一、TRP-1反义核酸抑制恶性黑素瘤细胞增殖的体外及体内研究（论文文献综述）
祖丽胡玛尔·莫沙[1]（2018）在《RNA干扰hTERT基因对人恶性黑素瘤A375细胞增殖的影响》文中研究表明目的:建立特异性hTERT基因沉默模型并探讨靶向调控hTERT基因对人恶性黑素瘤A375细胞增殖能力的影响。方法:培养人恶性黑素瘤A375细胞且通过细胞STR分型鉴定确认细胞及交叉污染情况,将不同浓度（0、5.0、15.0、35.0nmol/L）的携带绿色荧光标记的特异性siRNA与不同体积（1.5、3.0、4.5μl）的转染试剂Hiperfect转染人恶性黑素瘤A375细胞,细胞的转染效率采用荧光显微镜判定,选出最佳的siRNA浓度和转染试剂体积;合成4条hTERT-siRNA（hTERT-siRNA-203、hTERTsiRNA-210、hTERT-siRNA-217、hTERT-siRNA-224）在最佳转染条件下分别转染人恶性黑素瘤A375细胞,24h后提取总mRNA,通过qPCR筛选干扰效率最佳的hTERT-siRNA,利用MTT法观察靶向沉默hTERT基因对黑素瘤细胞增殖能力的影响。结果:0、5.0、15.0、35.0nmol/L携带绿色荧光标记的特异性siRNA分别与1.5μlHiperfect转染人恶性黑素瘤A375细胞后,各组内转染效率分别为1.44%?0.49%、37.19%0.09%、23.46%0.17%、16.63%0.03%;3.0μlHiperfect的转染效???率分别为3.07%0.97%、73.46%0.03%、34.41%0.07%、29.16%0.05%;????4.5μlHiperfect的转染效率分别为1.59%0.91%、21.74%0.04%、29.04%0.01%、???31.15%0.26%,各特异性siRNA组与各Hiperfect组比较,存在差异且有统计学意义?（F=57.21,P<0.05）,5.0nmol/L siRNA与3μlHiperfect的转染效率明显高于其他各组（均P<0.05）,转染效率最佳。各个hTERT-siRNA组,阴性对照组及空白组hTERT mRNA相对表达量分别为0.36 0.03、0.79 0.07、0.57 0.01、0.64 0.03、????0.93 0.05、1.00 0.07,以上三组之间比较,差异有统计学意义（F=22.78,P<??0.05）,hTERT-siRNA-203 hTERT mRNA的表达量明显低于其他组（均P<0.05）,干扰效率最佳。hTERT-siRNA-203转染24h、48h、72h组的细胞增殖抑制率明显增高（分别为20.45%2.09%,31.53%2.44%,45.40%2.91%）,与阴性对???照组（2.75%0.54%,5.05%1.18%,8.45%1.42%）、空白对照组（3.93%????1.09%,6.84%2.46%,12.23%2.84%）比较,有统计学意义（P<0.01）。结??论:hTERT-siRNA-203可使hTERT mRNA的表达显着下调,hTERT基因沉默模型成功建立,靶向调控hTERT可显着抑制恶性黑素瘤A375细胞的增殖能力。
张子茜[2]（2015）在《基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的作用研究》文中认为黑素瘤是皮肤肿瘤中侵袭性最强、恶性程度最高的一种类型,根据世界卫生组织统计,近年来在世界范围内,黑素瘤患者数量增加的速度高于其他任何其他类型癌症;而且据估计,黑素瘤的发病率在未来10到20年有可能倍增。在皮肤肿瘤中,虽然黑素瘤仅占约5%,但黑素瘤病例的死亡人数可占皮肤癌病例死亡数的74%。早期诊断的黑素瘤患者的临床预后通常较好,如在I级黑素瘤中5年生存率可达到90%,但随着肿瘤的进展,黑素瘤的5年生存率迅速降低,如II级黑素瘤的5年生存率为60%,III级黑素瘤的5年生存率为10%,而在恶性程度最高的IV级黑素瘤中几乎无人幸存至5年。这一特点说明,黑素瘤侵袭转移的恶性生物学行为是造成肿瘤预后不良的重要原因。因此,深入研究黑素瘤侵袭转移的分子调节机制,明确其中发挥关键作用的分子,不仅可以为黑素瘤治疗提供可用的预后标记分子,还可以为针对黑素瘤侵袭转移进行分子靶向干预提供潜在的靶点。基质金属蛋白酶是一种蛋白水解酶基因家族,这类蛋白水解酶的活性依赖于锌离子,是最常见的降解细胞外基质的蛋白酶,基质金属蛋白酶的主要的生物学作用是特异性降解细胞外基质内的多种成分。绝大多数细胞在正常生理状态下不储备基质金属蛋白酶,临时合成基质金属蛋白酶则在机体出现各种需要时在细胞中进行。体内的基质金属蛋白酶首先以无活性形式的酶原分泌到细胞外的,然后被蛋白酶分裂水解转变为活化形式的基质金属蛋白酶。在生物体的生理病理过程中如胚胎发育、软骨骨化、血管再生、创伤修复以及组织重塑等,基质金属蛋白酶的表达可发挥重要的作用。除此之外,在各种肿瘤中,基质金属蛋白酶多呈现高表达或及高活性。肿瘤的侵袭是一个复杂多步骤的过程,在肿瘤细胞向恶性细胞分化的过程中,肿瘤细胞逐步穿透基底膜及细胞外基质。基底膜及细胞外基质的蛋白质降解是侵袭的一个重要的步骤,需要蛋白酶参与其中。肿瘤浸润生长和转移的基本过程为:首先在原发肿瘤的基础上向深部侵袭性生长,之后侵袭的肿瘤细胞侵透基质并进入淋巴管或血管系统,随淋巴循环或血液循环到达远处组织器官生长并形成转移灶。在这一过程中,细胞外基质形成的组织屏障结构具有阻止肿瘤细胞侵袭、限定肿瘤于原发部位的作用。由于基质金属蛋白酶的主要生物学活性是特异性的降解细胞外基质,因此在肿瘤侵袭转移的过程中,基质金属蛋白酶家族成员是降解细胞外基质最重要的蛋白酶。基质金属蛋白酶家族成员由于具有内肽酶活性,可广泛的降解细胞外基质以及基底膜的主要成分,不仅在正常组织和细胞的生理及病理过程中具有作用,而且还在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用,因此得到了广泛的研究。目前,已经发现的基质金属蛋白酶家族有28个成员,各成员的底物和作用又不尽相同,因此,明确基质金属蛋白酶家族成员的作用,可以为了解肿瘤侵袭转移的分子机制提供理论基础。基质金属蛋白酶-12作为基质金属蛋白酶家族中的一员,其表达模式和在黑素瘤中的作用目前尚未见报道。为了阐述基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的作用,我们在本研究中检测了基质金属蛋白酶-12在临床黑素瘤标本中的表达模式、分析了基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中表达的临床相关性,在黑素瘤细胞系中验证了基质金属蛋白酶-12对肿瘤细胞侵袭能力的作用,并探索了CD147在黑素瘤细胞系中对基质金属蛋白酶-12的调节作用。研究结果显示,基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的表达显着高于正常皮肤组织,而且基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的表达与肿瘤的侵袭深度、淋巴结转移、远处转移和临床分期密切相关,基质金属蛋白酶-12高表达的黑素瘤多倾向于表现为深度侵袭、发生淋巴结和远处转移、进展性临床分期等高度侵袭转移性的恶性生物学行为。为了在细胞系中验证基质金属蛋白酶-12与黑素瘤侵袭性的关系,我们在人黑素瘤细胞系A-375中下调基质金属蛋白酶-12的表达后分析肿瘤侵袭性的变化,结果显示,下调基质金属蛋白酶-12的表达可显着降低黑素瘤细胞的侵袭能力。而且在黑素瘤细胞系中干涉CD147的表达后,基质金属蛋白酶-12的表达出项了相应的下调。以上结果证明,基质金属蛋白酶-12在人黑素瘤中表达上调,而且基质金属蛋白酶-12的表达与黑素瘤的临床侵袭和转移状态密切相关;在黑素瘤细胞中的研究证明上调基质金属蛋白酶-12表达可明显促进黑素瘤细胞的侵袭;基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的表达可由CD147诱导。综上所述,本研究明确了基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的表达模式,阐明了基质金属蛋白酶-12对黑素瘤细胞侵袭性的作用,为认识基质金属蛋白酶-12在黑色素中的作用提供了理论依据。
