一、嗅鞘细胞-胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞移植对坐骨神经再生的作用（论文文献综述）
曾友根[1]（2020）在《NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究》文中研究表明目的:本研究通过观察NSCs和OECs联合移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞神经营养因子,凋亡及抗凋亡蛋白因子表达影响,探讨细胞移植对SNHL损伤耳蜗细胞保护作用的部分机制。方法:（1）细胞培养:选取胎鼠作为移植细胞组织来源,对NSCs和OECs培养、形态观察及鉴定。（2）动物造模:采用庆大霉素对大鼠进行SNHL造模,将筛选出符合要求的大鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组予NSCs和OECs联合移植,对照组予输注人工外淋巴液代替细胞移植。（3）细胞移植:将荧光标记的NSCs和OECs通过圆窗植入耳蜗内,术后记录各组大鼠体重变化,检测大鼠ABR听力阈值变化和听觉耳动反射阈值,并采集样本检测。（4）耳蜗切片HE染色。（5）耳蜗免疫荧光染色检测移植后NSCs和OECs荧光标记物。（6）TUNEL法检测凋亡细胞阳性细胞数和MOD值。（7）免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞。（8）Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达影响。结果:（1）细胞培养鉴定结果:NSCs染色鉴定标记物呈nestin阳性,OECs染色鉴定标记物呈p75NTR阳性,培养获得了纯度较高的细胞。（2）听觉耳动反射检测结果:实验组大鼠耳廓反射阈值改善,耳廓抖动变化增强,对照组改变不明显。（3）ABR阈值变化结果:与对照组比较,实验组在1周后ABR阈值变化不明显（P>0.05）,在2周后实验组ABR阈值变化升高（P<0.05）。（4）耳蜗免疫荧光染色结果:实验组移植后NSCs标记分化的细胞部分能表达神经元细胞标志物Nestin,OECs标记分化的细胞分能表部达OECs标志物p75NTR,对照组耳蜗未发现荧光标记的细胞。（5）HE染色结果:对照组见内、外毛细胞变性坏死,SGCs部分坏死,核萎缩,损伤明显,细胞空泡样变性,密度降低,排列疏松混乱不齐,实验组整体病理损伤减低。（6）TUNEL阳性细胞数检测结果:与对照组比较,实验组TUNEL阳性细胞数明显减少（P<0.05）,细胞凋亡指数占比减少,MOD值减少（P<0.05）。（7）免疫组化检测结果:与对照组比较,实验组BDNF和NT-3阳性细胞数及IOD值明显增多（P<0.05）,同时抗凋亡因子Bcl-2阳性细胞数及IOD值升高,促凋亡因子Bax、Caspase-3阳性细胞数及IOD值减少（P<0.05）。（8）Western-blot检测结果:与对照组比较,实验组耳蜗组织样本中BDNF、NT-3,Bcl-2蛋白表达水平升高,Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论:（1）NSC联合OEC移植对SNHL大鼠耳蜗具有保护作用,能减轻耳蜗细胞的损伤。（2）NSC联合OEC移植可能通过调节神经营养因子的表达水平而参与了耳蜗细胞的保护过程。（3）NSC联合OEC移植可能通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2,下调凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达路径而参与了对SNHL耳蜗细胞凋亡的保护机制。
陈怡然[2]（2020）在《基于JNK信号通路探讨针刺对坐骨神经损伤大鼠神经修复的机制研究》文中指出目的:从整体、细胞和分子水平,研究针刺对坐骨神经损伤的治疗机制。分别通过观察神经运动功能和组织形态结构、血清和神经氧化损伤标志物表达、JNK信号通路介导的凋亡相关蛋白和雪旺细胞特异性标志蛋白表达,探索针刺对坐骨神经损伤大鼠神经修复的效果及其作用机制。同时通过观察RSC96细胞系细胞周期和细胞凋亡改变、JNK信号通路介导的凋亡相关蛋白表达,进一步探索针刺后血清效应物质对氧化损伤的雪旺细胞的保护效果和作用机制。材料与方法:1体内动物实验（论文一至论文三）1.1动物分组与造模SPF级SD大鼠70只,分为假手术组（SHAM）、模型组（SNCI）、浅刺组（SEA）、深刺组（DEA）和非穴深刺组（NEA）,每组14只。除SHAM组外,其余4组采用经典钳夹法制备大鼠坐骨神经挤压性损伤模型。1.2干预方法造模1天后各组按照相应干预措施开始针刺治疗。SEA和DEA两组选取造模同侧的“环跳”穴作为治疗部位,SEA组针刺入约0.5cm,深度以触及进针部位下方的肌肉组织为宜;DEA组刺入约1.5cm,深度以触及神经干为宜。NEA组选取造模同侧“环跳”穴与膝关节外侧缘连线上,约损伤处远侧端1cm处作为治疗部位,刺入深度约1.5cm以触及神经干为宜。各组均小幅度提插捻转3次后连接电针仪正极,尾部连接负极。采用疏密波,频率2.0Hz、电流2.0m A,每日1次,每次20min,连续治疗14天。1.3取材和指标检测取材前对所有实验大鼠进行坐骨神经运动功能评价,之后在麻醉状态下进行神经电生理检测,腹主动脉取血用于ELISA法检测血清中SOD、MDA、8-OHd G水平。过量麻醉处死大鼠后,分别取坐骨神经和背根神经节,其中1只大鼠所取的神经组织于2.5%戊二醛中固定,用于透射电子显微镜下观察组织超微结构;3只大鼠所取的神经组织于4%多聚甲醛中固定,用于免疫组化法观察S100蛋白表达、免疫荧光法观察p-JNK、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-8蛋白表达;其余大鼠所取的组织-80℃冻存,用于ELISA法检测神经中SOD、MDA、8-OHd G水平;RT-PCR法检测JNK、c-Jun、Bcl-2、Bax、caspase-8、caspase-3 m RNA表达;Westernblot法检测p-ERK、p-p38、p-JNK、TNF-α、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、S100蛋白表达。2体外细胞实验（论文四）2.1针刺血清制备与细胞分组15只SD大鼠分为空白组和治疗组,空白组10只,治疗组5只,空白组大鼠造模方法和干预方法同体内实验SHAM组一致,治疗组大鼠造模方法和干预方法同体内实验深刺组一致,连续治疗14天,末次治疗后0.5h行腹主动脉取血,分离血清灭活滤过制备针刺血清。细胞根据诱导和干预条件不同,分为3组,分别是对照组（Control）、模型组（H2O-2）和针刺血清组（H2O-2+Acupuncture serum）。2.2细胞培养和干预条件筛选复苏RSC96细胞系,进行常规传代培养,培养至第3代,采用CCK-8法筛选H2O-2诱导细胞凋亡和针刺血清干预细胞的条件。2.3指标检测采用流式细胞仪和Annexin V/PI双染法检测细胞周期和细胞凋亡水平;ELISA法检测细胞上清液中TNF-α表达水平;免疫荧光法检测S100、Cleaved caspase-3蛋白表达;加入JNK抑制剂SP600125后,Westernblot法检测p-JNK、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:一、体内动物实验论文一针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠神经功能、形态修复及氧化损伤的实验研究1实验大鼠坐骨神经运动功能评价钳夹法制备挤压损伤大鼠坐骨神经功能指数（SFI）显着下降（P<0.01）。治疗后,与SNCI组比较,SEA、DEA两组SFI存在显着上升（P<0.01）,DEA组上升程度高于SEA组（P<0.01）。2实验大鼠坐骨神经电生理检测钳夹法制备挤压损伤大鼠运动神经传导速度（MNCV）显着下降（P<0.01）。治疗后,与SNCI组比较,SEA、DEA两组MNCV存在显着上升（P<0.01）,DEA组上升程度高于SEA组（P<0.05）。3实验大鼠坐骨神经组织超微结构观察SHAM组神经髓鞘和雪旺细胞结构完整。SNCI组髓鞘结构变形,完整雪旺细胞消失,出现少量无髓神经纤维。SEA组神经髓鞘结构恢复,但是排列松散,存在板层分离;DEA组神经髓鞘结构较为完整,可见髓鞘厚度不均的有髓神经纤维和大量雪旺细胞增生。NEA组神经髓鞘结构恢复较差,几乎未见雪旺细胞。4实验大鼠背根神经节组织超微结构观察各组背根神经节超微结构未见明显异常,髓鞘结构基本完整,髓鞘边缘可见结构完整的雪旺细胞。5针刺“环跳”穴对大鼠血清氧化损伤标志物的影响与SHAM组比较,SNCI组SOD水平显着降低（P<0.01）。与SNCI组比较,SEA、DEA组SOD水平显着升高（P<0.01）,DEA组SOD水平高于SEA组（P<0.01）。与SHAM组比较,SNCI组MDA、8-OHd G水平显着升高（P<0.01）。与SNCI组比较,SEA、DEA组MDA、8-OHd G水平显着降低（P<0.01）,DEA组MDA、8-OHd G水平低于SEA组,NEA组MDA、8-OHd G水平低于SNCI组但远高于SEA、DEA组（P<0.01或P<0.05）。6针刺“环跳”穴对大鼠坐骨神经氧化损伤标志物的影响与SHAM组比较,SNCI组SOD水平显着降低（P<0.01）。与SNCI组比较,SEA、DEA组SOD水平显着升高（P<0.01）,DEA组SOD水平高于SEA组（P<0.01）。与SHAM组比较,SNCI组MDA、8-OHd G水平显着升高（P<0.01）。与SNCI组比较,SEA、DEA组MDA、8-OHd G水平显着降低（P<0.01）,DEA组MDA、8-OHd G水平低于SEA组（P<0.01）,NEA组MDA水平低于SNCI组但远高于SEA、DEA组（P<0.01）,NEA组8-OHd G水平低于SNCI组（P<0.01）,但高于DEA组（P<0.01）。论文二针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠JNK信号通路的实验研究1针刺“环跳”穴对大鼠坐骨神经和背根神经节MAPK信号通路的影响坐骨神经组织中,p-ERK蛋白,DEA组表达低于其余4组（P<0.05）,其余4组比较无显着差异。p-p38蛋白,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组表达升高（P<0.05）,DEA组蛋白表达降低（P<0.05）;与SNCI、SEA组比较,DEA组表达降低（P<0.05）,NEA组蛋白表达升高（P<0.05）。