果分析 |
3.1 两组治疗前后NIH-CPSI评分比较 |
3.2 两组液化时间对比 |
3.3 两组治疗前后PH值比较 |
3.4 精浆锌比较 |
3.5 两组患者治疗前后PSA对比 |
3.6 两组患者治疗前后中医症状积分 |
4.临床疗效对比 |
讨论 |
结论 |
不足与展望 |
参考文献 |
附录 |
综述 从“肾”论治慢性前列腺炎 |
参考文献 |
个人简介 |
致谢 |
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 |
四、两种精液分析方法对精液检测结果的影响(论文参考文献)
- [1]新疆驴精液保存技术的研究[D]. 王璐. 石河子大学, 2021
- [2]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]运用DNA甲基化和SNP复合标记进行体液来源鉴定和个人识别探究[D]. 李锦涛. 山西医科大学, 2021
- [4]基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究[D]. 徐冰冰. 内蒙古农业大学, 2021
- [5]超长时间低温保存绵羊精液对精子遗传物质的影响[D]. 赵建清. 塔里木大学, 2021(08)
- [6]低剂量PAEs及环境多维暴露与男性生殖损害的数学建模研究[D]. 王艺蒙. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [7]奶绵羊精液冷冻稀释液优化研究[D]. 窦英杰. 内蒙古大学, 2021(12)
- [8]秦岭大熊猫精液超低温冷冻保存技术研究[D]. 董贺孟. 西北农林科技大学, 2021(01)
- [9]不同稀释液稀释后不同放置温度及去精清对白羽肉鸡精液品质的影响[D]. 朱逸峰. 扬州大学, 2021(09)
- [10]针刺联合宁泌泰胶囊治疗慢性非细菌性前列腺炎合并精液液化异常的临床疗效观察[D]. 胡惠敏. 安徽中医药大学, 2021(01)