刘立宏[3]（2014）在《miR-125b抑制骨肉瘤增殖及转移的作用及其可能的信号机制研究》文中指出目的：检测miR-125b在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系中的表达水平,研究miR-125b在骨肉瘤细胞中的细胞生物学作用；通过生物信息学预测并验证其可能参与调控的信号通路,探索其在骨肉瘤发生发展中可能的分子作用机制。方法：1、QPCR技术检测15例骨肉瘤组织标本及配对的癌旁组织标本,以及骨肉瘤细胞系MG63、Saos-2, U2os和作为对照的人胚肾细胞中miR-125b的表达水平；2、化学合成miR-125b核酸和miR-125b反义核酸转染转染至MG63和Saos-2骨肉瘤细胞系,Transwell实验检测miR-125b过表达和沉默对MG63和Saos-2骨肉瘤细胞侵袭能力的影响；化学合成miR-125b核酸和miR-125b反义核酸转染至MG63和Saos-2骨肉瘤细胞系,CCK8实验检测miR-125b过表达和沉默对MG63和Saos-2骨肉瘤细胞增殖能力的影响；3、采用裸鼠荷瘤实验体内观察过表达miR-125b对骨肉瘤细胞Saos-2在小鼠体内的成瘤能力影响；4、利用生物信息学软件对miR-125b进行靶基因的预测分析,筛选出miR-125b参与MARK信号通路的潜在靶基因；5、QPCR及Western blot实验检测MG-63细胞中miR-125b过表达及沉默状态下MARK信号通路中上游基因MKK7mRNA及蛋白表达水平；6、采用miR-125b过表达质粒,miR-125b过表达对照质粒,miR-125b沉默质粒,miR-125b沉默对照质粒与包含MKK73’UTR区域序列的双荧光素酶报告系统质粒pEZX-MT05转染到MG-63细胞,检测不同组的荧光素酶活性,判断骨肉瘤细胞中miR-125b与MKK73’UTR区域的特异性结合。结果：1、miR-125b在骨肉瘤组织及细胞系中均低表达；2、过表达miR-125b水平抑制MG63和Saos-2骨肉瘤细胞的迁移能力而沉默miR-125b能增加MG63和Saos-2骨肉瘤细胞的迁移能力；过表达miR-125b水平抑制MG63和Saos-2骨肉瘤细胞的增殖而抑制miR-125b表达水平可以促进MG63和Saos-2骨肉瘤细胞的增殖；3、过表达miR-125b水平可以明显抑制Saos-2骨肉瘤细胞在小鼠体内的成瘤能力；4、生物信息学预测发现miRNA125b对MAPK信号通路上游8个基因可能存在靶向调控作用,其中MKK7的3’UTR区具有能够与miR-125b结合的高度保守序列；5、沉默miRNA125b表达,MEKK7的mRNA和蛋白表达量上升,而过表达niR-125b, MKK7的mRNA和蛋白表达量下降；6、与对照组相比,miR-125b过表达质粒组荧光素酶活性明显下降,而miRNA-125b沉默质粒组荧光素酶活性明显升高。结论：1、miR-125b在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系中均低表达；2、miR-125b过表达不仅可以在体外抑制骨肉瘤细胞的增殖,迁移,还可以抑制骨肉瘤细胞在小鼠体内的成瘤能力；3、推论MKK7可能是骨肉瘤细胞中miR-125b参与MAPK信号通路的潜在靶向调控基因。
张石琳[4]（2014）在《五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖及酪氨酸酶活性作用的研究》文中研究说明第一部分：研究背景[摘要]恶性黑色素瘤是起源于神经嵴黑色素细胞的恶性肿瘤,目前治疗以手术、化疗、放疗、细胞因子治疗及细胞免疫治疗为主,但疗效并不理想；中医治疗是我国的特色治疗方法,我国拥有丰富的中药资源宝库,其中有相当一部分的中药通过抑制皮肤黑色素细胞中酪氨酸酶的活性而发挥美白作用,目前被用于皮肤病的治疗及化妆品的研发。恶性黑色素瘤细胞均伴有酪氨酸酶活性升高,因此,具有美白功效的中药是否具有抗恶性黑色素瘤作用值得研究。第二部分：五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖及酪氨酸酶活性作用的研究[摘要]目的：探讨五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖作用及对酪氨酸酶活性的影响。方法：选取五种研究较多的中药单体,熊果苷、丹参素、芦荟大黄素、姜黄素、丹参酮IIA,采用MTT比色法测定不同浓度的中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖抑制作用,多巴速率氧化法检测不同浓度中药单体对A375细胞酪氨酸酶活性影响。结果：五种中药单体对A375细胞均有显着的增殖抑制作用（P<0.05）,并在定浓度范围内呈剂量依赖性；熊果苷、丹参素、芦荟大黄素、姜黄素均具有抑制A375酪氨酸酶活性的作用；高浓度熊果苷和丹参素作用48hr后,对A375细胞酪氨酸酶活性抑制作用具有统计学差异（P<0.05）；高浓度芦荟大黄素及姜黄素作用48hr后,虽对A375细胞酪氨酸酶活性有抑制作用,但与对照组相比未见统计学差异；丹参酮IIA无抑制酪氨酸酶活性的作用。结论：熊果苷、丹参素、芦荟大黄素、姜黄素、丹参酮IIA均能显着抑制A375细胞增殖,抑制作用与浓度成正相关；一定浓度的熊果苷、丹参素对A375细胞增殖抑制的同时亦显着抑制了其细胞内酪氨酸酶的活性；而芦荟大黄素、姜黄素、丹参酮IIA对A375细胞增殖抑制的同时细胞内酪氨酸酶活性未见显着抑制；我们推测对酪氨酸酶活性的抑制作用可能是具有美白功效的中药单体熊果苷、丹参素抑制A375细胞增殖的作用机理之而芦荟大黄素、姜黄素、丹参酮IIA不是通过抑制肿瘤细胞内酪氨酸酶活性而发挥对A375细胞的增殖抑制作用。