p-JNK蛋白,与SHAM组比较,其余4组表达均升高（P<0.05）;与SNCI组比较,DEA组蛋白表达降低（P<0.05）。背根神经节组织中,p-ERK蛋白,与SHAM组比较,DEA、NEA组表达升高（P<0.05）。与DEA组比较,NEA组蛋白表达升高（P<0.05）。p-p38蛋白,与SHAM组比较,其余4组表达均升高（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA组蛋白表达降低（P<0.05）;与SEA、DEA组比较,NEA组蛋白表达升高（P<0.05）。p-JNK蛋白,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组表达升高（P<0.05）;与SNCI、SEA组比较,DEA组蛋白表达降低（P<0.05）、NEA组蛋白表达升高（P<0.05）。2针刺“环跳”穴干预大鼠坐骨神经和背根神经节JNK信号通路对凋亡的影响2.1 RT-PCR法检测大鼠坐骨神经和背根神经节中JNK、c-Jun、Bcl-2、Bax、caspase-8、caspase-3m RNA表达的影响坐骨神经组织中,JNK1 m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,DEA组表达显着降低（P<0.05）。JNK2 m RNA各组表达无统计学差异（P>0.05）。JNK3 m RNA,与SHAM组比较,其余4组表达显着升高（P<0.05）,各组之间表达无统计学差异。c-Jun m RNA,与SHAM组比较,其余4组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,DEA组表达显着降低（P<0.05）,SNCI、SEA、NEA之间表达无统计学差异。Bcl-2/Bax m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组表达显着降低（P<0.05）;与SNCI组比较,DEA组表达显着升高（P<0.05）;NEA组表达显着低于SNCI组（P<0.05）。Caspase-3 m RNA,各组表达无统计学差异。Caspase-8 m RNA,与SHAM组比较,其余4组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,其余3组表达显着降低（P<0.05）,其中SEA和NEA无显着差异,DEA组表达低于NEA组（P<0.05）。背根神经节组织中,JNK1 m RNA,与SHAM组比较,SNCI组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA、DEA组表达显着降低（P<0.05）。JNK2 m RNA,与SHAM组比较,SNCI组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,其余3组表达显着降低。JNK3 m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA、DEA组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA、DEA、NEA组表达显着降低（P<0.05）;与SEA、DEA组比较,NEA组表达显着降低（P<0.05）。c-Jun m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA、DEA、NEA组表达显着降低（P<0.05）;SEA和NEA组表达无显着差异,DEA组表达低于上述2组（P<0.05）。Bcl-2/Bax m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA组表达显着降低（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA、DEA组表达显着升高（P<0.05）;DEA组表达高于SEA组高于NEA组（P<0.05）。Caspase-3 m RNA,与SHAM组比较,其余四组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,SEA、DEA组表达显着降低（P<0.05）,DEA组表达低于NEA组（P<0.05）。Caspase-8 m RNA,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组表达显着升高（P<0.05）;与SNCI组比较,DEA组表达显着降低（P<0.05）,SEA、NEA组与之表达无统计学差异。2.2免疫荧光法检测针刺“环跳”穴对大鼠坐骨神经和背根神经节中p-JNK、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-8蛋白表达的影响坐骨神经组织中,p-JNK蛋白荧光强度各组均较低,组间未见明显差异。p-c-Jun蛋白荧光强度各组均较低,与SHAM组比较,SNCI、NEA组强度明显增加;与SNCI组比较,SEA、DEA组强度明显减少,NEA组强度轻微减少。Bcl-2蛋白荧光强度各组均较低,组间未见明显差异。Bax蛋白荧光强度各组均较高,与SHAM组比较,SNCI、SEA、NEA组强度明显增加;与SNCI组比较,DEA组强度明显减少。Cleaved-caspase-3蛋白荧光强度各组差异较大,SHAM组和DEA组强度较低,SEA和NEA组强度较高,SNCI组强度最高。Cleaved-caspase-8蛋白荧光强度各组差异较大,SNCI组强度很高,其余4组强度较低。背根神经节组织中,p-JNK蛋白荧光强度各组均较低,组间未见明显差异。p-c-Jun蛋白荧光强度各组均较低,SNCI组强度相对较高,其余4组强度较低。Bcl-2蛋白荧光强度各组均较低,组间未见明显差异。Bax蛋白荧光强度各组均较高,与SHAM组比较,SNCI、NEA组强度明显增加;与SNCI组比较,SEA、DEA组强度明显减少。Cleaved-caspase-3蛋白荧光强度各组差异较大,SHAM组和DEA组强度较低,SEA和NEA组强度较高,SNCI组强度最高。Cleaved-caspase-8蛋白荧光强度各组均较低,组间未见明显差异。2.3 Western Blot法检测针刺“环跳”穴对大鼠坐骨神经和背根神经节中TNF-α、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8蛋白表达的影响坐骨神经组织中,TNF-α蛋白,SHAM组表达较低,SNCI组表达增加（P<0.05）,DEA组较SNCI组表达减少（P<0.05）。Bcl-2/Bax蛋白比值,与SHAM组比较,SNCI组能显着降低（P<0.05）,SEA和DEA显着增加（P<0.05）,DEA组优于SEA组（P<0.05）。p-c-Jun蛋白,SHAM、SNCI、SEA和NEA组表达无统计学差异,DEA组表达减少（P<0.05）。Cleaved Caspase-3蛋白,与SHAM组比较,SNCI和NEA组显着增加（P<0.05）,SEA和DEA显着减少（P<0.05）,DEA组优于SEA组（P<0.05）。Cleaved Caspase-8蛋白,与SHAM组比较,SNCI组显着增加（P<0.05）,SEA和DEA组显着减少（P<0.05）。背根神经节组织中,TNF-α蛋白,SHAM组表达较低,SNCI组表达增加（P<0.05）,DEA组较SNCI组表达减少（P<0.05）。Bcl-2/Bax蛋白比值,与SHAM组比较,SNCI组显着降低（P<0.05）,SEA和DEA显着增加（P<0.05）,DEA组优于SEA组（P<0.05）。p-c-Jun蛋白,与SHAM组比较,SNCI组显着增加（P<0.05）,DEA显着减少（P<0.05）。Cleaved Caspase-3蛋白,与SHAM组比较,SNCI组显着增加（P<0.05）,SEA和DEA显着减少（P<0.05）,两组之间无统计学差异。Cleaved Caspase-8蛋白,SHAM、SNCI、SEA和NEA组表达无统计学差异,DEA组显着降低（P<0.05）。论文三针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠雪旺细胞S100蛋白的影响1针刺对大鼠坐骨神经雪旺细胞S100蛋白表达的影响与SHAM组比较,SNCI组S100表达减少（P<0.05）。与SNCI组比较,SEA、DEA组表达升高（P<0.05）,DEA组表达高于SEA组（P<0.05）。二、体外细胞实验论文四针刺血清调控JNK信号通路干预H2O-2诱导的RSC96细胞凋亡的实验研究1针刺血清对H2O-2诱导的RSC96细胞活力的影响不同浓度H2O-2干预细胞6h后,0-50μM组细胞活力随着H2O-2浓度的增加而降低;50-200μM组细胞活力未见明显变化;200-800μM组细胞活力随着H2O-2浓度的增加而增加。50μM H2O-2干预细胞6h后,细胞增殖抑制效率较大,增殖抑制率约为80%,因此选择H2O-2终浓度为50μmol/L,干预时间6h作为H2O-2诱导RSC96细胞损伤的实验条件。不同浓度针刺血清干预细胞24、48、72h后,细胞活力随着血清浓度的增加而逐渐降低。10%浓度针刺血清孵育RSC96细胞各个时间的细胞活力差异性较小,且对细胞增殖的抑制率较低,分别是16%、22%、14%,因此选择针刺血清浓度为10%作为针刺血清孵育RSC96细胞的实验条件。Control组细胞活力较高,培养24、48、72h后细胞存活率均为90%以上。H2O-2组细胞活力较低,培养24、48、72h后细胞存活率分别约为23%、20%、18%。H2O-2+Acupuncture serum组细胞活力相差较大,培养24、48、72h后细胞存活率分别约为40%、84%、66%。因此选择针刺血清干预时间为48h作为针刺血清孵育RSC96细胞的实验条件,此时细胞存活率提高最为显着。2针刺血清对H2O-2诱导的RSC96细胞周期的影响与Control组细胞（GO/G1期:37.87%;S期:41.13%;G2/M期:13.60%）比较,H2O-2组GO/G1期下降为25.50%（P<0.05）,S期上升为50.87%（P<0.05）。与H2O-2组细胞比较,H2O-2+Acupuncture serum组S期下降为32.33%（P<0.05）,G2/M期上升为18.30%（P<0.05）,说明H2O-2使细胞周期被阻滞在S期,针刺血清能有效解除H2O-2引起的S期阻滞。3针刺血清对H2O-2诱导的RSC96细胞凋亡的影响Control组正常细胞占绝大多数,早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞均较少。