赵光[5]（2013）在《六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响》文中提出目的：观察六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响,以初步探讨该方治疗白癜风的机制。方法：（1）人含药血清的制备：选取5名健康志愿者,在服药前一天空腹采取静脉血10ml；志愿者连续服药3天,每天2次,在末次服药后1小时采血静脉血20m1,制备血清。（2）购入人M14黑色素瘤细胞,正常培养并完成细胞传代操作。（3）MTT法检测含药血清对人M14黑色素瘤细胞增殖活力的影响：细胞传至第三代时,并呈对数生长状态时,将细胞接种至96孔板,分为A、B、C、D、E5组。在细胞贴壁后,5组细胞分别给予人正常血清、5%含药血清、10%含药血清、20%含药血清和阳性对照药物干预；继续生长72h,MTT法检测各组细胞活力。（4）酪氨酸酶活性的检测：取对数生长期的人M14黑色素瘤细胞接种至96孔板,分组干预同上,培养72h后,采取L-DO-PA氧化法检测各组细胞中酪氨酸酶活性。（5）黑色素含量测定：将人M14黑色素瘤细胞接种至6孔板中,分组干预同上,继续培养72h后,经NaOH裂解法测定各组细胞中黑色素的含量。（6）半定量PCR检测各组药物处理后TYRP-1和MITF的基因表达：各组细胞处理因素同前,按RT-PCR试剂盒步骤检测各组细胞中TYRP-1和MITF的基因的表达。（7）采用SPSS19.0统计软件对实验数据完成分析。结果：（1）M14细胞在正常条件培养细胞生长较好,传代培养成功。（2）MTT检测结果：实验药物血清组及阳性对照组A490值均高于正常血清组,差异具有统计学意义（P<0.01）；实验药物血清组对A490值的影响随着浓度增高而增加。对M14细胞的增值率以20%实验药物血清组最高,5%实验药物血清组最低。（3）对M14细胞酪氨酸酶（TYR）活性的影响：正常血清组A490值的均数值最低,B、C、D、E组与正常血清组均数相比较,均有统计学意义（P<0.01）；C组与B和D组相比较,均数值最大,且P<0.05,差异具有统计学意义,而与E组（阳性对照组）相比较,P>0.05,无统计学意义；10%含药血清组对M14黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性影响最大。（4）对M14细胞黑色素含量的影响：NaOH裂解法测得A400值中,各含药血清组均高于正常血清组,C组与A组间P<0.05,E组与A组间P<0.05,差异具有统计学意义；黑色素含量E组最高,C组次之,C组与E组间P>0.05,差异无统计学意义；即10%含药血清组促进黑色素的合成最为显着。（5）RT-PCR的结果：六味地黄汤通络方含药血清能促进M14细胞中TYRP-1和MITF的mRNA表达,10%含药血清对TYRP-1mRNA的表达作用最显着,对MITFmRNA表达的影响最强的是20%含药血清组。结论：（1）六味地黄通络方能促进M14黑色素瘤细胞的增殖,其影响与含药血清浓度呈正相关。（2）六味地黄通络方能增强M14黑色素瘤细胞酪氨酸酶的活性,10%含药血清组作用最强。（3）六味地黄通络方能促进M14黑色素瘤细胞黑色素的合成。（4）六味地黄通络方促进黑色素合成途径相关的基因TYRP1和MITF的表达,在分子生物学水平证明六味地黄通络方能促进黑色素合成。
周斌兵,Haiying Zhang,Marc Damelin,Kenneth G.Geles,Justin C.Grindley,Peter B.Dirks[6]（2012）在《肿瘤始发细胞:抗肿瘤药物研发和评价的挑战与机遇》文中研究说明关于肿瘤形成于肿瘤始发细胞（tumour-initiating cell）（通俗的名称为肿瘤干细胞）的假设,由于该细胞可能作为一种新的恶性白血病或实体肿瘤治疗的更有效细胞靶点,而受到了广泛的关注。而且,肿瘤始发细胞似乎更具耐药能力,这也解释了目前治疗药物在治疗人类恶性肿瘤中的局限性。尽管仍有许多工作需要去鉴定肿瘤始发细胞的生物学特征,目前已有许多研究致力于开发出新的针对这一细胞的治疗策略。这篇综述总结了近年来在肿瘤干细胞研究领域的进展,并着重探讨在抗肿瘤药物研发方面的挑战和机遇。
蔡华华[7]（2011）在《恶性黑素瘤中SOX4的表达及其对Wnt/β-catenin信号途径作用的研究》文中进行了进一步梳理第一部分SOX4在人恶性黑素瘤组织中的表达目的：研究SOX4在人类恶性黑素瘤组织中的表达情况,探讨SOX4与恶性黑素瘤之间可能存在的关系。方法：用免疫组化SP法检测30例恶性黑素瘤组织中的SOX4的表达情况。结果：在恶性黑素瘤组织中,肿瘤细胞的细胞核内可见棕黄色至深褐色颗粒,胞浆也可着色。30例恶性黑素瘤组织中,有17例SOX4表达为阳性,阳性率为56.7%,而正常人皮肤组织中未见阳性表达,两组间SOX4表达阳性率具有显着性差异（P<0.05）。结论：在恶性黑素瘤组织中SOX4出现异常的阳性表达,SOX4可能与恶性黑素瘤的发病机制有关。第二部分采用RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞中SOX4的表达并研究其对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响目的：研究恶性黑素瘤A375细胞中SOX4对Wnt/β-catenin信号途径中Wnt3A及β-catenin的表达的影响以及对Wnt/β-catenin信号途径活性的影响,探讨恶性黑素瘤A375细胞中SOX4对Wnt/β-catenin信号途径的调控作用及其可能的机制。方法：采用RNA干扰技术,将两段SOX4 siRNA导入恶性黑素瘤A375细胞,使SOX4基因沉默,分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测干扰后Wnt/p-catenin信号途径中Wnt3A及β-catenin的mRNA及蛋白表达情况的变化,并采用TOPflash/FOPflash双质粒报告基因系统检测恶性黑素瘤A375细胞中Wnt/β-catenin信号途径活性随RNA干扰变化的情况。结果：本研究使用的两段SOX4 siRNA均成功转染恶性黑素瘤A375细胞并有效抑制SOX4基因表达（P<0.05）,发挥了对SOX4的基因沉默作用。转染SOX4 siRNA对Wnt3A的mRNA及蛋白表达水平无显着影响（P>0.05）,对β-catenin的mRNA表达水平亦无显着性影响,但使得细胞内β-catenin蛋白量减少（P<0.05）。同时,转染了SOX4 siRNA的A375内Wnt/β-catenin信号途径活性较转染非特异性siRNA的A375细胞及空白对照组为低,差异具有显着性（P<0.05）。结论：在恶性黑素瘤A375细胞中,SOX4对Wnt/β-catenin信号途径具有正向调控作用,这种调控作用与β-catenin有关。SOX4上调A375细胞中β-catenin蛋白含量,其作用发生在转录后水平,可能是SOX4抑制β-catenin降解的结果,也有可能与转录后调控或翻译调控等有关。第三部分SOX4 siRNA对恶性黑素瘤细胞中Survivin的表达及细胞增殖的影响目的：研究SOX4对恶性黑素瘤A375细胞中Wnt/β-catenin信号途径的靶基因Survivin的基因表达的影响及对A375细胞增殖活力的影响方法：分别用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测RNA干扰后A375细胞Survivin的mRNA及蛋白表达水平的变化；用MTT法检测A375细胞的增殖活力。结果：（1）SOX4 siRNA使得A375细胞Survivin的mRNA及蛋白表达水平均显着下降（P<0.05）。（2）转染了SOX4 siRNA的A375细胞增殖活力较对照组明显下降（P<0.05）。结论：SOX4对恶性黑素瘤A375细胞的增殖具有促进作用,其机制可能与SOX4增强Wnt/β-catenin信号途径活性而上调Survivin的基因表达有关。
郑小波[8]（2010）在《c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究》文中进行了进一步梳理两性配子的生成是动物繁衍的前提和基础,睾酮在精子生成过程中具有十分重要的作用。睾酮不仅在精子生成过程中具有十分重要的作用,而且睾酮还参与维持雄性动物的第二性征,对精子的活力、授精的成功率也有重要的影响。间质细胞是雄性动物体内产生睾酮最主要的细胞,研究间质细胞睾酮合成的调控机制对于深入认识精子生成的分子机制,预防和治疗雄性不育均有十分重要的意义。关于睾酮合成机制的研究以往多集中在下丘脑-垂体-睾丸轴内分泌调节和促性腺激素对睾酮合成的影响上,但近年来的研究表明,原癌基因的表达在睾酮合成中起着十分重要的作用。本研究以荣昌猪为实验动物,利用体内体外模型探讨原癌基因c-jun对睾酮合成的调节机制,为进一步认识原癌基因在精子生成中的作用提供基础数据。大量的研究表明,睾丸间质细胞的睾酮分泌也伴有某些原癌基因的表达变化,特别是即时早期基因的表达变化。这些即时早期基因主要包括fos成员和jun家族。我们以c-jun为目的基因,以1、3、5周龄的荣昌仔猪睾丸为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR方法和放射免疫法研究了c-jun mRNA在仔猪睾丸中的表达及表达与血浆睾酮水平的关系,并切片观察睾丸组织结构的变化。实验结果表明：c-jun mRNA在1、3、5周龄仔猪睾丸组织中均有表达。其中3周龄表达较高,5周龄次之,1周龄较低,3周龄与5周龄和1周龄相比存在显着差异（P<0.05）。血浆睾酮水平在第3周最高,在其他时期较低,3周龄与1周龄、5周龄比较差异显着（P<0.01）,3周龄仔猪睾丸间质细胞结构逐渐完整,5周龄数量有所下降。c-jun mRNA的表达与血浆睾酮水平及间质细胞结构变化可能存在一致性。3周龄荣昌仔猪睾丸作为研究睾酮分泌机制的材料是适宜的。通过不同时间仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达分析发现,其表达水平与血浆睾酮浓度检测结果有一致性。为了进一步了解c-jun mRNA表达和睾酮分泌的关系,采用了体外培养的间质细胞进行研究,目的是排除其他细胞（如支持细胞、生精细胞）的干扰。通过锥虫蓝试验和3β-HSD酶活性检测,用酶解法结合差速离心分离的荣昌仔猪间质细胞数量较多,纯度较高,其活力为（93.0±4.9）%,纯化后的细胞百分率为（85.1±3.6）%。睾酮基础分泌量随培养的时间延长而增高,两者呈线性关系（r=0.826,P<0.01）,培养至4h后增长峰趋于平缓。随着hCG刺激浓度的增加,睾酮分泌量增加,两者呈明显线性关系（r=0.893,P<0.01）。当hCG浓度达到50IU/mL时,诱导睾丸间质细胞睾酮分泌量最高。本实验中均采用50IU/mL为hCG诱导浓度。为了进一步准确了解c-jun mRNA表达与睾酮分泌的关系,我们采用了反义核酸技术,即将c-jun基因制备成反义c-junASODNs与体外培养的3周龄睾丸间质细胞共育,了解c-jun表达与睾酮分泌的量效关系。同时,通过MTT和TUNEL法了解睾丸间质细胞睾酮分泌过程中细胞增殖和凋亡的作用。结果显示,c-jun ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下睾酮分泌（P<0.01）及睾丸间质细胞增殖（P<0.01）,当加入1μmol/L c-junASODNs时,显着抑制睾丸间质细胞的凋亡（P<0.05）。这表明c-jun可促进基础状态下仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌,这种作用与c-jun促进睾丸间质细胞增殖和凋亡有关。睾丸间质细胞的分泌有基础性分泌和促性腺激素诱导的分泌,后者受下丘脑—垂体—性腺轴调节。绒毛膜促性腺激素hCG可与间质细胞表面受体结合,使ATP（?）→cAMP,而cAMP可动员胆固醇经过一系列中间步骤,最终生成睾酮。本试验通过c-jun ASODNs诱导观察c-jun在调节hCG诱导的仔猪睾丸间质细胞分泌的作用,采用c-jun ASODNs拮抗c-jun,维拉帕米阻断钙通道,添加cAMP观察其对体外培养睾丸间质细胞睾酮分泌的影响。结果发现hCG可刺激荣昌仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌,c-jun ASODNs（0.125-2μmol/L）呈剂量依赖性抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的分泌（P<0.01）,加用cAMP后睾酮分泌增加,可逆转c-jun ASODNs抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的睾酮分泌。维拉帕米（10-5mol/L）可增加c-jun ASODNs抑制睾酮分泌作用。因此,推测c-jun在促进hCG诱导间质细胞分泌睾酮过程中,主要通过以下信号途径传递信息：（1）hCG作用于仔猪睾丸间质细胞膜特异性受体,通过G蛋白介导,激活腺苷酸环化酶,从而使cAMP生成增多,然后以cAMP作为第二信使,通过cAMP-PKA途径导致核内原癌基因c-jun转录和翻译,其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区（1eucne zipper）形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1 （activator protein 1）位点结合,直接调节转录活性,激活一些晚期基因转录,如P450c17mRNA,后经过一系列酶作用,促进睾酮的合成和分泌。（2）hCG作用于睾丸间质细胞膜上特异性受体,使细胞内Ca2+浓度增高,然后以Ca2+作为第二信使,通过IP3-DAG-钙调蛋白激酶途径继而使核内原癌基因c-jun转录激活。其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1位点结合,直接调节转录活性,激活一些晚期基因转录,如P450c17 mRNA,然后经过一系列酶作用,促进睾酮的合成和分泌。综上所述,我们可以得到以下结论：1、c-jun mRNA在1、3、5周龄荣昌仔猪睾丸中均有表达,3周龄较高,其变化趋势与血浆中睾酮水平变化有一致性。2、酶解法结合差速离心分离的荣昌仔猪间质细胞活力强,纯度较高,数量较多。随着培养时间延长,睾酮分泌量增加,4h达峰值。随着hCG的浓度增加,睾酮分泌增加,50IU/mL的hCG刺激的睾酮分泌达峰值。3、c-jun能剂量依赖性促进基础状态下的睾酮分泌,可能与促进间质细胞增殖和凋亡有关。4、c-jun能剂量依赖性影响hCG诱导的睾酮分泌。5、c-jun在调节hCG诱导睾酮的分泌过程中,可能的机制是通过hCG→激活受体→激活第二信使（cAMP,Ca2+）→诱导c-jun基因转录mRNA→在胞浆内表达产物c-Jun进入核内其表达产物间或产物与c-fos蛋白在亮氨酸拉链区（1eucine zipper）形成同源或异源二聚体复合物,与靶基因的AP-1 （activator protein-1）位点结合→激活一些晚期基因转录,如P450c17mRNA,后经过一系列酶促作用→促进睾酮的合成和分泌。