与Control组比较,H2O-2组早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞均显着增多（P<0.05）。与H2O-2组比较,H2O-2+Acupuncture serum组早期凋亡细胞和晚期凋亡细胞均显着减少（P<0.05）,但仍多于Control组（P<0.05）。4针刺血清对RSC96细胞上清液中TNF-α水平的影响Control组TNF-α水平未发生显着改变。H2O-2诱导使细胞上清液中TNF-α水平升高（P<0.05）,24h时达到峰值。Acupuncture serum干预下24h时开始下降,36h时水平更低（P<0.05）。5针刺血清干预RSC96细胞JNK信号通路对凋亡的影响5.1免疫荧光法检测针刺血清对RSC96细胞S100、Cleaved caspase-3蛋白表达定位S100蛋白荧光强度各组均较高,组间未见明显差异。Cleaved caspase-3蛋白,Control组和H2O-2+Acupuncture serum组荧光强度较低,H2O-2组强度较高。5.2 Western Blot法检测针刺血清对RSC96细胞p-JNK、p-c-Jun、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-3蛋白表达的影响p-JNK蛋白,与Control组比较,H2O-2组表达显着增加（P<0.05）;加入SP600125后表达减少（P<0.05）。p-c-Jun蛋白,与Control组比较,H2O-2组表达显着增加（P<0.05）;加入SP600125后表达减少（P<0.05）。Bcl-2/Bax蛋白比值,与Control组比较,H2O-2组显着减少（P<0.05）;与H2O-2组比较,H2O-2+Acupuncture serum组显着升高（P<0.05）;加入SP600125后显着升高（P<0.05）。Cleaved Caspase-3蛋白,与Control组比较,H2O-2组表达显着增加（P<0.05）;与H2O-2组比较,H2O-2+Acupuncture serum组和H2O-2+Acupuncture serum+SP600125组表达减少（P<0.05）。Cleaved Caspase-8蛋白,与Control组比较,H2O-2组表达显着增加（P<0.05）;与H2O-2组比较,H2O-2+Acupuncture serum组表达减少（P<0.05）;加入SP600125后表达减少（P<0.05）。结论:1.浅刺和深刺“环跳”穴能改善神经运动功能、传导功能,加快神经结构恢复,深刺效果优于浅刺。说明针刺具有改善神经运动功能和传导功能,修复组织形态结构的功能;针刺具有提高机体抗氧化能力,减少氧化损伤的功能,且深刺效果更为显着。2.针刺可调节JNK信号通路,抑制c-Jun磷酸化,使Bcl-2/Bax基因和蛋白的比值增高,Caspase-8和Caspase-3基因和活化蛋白表达减少,抑制神经细胞凋亡,深刺效果更佳。说明针刺具有通过调控JNK信号通路抑制神经细胞凋亡的功能。3.坐骨神经损伤局部组织的S100表达减少,针刺使损伤局部组织的S100表达增加。说明针刺具有促进雪旺细胞增殖和成熟的功能。4.针刺血清具有促进氧化损伤的RSC96细胞增殖的功能;针刺血清和JNK抑制剂均能够通过调控JNK信号通路抑制细胞凋亡;针刺血清抑制氧化损伤的RSC96细胞凋亡的机制可能通过调控JNK信号通路实现。
李越[3]（2019）在《新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用》文中研究指明现代战争中各种火器的强大动能极易导致周围神经缺损,平时周围神经损伤则常见于交通事故、肿瘤切除、炎性疾病、先天性畸形等因素。缺损性周围神经损伤不仅难以修复,也给病人及社会带来沉重负担。与再生能力低下的中枢神经系统损伤相比,长度小于0.5cm的周围神经缺损可采用神经吻合术进行处理,预后往往较好。当神经缺损大于4cm时则首先采用自体神经移植进行修复,但以自体神经为供体不仅来源受限、匹配困难,也存在很多后遗症,且修复效果也并非尽如人意。同种异体神经虽已开展临床应用研究,但修复效果远不如自体神经,亦存在免疫排斥问题。近年来快速发展的组织工程神经技术为神经缺损修复带来了新希望,其优点在于:一是可以作为自体神经和同种异体神经的替代物,二是可以修复更长的神经缺损,三是可以根据神经缺损长度和直径“量身定做”。虽已有少量组织工程神经用于临床,但存在神经再生缓慢、神经结构和功能恢复欠佳等问题。从以往组织工程神经及其修复周围神经缺损的研究来看,目前学者正从以下几个方面对组织工程神经技术进行改进:一是支架材料的合成、筛选与神经导管制作,目前认为PLGA是较为理想的支架材料;二是选择更适宜的种子细胞,以往曾用种子细胞有ESCs、NSCs、BMSCs、ADSCs、DPSCs、SCs、OECs等多种,表皮神经嵴干细胞（Epidermal neural crest stem cells,EPI-NCSCs）易于获取、自我更新能力强、且具有多向分化、分泌神经营养因子、致瘤风险低等优点,显示了较好的应用前景;三是选择更优秀的细胞外基质,以强化移植修复过程中对神经再生的诱导和促进作用。同时,人们还发现,炎性免疫反应对于神经缺损的修复有十分重要的影响,这也成为近年研究的一个热点,对其进行探讨将有助于从机制上突破现有神经缺损修复的困境。炎性免疫反应在组织创伤修复过程中具有重要作用,深刻影响着神经再生的病理生理过程。炎性免疫反应是由免疫活性细胞和炎性细胞因子构成的复杂网络,近年来人们逐渐认识到巨噬细胞是这一网络中关键的免疫活性细胞,它在神经缺损修复过程中既能向M1型极化从而产生神经毒性,也能向M2型极化而利于神经损伤修复。目前认识到炎性细胞因子主要有两类,一类是促炎因子,如IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ等,可加剧炎性反应;另一类是抗炎因子,如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β1等,则可以抑制炎性反应。本研究在课题组既往建立的人工神经制备方法基础上,提出以EPI-NCSCs这样一种从自体毛囊获得的神经干细胞,结合PLGA支架及ECM细胞基质构建出新型组织工程神经,观察其桥接移植的修复效果,并着重从其对炎症反应调控的角度,研究其作用机制。首先将新型组织工程神经桥接于大鼠坐骨神经（Sciatic nerve,SN）缺损处（缺损总长度为15mm,该长度相当于人体神经缺损12.8-14.2cm）。再于桥接后9周内分别采用不同指标,观察新型组织工程神经在移植修复过程中对巨噬细胞的极化状态、炎性因子表达变化的调控及其对于缺损坐骨神经结构和功能的修复作用。拟解决的关键科学问题是:新型组织工程神经对局部神经组织内的巨噬细胞极化是否具有调节作用?新型组织工程神经能否调控局部炎性细胞因子的表达?调控后的炎性免疫微环境是否更有利于周围神经缺损的移植修复?材料与方法1.EPI-NCSCs培养与组织工程神经制作及坐骨神经桥接（1）细胞培养:EPI-NCSCs取自GFP转基因大鼠毛囊中,用DMEM/F12/FBS/bFGF培养液原代培养,PBS液洗涤覆有细胞的载玻片后,用Nestin/SOX10一抗工作液4℃孵育过夜,PBS漂洗后用Cy5-IgG/Alexa-Flour-594-IgG二抗工作液37℃避光孵育,然后计算SOX10+/Nestin+细胞数量。（2）PLGA支架:将PLA/PGA按85/15的比例混匀后溶于三氯甲烷制备5%溶液,玻璃培养皿中蒸发形成厚约25um的PLGA膜,然后卷膜制成PLGA导管,γ射线照射灭菌,用前以DMEM/F12浸润。（3）常规麻醉SD大鼠,暴露右侧坐骨神经,切除10mm坐骨神经,残端回缩形成长约15mm缺损。然后用PLGA导管套接于神经断端,注入25μL EPI-NCSCs/ECM,8-0缝线缝合断端,逐层缝合肌肉皮肤。2.调控巨噬细胞极化（1）免疫荧光鉴定:同上麻醉SD大鼠,暴露并取出长约20 mm坐骨神经,切为20μm冰冻切片,入TritonX-100 15分钟,山羊血清封闭1小时,用CD68/iNOS一抗（M1型巨噬细胞）和CD206/Arginase-1一抗（M2巨噬细胞）4℃孵育过夜,TRITC-IgG/FITC-IgG二抗避光孵育2小时,Hoechst33342细胞核染色,避光孵育30分钟。（2）成纤维细胞和SCs免疫荧光鉴定:SD大鼠麻醉后取出坐骨神经,制成20μm冰冻切片,用Vimentin一抗（成纤维细胞）和S-100一抗（SCs）孵育,二抗工作液为TRITC-IgG/FITC-IgG（1:200）,细胞核用Hoechst33342染色。3.炎性细胞因子调节（1）Western-blot测定:将所取坐骨神经匀浆后提取总蛋白,然后定量蛋白浓度,再进行SDS-PAGE电泳、转膜,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α/actin一抗孵育,再用辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG二抗孵育,PVDF膜曝光后用Image J图像分析软件测算条带灰度值,actin内参作对照。（2）免疫组化染色:SD大鼠麻醉、取出坐骨神经后制作4μm石蜡切片,脱蜡水化后经3%过氧化氢室温10分钟,山羊血清封闭1小时,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α一抗过夜孵育,再用山羊抗兔/鼠IgG二抗孵育,链霉亲和素-过氧化物酶30分钟,DAB显色,光镜观察分析。（3）免疫荧光染色:SD大鼠麻醉、灌注固定、取出坐骨神经后后制作20μm冰冻切片,入0.3%TritonX-100室温15分钟,山羊血清室温封闭1小时,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α一抗过夜孵育,二抗TRITC-IgG/FITC-IgG避光孵育2小时,Hoechst33342细胞核染色,荧光显微镜下拍照与分析。4.缺损坐骨神经修复（1）组织学观察:术后9周时麻醉、固定大鼠、取出坐骨神经行石蜡包埋,切4μm切片,HE染色,光学显微镜观察分析。（2）运动终板检测:术后9周取腓肠肌制作30μm冰冻切片,AChE染色,光学显微镜观察,Image ProPlus图像软件分析。（3）感觉功能评估:术后9周时将大鼠两侧后足浸入50℃热水中,记录两侧后足的回缩反射时间,痛温觉用LFRT表示。（4）运动功能评估:术后9周时记录大鼠后足足印迹,分别测量TS、ITS、PL,然后根据公式计算SFI。