徐继敏[9]（2009）在《黑芝麻水提液对鼠黑素瘤细胞黑色素生成及相关基因表达的影响》文中研究表明白发的发生主要是由于毛囊中黑素细胞酪氨酸酶的活性降低或丧失,合成黑色素的功能减退,使毛干中缺乏黑色素而引起。传统医学治疗白发的常用中药有何首乌、黑芝麻等,目前国内对于何首乌疗效的研究较多,关于黑芝麻在白发治疗方面的研究很少。为了研究黑芝麻在治疗白发方面的疗效和作用机制,本课题采用水提法提取黑芝麻有效成分,以鼠B16F1黑素瘤细胞为模型,运用生物化学,分子生物学和免疫学方法,在细胞水平和分子水平上,研究黑芝麻水提液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素生成量及黑素合成途径相关基因表达的影响,并探讨黑芝麻促进黑色素生成的机理。黑芝麻水提液能够使B16F1黑素瘤细胞的增殖率和活性有所提高（P>0.05）;促进B16F1黑素瘤细胞酪氨酸酶活性显着增强（P<0.05）,黑色素生成量显着增加。在分子水平上,RT-PCR和Western结果显示,黑芝麻水提物能够显着促进小眼畸形相关转录因子（MITF）的转录和翻译,其主要下游基因酪氨酸酶（TYR）的转录和翻译也呈现同步增强,并且随着处理浓度越大,增强效果越明显;酪氨酸酶相关蛋白-1（TRP-1）和酪氨酸酶相关蛋白-2（TRP-2）的表达无显着变化（P>0.05）。本课题证实黑芝麻水提液在体外能显着增加黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性,有效刺激B16F1黑素瘤细胞中黑素合成,实验结果表明这种效果可能是通过促进MITF基因的表达,调控TYR基因在mRNA和蛋白质水平上增强表达来完成。
刘业强[10]（2008）在《转铁蛋白受体介导Tf-PEI-shRNA complex内吞靶向沉默缺氧诱导因子-1α抑制恶性黑素瘤生长的实验研究》文中认为第一部分HIF-1α及其下游靶基因VEGF和GLUT-1在黑素瘤的表达目的研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）和葡萄糖转运体-1（GLUT-1）在恶性黑素瘤组织和恶性黑素瘤细胞系A375,A875,KZ28中的表达,探讨HIF-1α作为黑素瘤基因治疗靶点的可能性。方法①应用免疫组织化学方法检测77例恶性黑素瘤组织HIF-1α、VEGF、GLUT-1的表达,分析其表达的相关性以及与临床病理关系,并且以20例色素痣组织作为对照研究。②应用免疫组织化学方法、Western blot方法、ELISA方法对缺氧条件下培养的A375,A875,KZ28中HIF-1α、VEGF、GLUT-1进行检测,并且以常氧条件下培养的上述细胞系作对照。结果①在77例恶性黑素瘤组织中,65例表达HIF-1α,55例表达VEGF,53例表达GLUT-1,而在20例色素痣组织2例表达HIF-1α、4例表达VEGF、3例表达GLUT-1;②在恶性黑素瘤组织中,HIF-1α与VEGF、GLUT-1的表达呈正相关;③在恶性黑素瘤组织中HIF-1α与VEGF、GLUT-1的表达与肿瘤的恶性程度相关。④HIF-1α、VEGF、GLUT-1在缺氧培养条件下的A375,A875,kZ28中表达明显高于上述三株细胞系在常氧培养条件下的表达。⑤分泌型的VEGF和膜型表达的GLUT-1随缺氧时间延长而增加,与HIF-1α表达正相关。结论①HIF-1α、VEGF、GLUT-1可作为区别良、恶性黑素细胞肿瘤的重要指标;②在黑素瘤中HIF-1α的表达影响其下游基因VEGF、GLUT-1的表达③HIF-1α是黑素瘤基因治疗的理想靶点。第二部分HIF-1α-shRNAs表达载体的构建及鉴定目的构建针对HIF-1α的发卡样shRNA真核表达载体HIF-1α-shRNA,并转染恶性黑素瘤细胞,证实其在体外培养恶性黑素瘤细胞中对HIF-1α的干扰作用及引起的效应。方法①人工合成三对互补并编码相应短发夹状HIF-1α-shRNAs的寡核苷酸链,将其插入到Pgenesil-1载体中,经酶切和测序鉴定所构建的重组体是否正确;②采用实时定量逆转录聚合酶链反应（real time RT-PCR）、Western blot分别检测转染细胞HIF-1αmRNA和蛋白的表达变化。对其下游基因分泌型VEGF和膜型GLUT-1蛋白表达的变化分别采用ELISA和流式细胞仪检测技术;③在人恶性黑素瘤细胞系A3758中,用G418筛选沉默效果最佳的HIF-1α-shRNAs的细胞,用FCM检测GFP的表达鉴定稳定转染的单克隆细胞系;④上述稳转细胞系在缺氧情况下培养,观察其凋亡和增殖变化。结果①经酶切和测序证明HIF-1α-shRNAs序列正确;②三株MM细胞系中转染HIF-1α-shRNAs载体后,shRNA1沉默效果最佳,HIF-1αmRNA和蛋白表达均较对照组明显下降（P<0.01）,并在三株MM细胞系中具有平行作用,同时也可以下调VEGF和GLUT-1的表达。③荧光显微镜下观察到了G418筛选稳定表达shRNA1的A375细胞,FCM检测GFP表达均在98%以上;④稳定表达shRNA1的A375细胞在缺氧条件培养可以引起细胞凋亡和抑制细胞增殖。结论测序结果表明发卡样的HIF-1α-shRNA真核表达载体构建成功,转染A375、A875、KZ28细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭HIF-1α的表达,下调VEGF和GLUT-1的表达,筛选和鉴定出稳定转染单克隆细胞系A375在缺氧条件下可以引起细胞凋亡和抑制细胞增殖,为进一步研究HIF-1α-shRNA载体在恶性黑素瘤治疗中的作用提供了实验基础。第三部分靶向分子TfR在恶性黒素瘤表达目的检测基因治疗靶向分子TfR在恶性黑素瘤组织和细胞系A375、A875、KZ28的表达,以明确TfR作为基因治疗的靶向分子的可能性。方法①应用免疫组织化学方法检测77例恶性黑素瘤组织TfR的表达,并且以20例色素痣组织作为对照研究。②应用免疫组织化学方法、western blot方法、流式细胞仪检测方法对常氧和缺氧条件下培养的A375,A875,KZ28中TfR表达进行检测,并且以已知低表达TfR的卵巢癌细胞系A2780进行对照。③分析在体外常氧和缺氧条件下培养的MM细胞株中TfR表达不同的可能机制。结果①在77例恶性黑素瘤组织中,70例表达TfR,而在色素痣组织只有5例表达;②在恶性黑素瘤组织中,TfR与肿瘤的病理分期相关;③在常氧培养的A375,A875,KZ28中TfR的表达分别为97%,89%,79%,A2780的表达为2%;④免疫组织化学方法、western blot方法检测恶性黑素瘤组织中TfR的表达与流式结果趋势相同。⑤缺氧在A375细胞株中对TfR的表达呈双相作用,早期表达减少,晚期表达增加。⑥缺氧对A375细胞株中对TfR的表达呈双相作用可能与缺氧早期促进凋亡,晚期引起细胞增殖有关。结论①TfR在恶性黑素瘤组织和细胞系A375,A875,KZ28明显高表达,是理想的黑素瘤基因治疗的靶向分子。②缺氧对黑素瘤细胞系TfR的表达呈双相作用,对我们个体化的利用TfR作为靶向分子提供了更加合理的理论依据。第四部分Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex对恶性黑素瘤治疗靶向性实验研究目的研究Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex在TfR高表达的黑素瘤细胞系A375以及在A375荷瘤鼠的体内模型的靶向分布,以期为下一步系统使用Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex治疗A375荷瘤鼠提供理论依据和实验数据。方法①应用FCM方法检测转染不同实验组的GFP的表达,以TfR低表达的A2780细胞系做对照。②应用Real time RT-PCR、western blot方法检测Tf-PEI-HIF-1α- shRNA complex系统治疗的A375荷瘤鼠和A2780荷瘤鼠中肿瘤组织以及重要脏器GFP的表达。结果①在体外实验中,A375组中,Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex转染后GFP表达到达65%,与脂质体转染相当,在A2780组中,Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex转染后均在5%以下。②在体内实验中,Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex系统治疗的A375荷瘤鼠的肿瘤组织较重要脏器肝、脾、心、肾GFP的mRNA及蛋白质具有明显差异（P<0.01）,在对照组A2780荷瘤鼠中肿瘤组织与重要脏器肝、脾、心、肾GFP的mRNA及蛋白质没有明显表达差异（P>0.05）。结论①Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex靶向治疗在TfR高表达的黑素瘤细胞系A375有特异性靶向分布,并且转染效率高。②在TfR高表达的黑素瘤细胞系A375荷瘤鼠中,Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex系统靶向治疗具有肿瘤靶向特异性,为黑素瘤基因治疗研究提供了实验依据。第五部分Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex对恶性黑素瘤荷瘤鼠生物学行为影响的实验研究目的观察Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex系统治疗对A375荷瘤鼠的生长抑制及可能的机制进行探讨。方法①分别对接受Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex系统治疗的A375、A2780荷瘤鼠肿瘤大小进行测量,按公式（L×W2）/2计算肿瘤体积大小。②治疗结束后处死荷瘤鼠,采用免疫组化和western blot方法检测HIF-1α、VEGF、GLUT1的表达情况。③治疗结束后处死荷瘤鼠,采用免疫组化方法检测MVD;酶显色法检测肿瘤组织糖酵解产物乳酸含量。末端脱氧核苷酸转移酶标记法（TUNEL）定量检测两组裸鼠模型的肿瘤组织凋亡;结果①体内实验证明,实验组肿瘤生长速度也明显减慢（P<0.01）②实验组HIF-1α、VEGF、GLUT1表达明显低于对照组（P<0.01）③实验组和对照组MVD无显着性差异（P>0.05）。④实验组肿瘤组织匀浆的乳酸含量明显低于对照组（P<0.01）。⑤实验组可见大量凋亡细胞,对照组仅见少许凋亡细胞,实验组凋亡指数与对照组相比有显着性差异（P<0.01）。结论①通过Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex靶向RNA干扰技术不但能阻断HIF-1α的表达,还能沉默其下游靶基因VEGF、GLUT1的表达,从而在体内可显着性抑制恶性黑素瘤生长,为恶性黑素瘤基因治疗研究提供了实验依据。②Tf-PEI-HIF-1α-shRNA complex抑制恶性黑素瘤生长,可能与抑制糖酵解,促进肿瘤组织凋亡有关,未发现与抑制肿瘤血管生成有关。
二、TRP-1反义核酸抑制恶性黑素瘤细胞增殖的体外及体内研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、TRP-1反义核酸抑制恶性黑素瘤细胞增殖的体外及体内研究（论文提纲范文）
（1）RNA干扰hTERT基因对人恶性黑素瘤A375细胞增殖的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 实验内容与方法 |
| 1 材料和试剂 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 引物合成 |
| 1.5 细胞培养常用试剂及其配置 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 细胞转染 |
| 2.3 提取细胞总RNA |
| 2.4 MTT实验 |
| 3 质量控制 |
| 4 统计方法 |
| 附：技术路线图 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（2）基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的作用研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 实验一MMP-12 在黑素瘤临床标本中的表达 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二MMP-12 在黑素瘤标本中表达的临床相关性分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三MMP-12 干涉黑素瘤细胞系的建立和鉴定 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四CD147 对MMP-12 的调节作用研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（3）miR-125b抑制骨肉瘤增殖及转移的作用及其可能的信号机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 目录 |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 miRNA-125b抑制骨肉瘤细胞增殖与转移的作用 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 实验材料 |
| 1.2.1 细胞系来源和实验动物 |
| 1.2.2 患者临床资料 |
| 1.2.3 主要实验仪器 |
| 1.2.4 主要试剂耗材 |
| 1.3 技术路线 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 细胞培养与传代 |
| 1.4.2 实时定量RT-PCR的方法检查骨肉瘤组织、癌旁组织以及骨肉瘤细胞株MG63、Saos-2,U2os和人胚肾细胞HEK293中miRNA-125b的表达 |
| 1.4.3 miR-125b过表达或沉默质粒转染 |
| 1.4.4 CKK增殖实验检测质粒转染后MG-63细胞增殖情况 |
| 1.4.5 Transwell细胞侵袭实验检测各组细胞侵袭能力 |
| 1.4.6 动物试验 |
| 1.4.7 统计学分析 |
| 1.5 实验结果 |
| 1.5.1 miRNA-125b在组织标本及4种不同细胞系中的表达 |
| 1.5.2 miRNA-125b对骨肉瘤细胞增殖和迁移能力的影响 |
| 1.5.3 动物实验 |
| 1.6 讨论 |
| 1.7 结论 |
| 第二章 miR-125b靶向调控MAPK信号通路MKK7的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 细胞 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.2.3 主要试剂耗材 |
| 2.2.4 质粒准备 |
| 2.3 技术路线 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 MG-63细胞复苏、培养、传代 |
| 2.4.2 细胞转染 |
| 2.4.3 RNA的提取 |
| 2.4.4 基因组DNA的消化 |
| 2.4.5 cDNA合成 |
| 2.4.6 实时定量PCR |
| 2.4.7 蛋白印记(Western blotting)实验分析 |
| 2.4.8 统计学分析 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 生物信息学预测分析结果 |