（5）神经电生理检测:术后9周时麻醉大鼠,暴露实验侧和正常侧坐骨神经,双钩状电极（极间距2 mm）刺激,双极针形电极记录,刺激间期0.25 ms,刺激强度10mA,刺激频率1Hz,每只大鼠重复记录5次,结果用PowerLab软件分析。（6）腓肠肌湿重恢复检测:术后9周时,麻醉大鼠后切取实验侧和正常侧腓肠肌,吸去血迹后立即用电子天平称重,结果以实验侧腓肠肌重量/正常侧腓肠肌重量×100%表示。5.统计学分析以SPSS（版本22.0）数据统计软件进行统计分析,以均数±标准差表示,以独立样本t检验进行组间比较,P<0.05表示存在显着性差异,P<0.01表示存在极显着性差异。结果1.从GFP大鼠毛囊中获得EPI-NCSCs,经SOX10和Nestin双标鉴定,其纯度高达99.23±2.1%,移植到缺损10mm坐骨神经后,至少在宿主组织内存活9周。所制作的PLGA导管管壁表面为网状结构,间有很多直径约6μm左右的微孔,从而为EPI-NCSCs粘附生长提供了结构基础,也为种子细胞获得环境营养提供了结构保障。2.组织工程神经桥接坐骨神经缺损后1周,可明显提高M2巨噬细胞的比例,降低M1巨噬细胞的数量。桥接后3周时,有利于神经再生的SCs数量和活性被显着提高,而阻碍神经再生的成纤维细胞数量和活性则被明显降低。在所用组织工程神经各成分中,种子细胞EPI-NCSCs在这些有益效应中发挥了关键作用。3.组织工程神经桥接坐骨神经缺损后1、3、7、14、21天,Western-blot、免疫荧光和免疫组化实验证实,宿主组织抗炎因子IL-4和IL-13的表达呈逐渐增强的趋势,而促炎因子IL-6和TNF-α则呈逐渐下降的趋势。抗炎因子水平的提高和促炎因子水平的下降,为坐骨神经损伤后的神经纤维再生提供了更适宜的炎性免疫微环境。4.术后9周时,形态组织学观察证实组织工程神经桥接恢复了缺损坐骨神经的连续性,且神经直径更粗,组织结构更致密,神经纤维成分更多,运动终板数量更多体积也更大。LFRT测定表明感觉功恢复更好。SFI评估显示明显提高了运动功能的恢复水平。与此同时,肌肉湿重恢复率明显优于对照组动物。神经电生理检查证实电位的潜伏期缩短,电位幅度提高,说明神经传导速度更快,对刺激反应更强。结论本研究制备的组织工程神经中的种子细胞EPI-NCSCs至少可在宿主组织内存活9周。组织工程神经在移植过程中一方面促使宿主组织内巨噬细胞向M2型极化,促进抗炎因子（IL-4,IL-13）表达,增加有利于神经纤维再生的SCs数量;另一方面降低M1巨噬细胞的数量,抑制促炎因子（IL-6,TNF-α）的表达,降低抑制神经纤维再生的成纤维细胞数量。组织工程神经调控的局部炎性免疫微环境提高了长节段缺损坐骨神经结构与功能的恢复水平。
曹丽芝,冯乃波,王娟,陈嘉峰[4]（2019）在《间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用现状及前景分析》文中研究说明背景:间充质干细胞具有多向分化潜能,并拥有免疫调节特性,近年来在周围神经损伤修复方面备受研究者青睐。目的:总结近年来国内外研究者应用间充质干细胞修复周围神经损伤的效果。方法:作者检索PubMed、Sciencedirect、Medline、中国知网等数据库中自2000年1月至2019年2月的相关文章。英文检索词为"peripheral nerve injury,mesenchymal stem cells,issue engineering,exosomes,nerve guidance conduits,genetic engineering",中文检索词为"周围神经损伤,间充质干细胞,组织工程,外泌体,神经导管,基因工程",检索文献类型为研究原着,初检文章428篇,再经过严格筛选后,对符合要求的66篇文献进行分类综述。结果与结论:间充质干细胞通过局部移植的方式注入周围神经损伤区域,可以有效促进神经轴突生长,并且能够抑制损伤部位周围炎症反应,为神经损伤修复提供适宜的微环境。间充质干细胞外泌体技术的应用可以有效解决细胞增殖和宿主免疫带来的不利因素。同时,间充质干细胞结合组织工程神经导管支架技术可以获得更佳的神经修复效果。目前基因工程技术可以用于靶向修饰间充质干细胞,以设计出更符合周围神经损伤修复应用的理想种子细胞。总之,间充质干细胞在周围神经修复方面展现出独特的优势,是一项理想的组织工程策略。
张雅玲[5]（2019）在《微囊化雪旺细胞移植对P2X2/3受体介导大鼠神经病理性疼痛的作用研究》文中研究表明目的:疼痛是对人类健康的极大威胁之一,周围神经损伤引起的神经病理性疼痛是临床上难以治愈的一种慢性疼痛。人们一直致力于神经病理性疼痛机制和药物开发的研究。以往的研究表明,雪旺细胞（schwann cells,SCs）移植是促进神经修复的最有前途的细胞之一。本实验观察微囊化雪旺细胞移植对神经病理性疼痛大鼠的治疗作用,以及探讨背根神经节P2X2/3受体在其中的作用及机理。方法:1、采用传代培养法培养大鼠雪旺细胞,并对其进行微囊化技术处理。2、制作坐骨神经慢性压迫性损伤（CCI）大鼠模型用于神经病理痛模型。3、将大鼠随机分成四组:假手术组（Sham）、慢性坐骨神经结扎损伤组（CCI）、雪旺细胞移植组（CCI+SCs）、微囊化雪旺细胞移植组（CCI+MC-SCs）。4、于术前和术后2、4、6、8、10、12、14天测定大鼠的机械缩足反射阈值（MWT）和热缩足反射潜伏期阈值（TWL）。5、透射电镜观察各组大鼠术后第14天坐骨神经压迫部位的超微结构变化。6、采用免疫荧光双标法于术后第14天观察各组L4-5背根神经节（DRG）P2X2/3受体的表达情况。7、实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术结合蛋白印迹（WB）技术检测大鼠背根神经节L4-5内P2X2/3受体mRNA和蛋白水平的变化。结果:1、术后第1-14天CCI组大鼠MWT和TWL明显低于Sham组（p<0.01）;CCI+MC-SCs组和CCI+SCs组较CCI组相比,大鼠的MWT、TWL阈值均明显升高（p<0.01）;而CCI+MC-SCs组较CCI+SCs组相比,大鼠的MWT、TWL阈值升高更明显（p<0.05）。2、术后第14天Sham组大鼠坐骨神经髓鞘致密均匀,结构完整,形态规则,形态清晰,而CCI组坐骨神经神经纤维有髓鞘层完全分离,CCI+SCs组部分神经元线粒体有较低的嵴数目,部分轴突萎缩,而在CCI+MC-SCs组髓鞘厚度均匀,有髓纤维丰富,髓鞘偶有松动。3、术后第14天大鼠L4-5 DRG免疫荧光双标染色结果显示:在大鼠L4-5 DRG内P2X2/3受体存在共表达并且在CCI组明显高于Sham组（p<0.01）;CCI+SCs组和CCI+MC-SCs组P2X2/3受体表达明显下降（p<0.01）;并且CCI+MC-SCs组较CCI+SCs组相比,P2X2/3受体表达更低（p<0.05）。4、实时定量PCR检测P2X2/3 mRNA的表达水平结果显示:P2X2/3在CCI组mRNA表达明显高于Sham组（p<0.01）;CCI+SCs/MC-SCs组P2X2/3受体mRNA表达水平低于CCI组（p<0.01）;并且在CCI+MC-SCs组P2X2/3受体mRNA表达水平低于CCI+SCs组（p<0.05）。5、WB技术检测P2X2/3蛋白的表达水平结果显示:与Sham组相比,CCI组的P2X2/3蛋白表达光密度值（ODV）显着增加（p<0.01）,CCI+SCs/MC-SCs组P2X2/3蛋白表达水平明显低于CCI组（p<0.01）;而P2X2/3蛋白表达水平在CCI+MC-SCs组低于CCI+SCs组（p<0.05）。结论:微囊化雪旺细胞移植可能抑制了CCI大鼠背根神经节P2X2/3受体介导的神经病理性疼痛。
吴秋丽[6]（2019）在《低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究》文中研究指明【目的】脊髓损伤（Spinal Cord Injury,SCI）是一种严重的创伤性疾病,修复手段主要有手术治疗、药物治疗、细胞移植等。神经干细胞移植能够有效促进SCI后神经功能的恢复,是当前研究的热点。iPSCs诱导的神经干细胞（induced Pluripotent Stem Cells-Neural Stem Cells,iPS-NSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,自体取材避免了伦理学争议和免疫排斥,应用于细胞移植治疗脊髓损伤具有显着的优势。然而干细胞在体内存活率低、向神经方向分化较难,因此如何更好的促进其增殖、定向分化是众多研究者关注的焦点。国内外研究表明低强度脉冲超声（Low Intensity Pulsed Ultrasound,LIPUS）是一种可以促进多种细胞增殖、分化的物理刺激手段,本研究旨在明确LIPUS对iPS-NSCs细胞特性的影响以及LIPUS介导的iPS-NSCs对脊髓损伤的修复作用,为干细胞的优化和SCI的治疗提供一种新的策略。本研究通过:1)体外培养iPS-NSCs,将自主研制的LIPUS激励系统作用于iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态学、增殖、分化和神经营养因子（Neurotrophic Factors,NTFs）分泌含量的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数,并初步探索LIPUS干预后细胞增殖的调控机制;2)建立脊髓损伤的动物模型,于脊髓损伤局部移植iPS-NSCs和LIPUS-iPS-NSCs细胞,评价细胞移植后SCI大鼠损伤局部组织学形态、神经营养因子含量以及运动功能的改变,初步探讨LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的效果。【方法】本实验研究分为体外实验和体内实验两部分:体外实验:利用自主搭建LIPUS细胞激励系统,以不同的刺激参数干预iPS-NSCs细胞,观察细胞的形态,采用CCK-8检测其增殖活性的改变,明确LIPUS最佳的刺激参数;借助最佳的激励参数,通过TUNEL、ELISA、Western Blot以及免疫组化等方法,观察LIPUS对iPS-NSCs细胞凋亡、分化以及NTFs分泌的影响,并初步探讨细胞增殖与Notch信号通路的潜在关系。体内实验:采用Impactor model-Ⅲ打击器建立Wistar大鼠脊髓损伤动物模型,分为假手术组、单纯损伤组、iPS-NSCs移植组和LIPUS-iPS-NSCs移植组,在大鼠脊髓损伤后7天进行细胞移植。术前1天、术后1天至8周,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能恢复情况;术后8周大鼠进行灌注取材切片,采用HE染色观察损伤局部空洞的面积,免疫荧光染色观察神经再生和胶质瘢痕形成的情况,ELISA检测局部脊髓组织中营养因子的含量。数据由统计学软件SPSS20.0进行分析,结果以均数±标准差（Mean±SD）形式表示,p<0.05表示具有统计学意义。【结果】1.本实验成功搭建了LIPUS细胞激励系统,LIPUS体外刺激iPS-NSCs细胞可以提高其增殖活性,且最佳的刺激参数为1MHz、8V（69.3 mW/cm2）;2.在最佳刺激参数下,LIPUS可以提高iPS-NSCs细胞活性,而对细胞凋亡没有产生明显的影响,因此1MHz、8V（69.3 mW/cm2）的LIPUS是一种安全、无创的物理刺激因子,同时能够促进iPS-NSCs细胞向神经元方向分化,促进上清液中BDNF、NGF的表达;3.在最佳刺激参数下,LIPUS干预可以促进iPS-NSCs细胞中受体Notch1和靶基因HES1蛋白水平的表达;4.在脊髓损伤体内实验中,细胞移植后,尤其是LIPUS-iPS-NSCs移植组,脊髓组织的空洞减小,轴突增生活跃,反应性星形胶质细胞减少,脊髓组织局部BDNF、NGF表达水平提高;5.功能学评分结果显示LIPUS-iPS-NSCs移植组大鼠的后肢运动功能恢复明显优于其他损伤组,差异具有统计学意义。【结论】1.本研究中自主搭建的LIPUS激励系统可以明显提高体外培养的iPS-NSCs细胞的增殖活性,增加细胞中神经营养因子的表达,促进其向神经元方向分化,其中Notch信号通路可能是调控LIPUS促进iPS-NSCs细胞活性的潜在机制;2.移植LIPUS优化的iPS-NSCs种子细胞,可以明显的改善脊髓损伤大鼠的后肢运动功能,减少局部胶质瘢痕的形成,促进轴突的再生和NTFs表达。本研究证明LIPUS是一种安全、无创的体外激励方法,可以提高iPS-NSCs细胞在脊髓损伤修复中的作用,为优化细胞移植的种子细胞提供了新策略,为脊髓损伤修复提供新思路。
黄梦强[7]（2019）在《柴胡皂苷a促进坐骨神经损伤大鼠IL-10表达并抑制瘢痕形成的实验研究》文中研究指明目的:周围神经损伤后的炎症反应和瘢痕形成是阻碍神经再生的主要因素,而柴胡皂苷a已经被证实在脊髓损伤及颅脑损伤大鼠可发挥抑制炎症反应的作用。本研究将柴胡皂苷a用于坐骨神经损伤模型大鼠,研究其对炎症反应和神经瘢痕形成的影响,并利用神经电生理及坐骨神经功能指数等手段评估神经功能恢复情况。方法:1.将60只SD大鼠随机分为三组,每组20只:假手术组（暴露坐骨神经后缝合肌肉及皮肤）;治疗组（切断坐骨神经后腹腔注射柴胡皂苷a悬液,剂量10mg/kg）;损伤组（切断坐骨神经后腹腔注射生理盐水,剂量10mg/kg）。2.造模后7天每组取8只大鼠,解剖取出相应坐骨神经,ELISA法检测抗炎因子IL-10的表达量。3.分别于造模后1天、7天、14天、28天、56天测量各组大鼠坐骨神经功能指数,评估各组大鼠下肢运动功能恢复情况;于造模后56天检测各组大鼠神经电生理功能,评估神经电传导功能恢复情况。4.于造模后56天每组取6只大鼠,解剖取出相应坐骨神经,进行Masson染色,以衡量损伤处瘢痕组织形成情况;造模后56天每组取6只大鼠,解剖取出相应坐骨神经组织,处理后进行Western blot检测Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白含量。结果:1.ELISA检测各组IL-10表达量结果显示:假手术组IL-10表达量为65.93±7.374ng/L,损伤组IL-10表达量为95.74±5.741ng/L,治疗组IL-10表达量为168.2±12.13ng/L,治疗组IL-10表达量明显高于损伤组,差异有统计学意义。这说明柴胡皂苷a促进了坐骨神经损伤大鼠IL-10的表达,2.Masson染色结果显示:假手术组蓝色胶原纤维量较少,损伤组蓝色胶原纤维大量存在,而治疗组蓝色胶原纤维量明显少于损伤组。Western blot结果显示:损伤组Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白表达量明显高于治疗组,差异有统计学意义。以上结果共同说明:柴胡皂苷a抑制了大鼠坐骨神经损伤处瘢痕组织的形成。3.坐骨神经功能指数测量结果显示:在造模后28天和56天,治疗组大鼠SFI值均明显高于损伤组,差异有统计学意义。神经电生理结果显示:治疗组大鼠坐骨神经传导速度明显高于损伤组,差异有统计学意义。以上结果说明:柴胡皂苷a促进了坐骨神经损伤大鼠下肢运动功能和神经电传导功能的恢复。结论:1.柴胡皂苷a可作用于大鼠坐骨神经损伤,对IL-10的表达有促进作用,同时可神经瘢痕的形成。2.柴胡皂苷a对大鼠坐骨神经损伤后的下肢运动功能及神经电传导功能恢复均有正向作用。或可成为治疗周围神经损伤的辅助手段。
陈湘[8]（2018）在《人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及神经干细胞分泌的微囊泡对坐骨神经缺损性损伤的修复作用研究》文中研究指明研究背景:由于地震、车祸等灾难的发生,坐骨神经等周围神经的损伤是临床的常见疾病。目前,自体神经移植仍然是修复周围神经损伤的主要方法,但是自体神经移植法具有供体来源有限、增加供区创伤以及残留供区感觉功能障碍等缺陷。周围神经再生是现阶段神经生物学领域的研究重点,组织工程领域的一些新发现为长节段缺损性损伤提供了新手段。神经干细胞（neural stem cells,NSCs）可分化为各种类型的神经细胞,将其移植到损伤处可促进轴突再生以及髓鞘形成。课题组此前通过培养人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）发现胚胎干细胞可以自发分化形成神经干细胞。由此我们推测这种人胚胎干细胞能够在特定条件下定向诱导分化成纯度较高的神经干细胞（human embryonic stem cell derived-neural stem cells,hESC-NSCs）。由于神经干细胞来源的局限性,从hESCs分化而来的NSCs显得尤为重要。能否高纯度、高产量的获得NSCs是其能否应用到临床细胞治疗的关键问题。我们猜测,hESC-NSCs同胎脑来源的NSCs具有同样促进轴突再生的作用,对此后续的研究表明,hESC-NSCs确实可以通过间接作用促进轴突再生。现在越来越多的研究表明NSCs发挥修复神经损伤的作用不是通过细胞直接整合而是通过分泌因子发挥作用,并且由于NSCs是有核的活细胞,具有形成肿瘤的风险。微囊泡（microvesicles,MVs）是从细胞条件培养基中分离得到的活性有形成分,是细胞同周围细胞或环境进行信息和物质传递的一种物质。并且我们组之前已经研究证明过间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）来源的微囊泡（MSCs-MVs）可以促进坐骨神经压榨性损伤后的再生修复。因此,我们猜测人胚胎干细胞源神经干细胞分泌的微囊泡（microvesicles released from human embryonic stem cell derived-neural stem cells,hESC-NSC-MVs）与MSCs-MVs具有类似的促进轴突再生的功能,并对其展开进一步的研究。研究目的:研究人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及胚胎干细胞源神经干细胞分泌的微囊泡对大鼠坐骨神经5mm缺损性损伤的修复作用。研究方法:（1）将无饲养层培养的hESCs定向诱导为神经干细胞,并利用细胞形态学、免疫荧光、PCR的方法进行鉴定。（2）利用PCR和流式细胞术对神经干细胞经过贴壁-球转化（AST）后提高干性进行说明。（3）收集hESC-NSCs的无血清培养基（条件培养基）,运用超速离心法提取微囊泡。（4）将hESC-NSC-MVs与背根神经节共培养,测定轴突的长度。（5）建立SD大鼠坐骨神经缺损性损伤模型,应用坐骨神经功能指数（sciatic nerve functional index,SFI）、HE染色、Masson染色等方法评价hESC-NSC-MVs对大鼠坐骨神经损伤修复作用。研究结果:（1）hESCs可以分化为神经干细胞,并且神经干细胞相关标志Nestin,Pax6等在P8 NSCs附近表达最高。（2）神经干细胞经过AST,神经干细胞相关标志Nestin,Pax6等表达升高,干性增强。（3）hESC-NSC-MVs与背根神经节共培养的再生轴突长度优于PBS组。（4）成功的构建出大鼠坐骨神经缺损性损伤模型。神经损伤后12周,hESC-NSC-MVs组受损侧后肢形态学恢复和再生轴突的增加都较hESC-NSCs组和PBS组明显。结论:（1）hESC可以分化为NSCs,hESC-NSCs表达神经干细胞标志。（2）hESC-NSCs可以通过贴壁-球转化提高神经干细胞标志的表达以及增强干性。（3）hESC-NSC-MVs对坐骨神经缺损性损伤具有修复作用。
袁婷[9]（2017）在《电针治疗对大鼠坐骨神经损伤功能修复作用的研究》文中认为背景及目的周围神经是由除嗅、视神经以外的所有脑神经、脊神经、自主神经及其神经节组成。临床上周围神经损伤常见,神经再生修复困难,是平时致残、导致功能丧失的主要病种之一。因此,周围神经损伤的再生与修复一直是临床和科学研究的热点和难点问题。近年来显微外科技术的快速发展为神经损伤的修复及再生提供了良好的技术支持,但因周围神经在解剖结构和功能上的特殊性,各种手术修复方式的效果仍然具有一定的局限性,且细胞因子、基因分子及组织工程学等疗法的治疗效果及安全性尚需深入研究。针灸是我国传统医学的传承,被大量研究结果证实具有促进周围神经损伤再生修复及后续肢体功能康复的作用。电针疗法是针灸学发展起来的一门新兴物理治疗技术,临床观察显示电针治疗能够促进周围神经损伤修复,有利于损伤机体功能重建,但其机制还有待进一步研究。本研究旨在研究电针治疗对大鼠坐骨神经损伤后神经再生修复及失神经支配骨骼肌萎缩的修复作用,并进一步探讨电针治疗对周围神经损伤失神经支配骨骼肌萎缩的修复的作用机制。方法1.构建大鼠坐骨神经损伤模型,将大鼠随机分为模型组（Injury组）、损伤+电针治疗组（Injury+EA组）,给予Injury+EA组电针治疗。2.检测两组大鼠治疗前后展爪反射、趾间距,记录展爪反射恢复情况、恢复时间及趾间距大小,评估电针治疗对大鼠坐骨神经损伤后运动功能恢复情况。3.诱发电位仪诱发两组大鼠治疗前后躯体感觉诱发电位及运动诱发电位变化,观察治疗前后诱发电位的波形变化,评估电针治疗对大鼠坐骨神经损伤感觉和运动功能修复的作用。4.分别称取两组大鼠治疗后健侧及患侧腓肠肌湿重,计算腓肠肌湿重下降百分比,评估电针治疗对周围神经损伤失神经支配区域肌肉萎缩的改善情况。测定治疗后患侧腓肠肌组织SOD、MDA水平,Western blot检测Bcl-2表达,探讨电针治疗延缓失神经支配骨骼肌萎缩的机制。结果1.大鼠坐骨神经损伤模型术后,展爪反射消失,动物伤肢均出现踝下垂,趾并拢不能分开,动物呈跛行步态,后肢拖地行走。