| 2.5.2 RNA提取的质量控制 |
| 2.5.3 cDNA合成质量控制 |
| 2.5.4 实时定量结果 |
| 2.5.5 蛋白印迹实验结果 |
| 2.5.6 荧光素酶报告实验结果 |
| 2.6 讨论 |
| 2.7 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
| 致谢 |
（4）五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖及酪氨酸酶活性作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 研究背景 |
| 1. 中医药对恶性黑色素瘤的认识 |
| 2. 酪氨酸酶与黑色素合成 |
| 3. 中药对酪氨酸酶活性的抑制作用 |
| 4. 我们的设想 |
| 5. 本研究技术路线 |
| 参考文献 |
| 第二部分 五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖及酪氨酸酶活性作用的研究 |
| 1. 实验材料与仪器 |
| 1.1 实验细胞株 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 实验耗材和仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 中药单体的制备 |
| 2.2 试剂的配制 |
| 2.3 细胞培养 |
| 2.4 五种中药单体对A375细胞体外增殖的影响 |
| 2.5 五种中药单体对A375细胞酪氨酸酶活性的影响 |
| 3. 结果 |
| 3.1 五种中药单体对A375细胞体外增殖抑制作用 |
| 3.2 五种中药单体对A375细胞酪氨酸酶活性的影响 |
| 4. 讨论 |
| 5. 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 第三部分 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验细胞 |
| 2 主要实验试剂 |
| 3 主要实验仪器 |
| 4 实验方法 |
| 结果 |
| 1 M14黑色素瘤细胞的体外培养及含药血清干预后情况 |
| 2 MTT法比较5组血清成份对M14细胞的增殖情况 |
| 3 各组血清对M14细胞酸费酸杂（TYR)活性的影响 |
| 4 各组血清对M14细胞黑色素合成的影响 |
| 5 半定量PCR检测相关基因TYRP-l和MITF表达的结果 |
| 讨论 |
| 1 黑色素细胞在白癜风发病机制中的作用 |
| 2 黑色素细胞及黑色素瘤细胞体外实验的意义 |
| 3 酷氛酸酶相关蛋白l(TYRPl)和小眼相关转录因子（MITF) |
| 4 白癜风的中医病因病机及导师杨文信教授治疗白癜风的思想 |
| 5 六味地黄通络方的分析 |
| 6 不足和展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
| 黑色素细胞的研究近况 |
| 附件1 |
| 附件2 |
（6）肿瘤始发细胞:抗肿瘤药物研发和评价的挑战与机遇（论文提纲范文）
| 肿瘤干细胞:证据与争议 |
| 用于理解肿瘤特性的系统框架 |
| 肿瘤始发细胞通过提高自我更新能力而有别于其起源细胞 |
| 肿瘤始发细胞在转移和肿瘤-宿主相互作用中的角色 |
| 为什么许多治疗手段不能彻底根除肿瘤? |
| 治疗的机遇 |
| 发育通路在自我更新和分化中的作用 |
| 肿瘤始发细胞的存活机制 |
| 细胞表面标志物和小环境相互作用 |
| 治疗窗和联合治疗策略 |
| 肿瘤始发细胞靶向药物的研发 |
| 肿瘤始发细胞富集和体外培养条件 |
| 体外分析及筛选方法 |
| 体内肿瘤模型 |
| 体内生物标志物及影像研究 |
| 临床对策及展望 |
（7）恶性黑素瘤中SOX4的表达及其对Wnt/β-catenin信号途径作用的研究（论文提纲范文）
| 缩略词中英文对照 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 SOX4在人恶性黑素瘤组织中的表达 |
| 绪言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 采用RNA干扰技术抑制恶性黑素瘤细胞中SOX4的表达并研究其对WNT/B-CATENIN信号途径活性的影响 |
| 绪言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 SOX4SIRNA对恶性黑素瘤细胞中SURVIVIN的表达及细胞增殖的影响 |
| 绪言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 综述一 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 攻读博士学位期间完成的论文 |
（8）c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 原癌基因的研究概况 |
| 1.1.1 原癌基因(proto-onco gene) |
| 1.1.2 即刻早期基因(immediate-early gene,IEG) |
| 1.1.3 编码核内蛋白的原癌基因 |
| 1.1.4 转录因子(transcription factors)与细胞基因调控 |
| 1.1.5 碱性亮氨酸拉链bZIP(basic leucine zipper)家族中的转录因子AP-1(activated protein 1)家族 |
| 1.2 原癌基因c-jun的生物学特性 |
| 1.2.1 原癌基因c-jun的结构与功能 |
| 1.2.2 c-jun表达的活性调控 |
| 1.2.3 c-Jun蛋白的磷酸化 |
| 1.2.4 Jun-Fos异源二聚体的形成 |
| 1.2.5 Jun/Fos与转录因子AP-1 |
| 1.2.6 c-jun家族在细胞致癌中的作用 |
| 1.3 原癌基因c-jun与细胞之间的关系 |
| 1.3.1 原癌基因c-jun与细胞增殖和转化 |
| 1.3.2 原癌基因c-jun与细胞分化 |
| 1.3.3 原癌基因c-jun与细胞凋亡 |
| 1.4 原癌基因c-jun在不同组织器官中的表达及与疾病的关系 |
| 1.4.1 原癌基因c-jun与中枢神经系统 |
| 1.4.2 原癌基因c-jun与心血管系统 |
| 1.4.3 原癌基因c-jun与炎症性疾病 |
| 1.4.4 原癌基因c-jun与肿瘤和癌症 |
| 1.5 原癌基因c-jun与生殖的关系 |
| 1.5.1 c-jun对雄性生殖的影响 |
| 1.5.2 c-jun对雌性生殖的影响 |
| 1.6 一些外部因素影响后的原癌基因c-jun变化 |
| 第二章 引言 |
| 2.1 研究的背景和意义 |
| 2.2 主要研究内容 |
| 2.2.1 c-jun在荣昌仔猪睾丸组织中的表达及与睾酮分泌的关系 |
| 2.2.2 c-jun对离体培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 2.2.3 c-jun调节hCG诱导荣昌仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制 |
| 2.3 研究的技术路线 |