4周后两组展爪反射都有部分恢复,与Injury组比较,Injury+EA组展爪反射的恢复时间显着缩短（P<0.01）。2.大鼠坐骨神经损伤模型术后,趾间距显着减小。治疗后两组趾间距都有部分恢复,治疗4周后,与Injury组比较,Injury+EA组大鼠平均趾间距显着增加（P<0.01）。3.诱发电位仪在术前诱发两组大鼠SEP均可观察到完整的波形成分,构建神经损伤模型后诱发的SEP的波形不完整或消失。术后2周时Injury组SEP波形未见恢复,而Injury+EA组部分恢复,术后4周两组SEP波形均有部分恢复,且与Injury组比较,Injury+EA组SEP波形恢复显着（P<0.01）。4.诱发电位仪在术前诱发两组大鼠MEP均可观察到完整的波形成分,构建神经损伤模型后诱发的MEP的波形不完整或消失。术后2周及4周时两组MEP波形均有部分恢复,且与Injury组比较,Injury+EA组术后2周及4周SEP波形均恢复显着（P<0.05）。5.电针治疗2周后两组大鼠患侧腓肠肌湿重均低于健侧,且与健侧比较,伤后2周Injury组腓肠肌湿重降低（22.32±4.06%）,而Injury+EA组伤后2周时腓肠肌湿重降低（12.84±3.61%）明显低于Injury组,且两组比较均有显着性差异（P<0.05）。6.坐骨神经损伤模型术后2周检测两组大鼠患侧腓肠肌SOD活性和MDA含量发现,与Injury组比较,Injury+EA组腓肠肌组织SOD活性明显升高（P<0.01）,MDA 含量明显降低（P<0.05）。7.用Western blot检测健侧及两组患侧腓肠肌组织Bcl-2蛋白含量发现,Injury组Bcl-2蛋白表达低于健侧（P<0.01）,而Injury+EA组Bcl-2蛋白表达高于Injury组（P<0.01）,均差异明显。结论1.电针治疗能缩短坐骨神经损伤大鼠展爪反射恢复时间并能促进趾间距及SEP和MEP波形恢复,促进周围神经损伤运动及感觉功能的恢复,起到神经再生修复的作用。2.电针治疗能降低坐骨神经损伤大鼠腓肠肌湿重的下降百分比,诱发肌肉收缩,改善局部循环,延缓肌肉萎缩。3.电针治疗能够增强抗氧自由基SOD表达及抑制氧自由基终产物MDA的释放,从而减少氧自由基对骨骼肌的损害,同时电针治疗能促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制失神经支配区骨骼肌细胞凋亡,阻止骨骼肌萎缩。
贾文端[10]（2017）在《“三法三穴”刺激参数对坐骨神经损伤大鼠感觉功能的影响》文中研究指明[目的]从行为学角度研究推拿"三法三穴"手法参数中的力量（A）、时间（B）、频率（C）对坐骨神经损伤大鼠感觉功能的影响。从形态学及免疫组织化学角度研究不同参数干预下指标的变化与行为学指标的变化是否存在一致性,探寻推拿促进坐骨神经损伤大鼠感觉功能恢复的适宜参数组合。[方法]以坐骨神经损伤为例研究周围神经损伤,以SD大鼠为实验动物,建立坐骨神经夹持损伤模型,采用"推拿手法模拟仪"模拟手法,利用三因素三水平的正交试验设计方案比较推拿"三法三穴"不同刺激参数对SNI大鼠感觉功能的影响。1从行为学角度,测定光热耐痛阈评价大鼠感觉功能恢复情况。从功能角度,测定腓肠肌湿重恢复率评价推拿"三法三穴"防治肌肉萎缩的效果。2从形态学角度,对腓肠肌进行HE染色,观察大鼠肌细胞形态并测量肌细胞直径的变化,评价推拿"三法三穴"对腓肠肌微观结构的影响。3采用免疫组织化学法测定感觉传导通路关键部位——背根神经节及脊髓背角内NGF的表达情况,探寻推拿"三法三穴"对NGF表达的影响。[结果]（1）光热耐痛阈测定造模7天后,推拿组与模型组光热耐痛阈测定无显着性差异（P>0.05）,推拿干预20次后,推拿组光热耐痛阈测定结果与模型组比较有显着性差异（P<0.05）。推拿干预20次后,推拿组（九组）之间采用正交试验的直观分析法,研究结果显示三因素的主次关系为:力量>频率>时间。优选的参数组合是力量2N,时间5min,频率 100 次/min。推拿组（九组）之间采用方差分析法得出,因素A（力量）、B（时间）、C（频率）对结果的影响有统计学差异（P<0.05）。但从力量、时间、频率单因素来看,力量因素的影响显着（P=0.0154）,时间因素和频率因素的影响不显着（P>0.05）。（2）腓肠肌湿重恢复率测定造模7天后,推拿组与模型组腓肠肌湿重恢复率无显着性差异（P>0.05）,推拿干预20次后,推拿组腓肠肌湿重恢复率测定结果与模型组比较有显着性差异（P<0.05）,肌肉萎缩程度接近于假手术组。推拿干预20次后,推拿组（九组）之间采用正交试验的直观分析法,研究结果显示三因素的主次关系为:力量>频率>时间。根据F值的大小,优选的参数组合是力量4N,时间1min,频率30次/min。推拿组（九组）之间采用方差分析法得出,力量、时间、频率三因素的主次关系无显着性差异（P>0.05）。（3）肌细胞直径测量造模7天后,推拿组与模型组肌细胞直径无显着性差异（P>0.05）,推拿干预20次后,推拿组肌细胞直径测定结果与模型组比较有显着性差异（P<0.05）,肌细胞直径微观结构接近于假手术组。推拿干预20次后,推拿组（九组）之间采用正交试验的直观分析法,研究结果显示三因素的主次关系为:时间>频率>力量。优选的参数组合是时间5min,频率100次/min,力量2N。推拿组（九组）之间采用方差分析法得出,力量、时间、频率三因素对结果的影响无统计学差异（P>0.05）,说明各因素之间的主次关系无统计学差异。（4）背根神经节NGF的表达造模7天后,推拿组与模型组背根神经节NGF的表达无显着性差异（P>0.05）,推拿干预20次后,推拿组NGF的表达量升高,与模型组比较有显着性差异（P<0.05）。推拿干预20次后,推拿组（九组）之间采用正交试验的直观分析法,研究结果显示三因素的主次关系为:频率>时间>力量。优选的参数组合是时间3min,频率60次/min,力量2N。推拿组（九组）之间采用方差分析法得出,力量、时间、频率三因素对结果的影响无统计学差异（P>0.05）,说明各因素之间的主次关系无统计学差异。（5）脊髓背角NGF的表达造模7天后,模型组脊髓背角NGF的表达升高（P<0.05）,推拿组与模型组比较无显着性差异（P>0.05）。推拿干预20次后,推拿组脊髓背角NGF的表达与模型组比较有显着性差异（P<0.05）,推拿干预促进了脊髓背角NGF的表达。推拿干预20次后,推拿组（九组）之间采用正交试验的直观分析法,研究结果显示三因素的主次关系为:力量>时间>频率。优选的参数组合是力量4N,时间1min,频率 60 次/min。推拿组（九组）之间采用方差分析法得出,力量、时间、频率三因素对结果的影响有统计学差异（P<0.05）。各因素的主次关系为力量>时间>频率,但从单因素来看,力量因素、时间因素的影响显着（P<0.05）,频率因素的影响不显着（P>0.05）。[结论]（1）推拿"三法三穴"干预可以促进SNI大鼠感觉功能的恢复。（2）力量因素是推拿的关键因素之一,轻度力量、长时间、高频率的刺激更有利于感觉功能的恢复。（3）推拿"三法三穴"干预促进大鼠感觉功能恢复的机理可能与推拿参与调控SNI大鼠感觉神经传导通路中背根神经节及脊髓背角NGF的表达有关。
二、嗅鞘细胞-胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞移植对坐骨神经再生的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、嗅鞘细胞-胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞移植对坐骨神经再生的作用（论文提纲范文）
（1）NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要操作仪器 |
| 2.1.4 主要溶剂配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 组织来源、细胞提取和培养 |
| 2.2.2 NSCs的传代培养 |
| 2.2.3 OECs培养 |
| 2.2.4 NSCs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.5 OECs的鉴定及细胞纯度的计算 |
| 2.2.6 细胞活力测定 |
| 2.2.7 细胞冻存 |
| 2.2.8 细胞复苏 |
| 2.3 动物实验及样本检测 |
| 2.3.1 实验动物 |
| 2.3.2 主要试剂 |
| 2.3.3 主要仪器 |
| 2.3.4 主要试剂配制 |
| 2.3.5 庆大霉素耳毒性大鼠模型的建立方法 |
| 2.3.6 实验动物分组及给药 |
| 2.3.7 ABR检测大鼠听力阈值 |
| 2.3.8 听觉耳动反射检测 |
| 2.3.9 制作切片 |
| 2.3.10 切片染色 |
| 2.3.11 耳蜗免疫荧光染色 |
| 2.3.12 TUNEL法(原位切口末端标记法)检测凋亡细胞 |
| 2.3.13 免疫组织化学法检测神经营养因子及凋亡免疫阳性细胞 |
| 2.3.14 Western-blot法检测样本BDNF、NT-3和Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达 |
| 2.4 统计方法 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 细胞的形态观察及鉴定 |
| 3.1.1 NSCs的培养观察及鉴定 |
| 3.1.2 OECs的培养观察和鉴定 |
| 3.2 各组大鼠体重变化结果 |
| 3.3 大鼠听觉耳动反射检测阈值结果 |
| 3.4 各组大鼠ABR阈值变化结果 |
| 3.5 HE染色结果 |
| 3.6 耳蜗免疫荧光染色观察结果 |
| 3.6.1 耳蜗荧光标记NSC结果 |
| 3.6.2 荧光标记OEC观察结果 |
| 3.7 TUNEL法检测凋亡细胞结果 |
| 3.7.1 各组TUNEL阳性细胞数比较 |
| 3.7.2 各组MOD值比较 |
| 3.8 免疫组化检测结果 |
| 3.9 Western-blot检测各组蛋白表达水平结果 |
| 第4章 讨论 |
| 4.1 实验性感音神经性耳聋动物模型的制备与机制探究 |
| 4.2 神经营养因子减轻SNHL内耳神经损伤后相关机制 |
| 4.2.1 BDNF对 SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.2.2 NT-3对SGNs的保护作用机制探究 |
| 4.3 细胞移植抑制耳蜗损伤细胞凋亡机制探索 |
| 4.3.1 Caspase结构、功能与促耳蜗细胞凋亡机制探究 |
| 4.3.2 Bcl-2 结构、功能和抗耳蜗细胞凋亡机制探析 |
| 4.3.3 细胞联合移植激活Bcl-2,抑制Caspase、Bax表达路径保护损伤耳蜗细胞探究 |
| 4.4 细胞联合移植上调神经营养因子,抑制细胞凋亡 |
| 4.5 神经性耳聋常见病因概述 |
| 4.6 神经性耳聋治疗方法概述 |
| 4.7 关于NSC和 OEC的取材、培养与鉴定探究 |
| 4.7.1 NSC的组织取材和分离 |
| 4.7.2 NSC的培养和鉴定方法选择 |
| 4.7.3 OECs的组织取材和分离 |
| 4.7.4 OECs的培养与鉴定选择 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（2）基于JNK信号通路探讨针刺对坐骨神经损伤大鼠神经修复的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠神经功能、形态修复及氧化损伤的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠JNK信号通路的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三针刺“环跳”穴对坐骨神经损伤模型大鼠雪旺细胞S100蛋白的影响 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文四针刺血清调控JNK信号通路干预H2O2 诱导的RSC96 细胞凋亡的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 坐骨神经损伤的中西医研究进展 |
| 个人简介 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（3）新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 新型组织工程神经制作与大鼠坐骨神经长段缺损损伤模型的建立 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 组织工程神经对坐骨神经缺损损伤后巨噬细胞极化及炎性细胞的影响 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 组织工程神经修复坐骨神经缺损过程中对炎性细胞因子的调节作用 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 组织工程神经对坐骨神经长段缺损的结构和功能修复作用 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文总结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 巨噬细胞极化在神经系统损伤修复中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的成果 |
| 致谢 |
（4）间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用现状及前景分析（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1资料来源 |
| 1.2资料筛选 |
| 1.3资料提取与文献质量评价 |
| 2 结果Results |
| 2.1 间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.2 间充质干细胞外泌体在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.3 间充质干细胞组织工程神经移植物在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.3.1 骨髓间充质干细胞组织工程神经移植物在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.3.2 脂肪间充质干细胞组织工程神经移植物在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.3.3 脐带间充质干细胞组织工程神经移植物在周围神经损伤修复中的应用 |
| 2.4 间充质干细胞基因工程在周围神经损伤中的应用 |
| 3 总结与展望Conclusions and prospects |
（5）微囊化雪旺细胞移植对P2X2/3受体介导大鼠神经病理性疼痛的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验主要试剂 |
| 2.1.3 实验主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物模型的建立与实验分组 |
| 2.2.2 培养和鉴定雪旺细胞(SCs) |
| 2.2.3 微囊化雪旺细胞(MC-SCs)的制备 |
| 2.2.4 细胞的移植 |
| 2.2.5 透射电镜观察坐骨神经的超微结构 |
| 2.2.6 大鼠痛阈的测定 |
| 2.2.7 免疫荧光双标法 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR |
| 2.2.9 蛋白印迹 |
| 2.2.10 统计学分析 |
| 第3章 实验结果 |
| 3.1 雪旺细胞形态和免疫荧光鉴定结果 |
| 3.2 痛阈的结果 |
| 3.2.1 机械缩足反射阈值 |
| 3.2.2 热缩足反射阈值 |
| 3.3 各组大鼠损伤坐骨神经超微结构的变化比较 |
| 3.4 免疫荧光双标检测P2X2/3 受体的共表达水平变化 |
| 3.5 实时荧光定量PCR检测P2X2/3 受体mRNA水平的变化 |
| 3.6 蛋白印迹技术检测P2X2/3 受体蛋白水平的变化 |
| 第4章 实验讨论 |
| 第5章 实验结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（6）低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、LIPUS激励iPS-NSCs最佳物理参数的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验器械 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 1.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 1.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 1.1.6 CCK-8 检测iPS-NSCs增殖活性 |
| 1.1.7 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 成功搭建低强度脉冲超声激励系统 |
| 1.2.2 iPS-NSCs细胞的形态学观察及细胞鉴定 |
| 1.2.3 LIPUS对 iPS-NSCs增殖活性的影响以及最佳激励条件的确定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 LIPUS在生物组织中的理学效应及其在骨科学中的应用 |
| 1.3.2 神经干细胞在神经系统中的起源、特点和作用 |
| 1.3.3 诱导神经干细胞的来源及诱导体系 |
| 1.3.4 LIPUS对细胞增殖的作用 |
| 1.4 小结 |
| 二、在最佳生物学参数下,LIPUS优化iPS-NSCs细胞特性的研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验器械 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 低强度脉冲超声系统的搭建 |
| 2.1.4 iPS-NSCs传代培养及细胞鉴定 |
| 2.1.5 低强度脉冲超声激励细胞模型的建立 |
| 2.1.6 TUNEL检测iPS-NSCs细胞凋亡的情况 |
| 2.1.7 ELISA检测iPS-NSCs细胞上清液中神经营养因子的含量 |
| 2.1.8 Western Blot检测Notch信号通路及细胞分化情况 |
| 2.1.9 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞凋亡率的变化 |
| 2.2.2 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞中NTFs含量的变化 |
| 2.2.3 LIPUS激励iPS-NSCs后细胞分化的情况 |
| 2.2.4 LIPUS激励iPS-NSCs后 Notch信号通路相关蛋白含量的变化 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 LIPUS对 iPS-NSCs细胞生物特性的影响 |
| 2.3.2 LIPUS激励iPS-NSCs可能的作用机制 |
| 2.3.3 LIPUS修复神经损伤的潜力 |
| 2.4 小结 |
| 三、LIPUS介导iPS-NSCs细胞移植修复脊髓损伤的研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验器械 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 脊髓损伤动物模型建立 |
| 3.1.4 细胞移植 |
| 3.1.5 BBB运动功能评分 |
| 3.1.6 脊髓标本取出及制作切片 |
| 3.1.7 石蜡切片的制备 |
| 3.1.8 HE染色 |
| 3.1.9 免疫荧光观察移植细胞在体内分化情况 |
| 3.1.10 ELISA检测测定脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.1.11 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 HE染色结果 |
| 3.2.2 GFAP、NF200 免疫荧光染色结果 |
| 3.2.3 脊髓组织内的营养因子的表达情况 |
| 3.2.4 BBB评分结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 脊髓损伤动物模型的制备及运动功能评价指标的选择 |
| 3.3.2 NSCs在脊髓损伤修复中的作用及应用 |
| 3.3.3 多潜能干细胞在神经损伤等再生医学方面的应用 |