| 第三章 c-jun在仔猪睾丸组织中的表达及与睾酮分泌的关系 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 数据处理及统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同日龄荣昌仔猪睾丸组织结构的变化 |
| 3.2.2 总RNA的纯度和完整性鉴定 |
| 3.2.3 扩增曲线与溶解曲线 |
| 3.2.4 比较目的基因和参照基因的扩增效率 |
| 3.2.5 仔猪睾丸组织中c-jun mRNA的表达分析 |
| 3.2.6 不同时期荣昌仔猪血浆睾酮水平 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 c-jun对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 主要试剂 |
| 4.1.2 试验动物 |
| 4.1.3 仪器设备 |
| 4.1.4 试验方法 |
| 4.1.5 检测方法 |
| 4.1.6 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 体外培养仔猪睾丸间质细胞的功能 |
| 4.2.2 不同浓度c-jun ASODNs对仔猪间质细胞增殖的影响 |
| 4.2.3 不同浓度c-jun ASODNs对仔猪间质细胞凋亡的影响 |
| 4.2.4 不同浓度c-jun ASODNs对基础状态下仔猪间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 体外培养的间质细胞的反应性 |
| 4.3.2 鉴定间质细胞的标志—3β-HSD |
| 4.3.3 c-jun对仔猪睾丸间质细胞增殖的影响 |
| 4.3.4 c-jun对仔猪睾丸问质细胞凋亡的影响 |
| 4.3.5 c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响 |
| 第五章 c-jun调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 主要试剂 |
| 5.1.2 主要仪器 |
| 5.1.3 试验动物 |
| 5.1.4 试验方法 |
| 5.1.5 统计学分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 不同浓度c-jun ASODNs对hCG诱导仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌的影响 |
| 5.2.2 cAMP对c-jun调节睾丸间质细胞分泌睾酮的影响 |
| 5.2.3 维拉帕米对c-jun调节hCG诱导睾丸间质细胞分泌睾酮的影响 |
| 5.3 讨论与结论 |
| 第六章 综合与小结 |
| 论文的创新点 |
| 主要参考文献 |
| 缩略词表 |
| 博士在校期间发表的论文及参加的课题情况 |
| 致谢 |
（9）黑芝麻水提液对鼠黑素瘤细胞黑色素生成及相关基因表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 绪论 |
| 1.1 白发与脱发研究 |
| 1.2 黑芝麻与白发治疗 |
| 1.3 黑素细胞及黑素的生成与调节 |
| 1.4 黑色素结构分布及生成过程 |
| 1.5 酪氨酸酶基因家族 |
| 1.6 酪氨酸酶基因家族的调控 |
| 1.7 本课题主要研究内容及目标 |
| 2 黑芝麻水提液对B16F1 黑素瘤细胞增殖，酪氨酸酶活性以及黑色素合成的影响 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 方法与步骤 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 3 黑芝麻水提液对B16F1 黑素瘤细胞黑色素合成相关基因转录和翻译的影响 |
| 3.1 材料与试剂 |
| 3.2 方法与步骤 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 4 全文总结 |
| 4.1 主要成果及创新 |
| 4.2 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（10）转铁蛋白受体介导Tf-PEI-shRNA complex内吞靶向沉默缺氧诱导因子-1α抑制恶性黑素瘤生长的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 实验流程图 |
| 第一部分 HIF-1Α及其下游靶基因VEGF 和GLUT-1 在黑素瘤的表达 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 HIF-1Α-SHRNAS 表达载体的构建及鉴定 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 靶向分子TFR 在恶性黒素瘤组织及细胞系的表达 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 TF-PEI-HIF-1Α-SHRNA 复合物对黑素瘤靶向性实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 TF-PEI-HIF-1Α-SHRNA COMPLEX 对恶性黑素瘤荷瘤鼠生物学行为影响的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 综述 肿瘤基因治疗的理想靶点－缺氧诱导因子-1Α |
| 参考文献 |
| 附录 攻读博士学位期间发表的SCI 收录论文 |
| 致谢 |
四、TRP-1反义核酸抑制恶性黑素瘤细胞增殖的体外及体内研究（论文参考文献）
- [1]RNA干扰hTERT基因对人恶性黑素瘤A375细胞增殖的影响[D]. 祖丽胡玛尔·莫沙. 新疆医科大学, 2018(01)
- [2]基质金属蛋白酶-12在黑素瘤中的作用研究[D]. 张子茜. 第四军医大学, 2015(03)
- [3]miR-125b抑制骨肉瘤增殖及转移的作用及其可能的信号机制研究[D]. 刘立宏. 中南大学, 2014(02)
- [4]五种中药单体对人恶性黑色素瘤细胞A375的体外增殖及酪氨酸酶活性作用的研究[D]. 张石琳. 南京中医药大学, 2014(03)
- [5]六味地黄通络方对人M14黑色素瘤细胞的增殖、酪氨酸酶活性及黑色素合成的影响[D]. 赵光. 泸州医学院, 2013(09)
- [6]肿瘤始发细胞:抗肿瘤药物研发和评价的挑战与机遇[J]. 周斌兵,Haiying Zhang,Marc Damelin,Kenneth G.Geles,Justin C.Grindley,Peter B.Dirks. 药品评价, 2012(33)
- [7]恶性黑素瘤中SOX4的表达及其对Wnt/β-catenin信号途径作用的研究[D]. 蔡华华. 华中科技大学, 2011(10)
- [8]c-jun对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌影响的机理研究[D]. 郑小波. 西南大学, 2010(05)
- [9]黑芝麻水提液对鼠黑素瘤细胞黑色素生成及相关基因表达的影响[D]. 徐继敏. 华中科技大学, 2009(03)
- [10]转铁蛋白受体介导Tf-PEI-shRNA complex内吞靶向沉默缺氧诱导因子-1α抑制恶性黑素瘤生长的实验研究[D]. 刘业强. 华中科技大学, 2008(12)