| 3.3.4 LIPUS介导的iPSc-NSCs修复脊髓损伤可能的作用机制 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 低强度脉冲超声在神经修复中的应用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）柴胡皂苷a促进坐骨神经损伤大鼠IL-10表达并抑制瘢痕形成的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、材料与方法 |
| 1.1 对象与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验材料 |
| 1.1.3 主要试验设备 |
| 1.1.4 药物及主要试剂配制 |
| 1.2 坐骨神经损伤模型建立及实验分组 |
| 1.2.1 实验分组 |
| 1.2.2 坐骨神经损伤模型建立 |
| 1.2.3 假手术模型建立 |
| 1.3 坐骨神经功能指数测定 |
| 1.4 神经传导速度检测 |
| 1.5 酶联免疫吸附测定 |
| 1.6 Masson染色 |
| 1.7 Western blot |
| 1.8 统计分析 |
| 二、结果 |
| 2.1 术后第一天坐骨神经功能指数测量结果提示造模成功 |
| 2.2 柴胡皂苷a促进了坐骨神经损伤后抗炎因子IL-10 的表达 |
| 2.3 柴胡皂苷a抑制了大鼠坐骨神经损伤后神经瘢痕的形成 |
| 2.4 柴胡皂苷a促进了神经功能的恢复 |
| 三、实验数据图表 |
| 四、讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及神经干细胞分泌的微囊泡对坐骨神经缺损性损伤的修复作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 神经干细胞 |
| 1.1.1 神经干细胞概述 |
| 1.1.2 NSCs的生物学特性 |
| 1.1.3 人胚胎干细胞来源的神经干细胞 |
| 1.1.4 NSCs对坐骨神经损伤的作用 |
| 1.2 细胞外微囊泡与坐骨神经 |
| 1.2.1 微囊泡概述 |
| 1.2.2 MVs对坐骨神经损伤的作用 |
| 1.3 小结 |
| 第二章 研究目的意义、方法、内容 |
| 2.1 研究目的及意义 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.3 研究内容 |
| 2.3.1 hESC-NSCs的诱导及鉴定 |
| 2.3.2 hESC-NSC-MVs对坐骨神经5mm缺损性损伤的修复作用 |
| 第三章 胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 细胞来源 |
| 3.1.2 主要仪器 |
| 3.1.3 试剂 |
| 3.1.4 主要溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 无饲养层hESCs的培养 |
| 3.2.2 hESCs诱导成NSCs |
| 3.2.3 贴壁-球转化 |
| 3.2.4 神经球自发分化 |
| 3.2.5 流式细胞检测 |
| 3.2.6 免疫荧光检测 |
| 3.2.7 PCR检测 |
| 3.3 统计分析 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 hESCs向hESC-NSCs分化 |
| 3.4.2 hESC-NSCs的神经标志物特征 |
| 3.4.3 不同代数的hESC-NSCs的神经标志物特征 |
| 3.4.4 贴壁hESC-NSCs形成的神经球的自发分化 |
| 3.4.5 hESC-NSCs的贴壁-球转化 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 人胚胎干细胞源神经干细胞的微囊泡对坐骨神经缺损性损伤的修复作用 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 细胞来源 |
| 4.1.2 实验用动物 |
| 4.1.3 仪器 |
| 4.1.4 试剂 |
| 4.1.5 试剂配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 hESC-NSC-MVs的提取与浓度测定 |
| 4.2.2 Nanosight可视型纳米微粒分析仪检测hESC-NSC-MVs的直径分布 |
| 4.2.3 DRG的提取 |
| 4.2.4 DRG的培养和纯化 |
| 4.2.5 hESC-NSC-MVs与DRG共培养 |
| 4.2.6 构建大鼠坐骨神经缺损性损伤模型 |
| 4.2.7 分组和给药剂量 |
| 4.2.8 外部体征观察 |
| 4.2.9 坐骨神经功能指数 |
| 4.2.10 腓肠肌湿重及恢复率检测 |
| 4.2.11 标本组织的收集和制备 |
| 4.3 统计分析 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 hESC-NSC-MVs及鉴定 |
| 4.4.2 hESC-NSC-MVs促进DRG轴突生长 |
| 4.4.3 术后外部体征观察 |
| 4.4.4 坐骨神经指数测定和腓肠肌湿重恢复率 |
| 4.4.5 再生神经纤维结构 |
| 4.4.6 腓肠肌HE染色 |
| 4.5 讨论 |
| 实验结论及展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 期间发表文章 |
（9）电针治疗对大鼠坐骨神经损伤功能修复作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 电针治疗对大鼠坐骨神经损伤功能的修复作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 电针治疗对失神经支配的骨骼肌萎缩的修复作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录: 中英文缩写对照表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 攻读学位期间临床轮转科室 |
| 攻读学位期间学位课程成绩 |
| 致谢 |
（10）“三法三穴”刺激参数对坐骨神经损伤大鼠感觉功能的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 周围神经损伤的研究进展 |
| 1. 周围神经损伤的分类 |
| 2. 周围神经损伤后的病理变化 |
| 3. 周围神经损伤的修复机制 |
| 4. 小结 |
| 综述二 周围神经损伤的治疗方法研究概况 |
| 1. 手术疗法 |
| 2. 药物疗法 |
| 3. 物理疗法 |
| 4. 其他疗法 |
| 5. 小结 |
| 综述三 推拿手法参数的研究概况 |
| 1. 概述 |
| 2. 刺激量与参数的关系 |
| 3. 手法参数的实验研究 |
| 4. 参数的测定与分析 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1. 实验动物及分组 |
| 2. 动物造模 |
| 3. 仪器及试剂 |
| 4. 干预方法 |
| 5. 取材时间 |
| 6. 指标测量 |
| 7. 正交试验方案 |
| 技术路线图 |
| 实验研究 |
| 实验一 从行为学角度探寻手法参数对SNI大鼠感觉功能的影响 |
| 1. 光热耐痛阈测定 |
| 2. 数据记录与统计 |
| 实验二 从形态及功能角度探寻手法参数对SNI大鼠腓肠肌的影响 |
| 1. 腓肠肌湿重恢复率及肌细胞直径测量 |
| 2. 光镜观察及图像分析 |
| 3. 结果记录与统计 |
| 实验三 从免疫组织化学角度探寻手法参数对关键部位NGF表达的影响 |
| 1. 脊髓背角及背根神经节NGF的测定 |
| 2. 免疫组化图片分析 |
| 3. 结果记录及统计 |
| 实验结果 |
| 1. 光热耐痛阈测定结果 |
| 2. 腓肠肌湿重恢复率测定结果 |
| 3. 肌细胞直径测量结果 |
| 4. 背根神经节NGF光密度测量结果 |
| 5. 脊髓背角NGF光密度测量结果 |
| 讨论 |
| 1. 选题依据 |
| 2. 选穴及取材时间点的选择依据 |
| 4. 正交试验的结果分析 |
| 5. 实验结果综合分析 |
| 6. 小结 |
| 实验结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 热刺痛仪 |
| 附录二 腓肠肌HE染色 |
| 附录三 脊髓背角NGF免疫组化 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
四、嗅鞘细胞-胶质细胞源性神经营养因子基因工程细胞移植对坐骨神经再生的作用（论文参考文献）
- [1]NSC联合OEC移植对SNHL模型大鼠耳蜗细胞凋亡的研究[D]. 曾友根. 南昌大学, 2020(08)
- [2]基于JNK信号通路探讨针刺对坐骨神经损伤大鼠神经修复的机制研究[D]. 陈怡然. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [3]新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用[D]. 李越. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019
- [4]间充质干细胞在周围神经损伤修复中的应用现状及前景分析[J]. 曹丽芝,冯乃波,王娟,陈嘉峰. 中国组织工程研究, 2019(33)
- [5]微囊化雪旺细胞移植对P2X2/3受体介导大鼠神经病理性疼痛的作用研究[D]. 张雅玲. 南昌大学, 2019(01)
- [6]低强度脉冲超声介导iPS-NSCs修复脊髓损伤的研究[D]. 吴秋丽. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]柴胡皂苷a促进坐骨神经损伤大鼠IL-10表达并抑制瘢痕形成的实验研究[D]. 黄梦强. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]人胚胎干细胞的神经干细胞诱导分化及神经干细胞分泌的微囊泡对坐骨神经缺损性损伤的修复作用研究[D]. 陈湘. 江苏大学, 2018(02)
- [9]电针治疗对大鼠坐骨神经损伤功能修复作用的研究[D]. 袁婷. 南京医科大学, 2017(01)
- [10]“三法三穴”刺激参数对坐骨神经损伤大鼠感觉功能的影响[D]. 贾文端. 北京中医药大学, 2017(08)