问：基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些
- 答：的操作过程的主要步骤：
切、接、转、增、筛（检）
切：获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择制备。
方法：从生物中分离得到——基因组DNA——>酶切产物
从总RNA重分离得到mRNA,再得到cDNA
人工合成——化学合成；PCR（）
接：DNA片段和载体DNA在体外链接，形成重组子。
转：将重组的DNA进派码入宿主细胞。
方尘腔哪法：转化——某一基因型细胞从周围介入中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的形象；转染——出去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或的过程；转导——用做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。
增：培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制，扩增，并将其整合到手提细胞的基因组中。
筛、检：重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得外援基因高效表达的基因工程菌或细胞。
问：简述基因工程操作的几个步骤
- 答：步骤一：基因文库内寻找目的基因;步骤二：进行PCR基因扩增;步骤三：选取合适的质粒作为目的基因载体;步骤四：利用切位点相同的分别对利用PCR扩增技术搜燃扩增过的DNA和质粒进行酶切;步骤吵模五：利用与限制性内切酶切点相对应的进行目的基因与质粒的组装;步骤六：重复以上步骤，在质粒中导入抗性基因以及、终止子;步骤七：利用显微注射技术导入目的基因;步骤八：利用抗性基因所抗抗生素，选出目的基因成功导入的细胞;步骤九：单另培养细胞，检查是否可以产生目的基因对应蛋白，如果可以产生升漏缓，即为目的基因表达成功，在检测其安全性後，可以批量培养
- 答：1、获取目的基因（从侍州基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因肆谈谈）、
2、基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）
3、将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）
4、目的基因的检测与鉴定 （DNA分子杂交技术,分子杂交技术、抗原抗体杂交）1、获取目的基因（从基因组文库中获取或、利用PCR技术扩增目的基因）、
2、基因表达载体的构建（这也是基因工程的核心）
3、将目的基因导入受体细胞（植物、动物、微生物）
4、目的基因的检测与鉴定 （DNA分子杂交技术,分子杂交技术、抗原裂碰抗体杂交）
问：获取目的基因的方法有哪些
- 答：获取目的基因的方法主要有基因组文库法、cDNA的克隆、反转录法、人工合成法等。
从基因文库中获取这个没什么就是现成的基因储存在受体菌上你用的时候提取出来就好了基因组文库法就是原教材中的用限制性内切酶直接获取。
cDNA文库法（即原教材中提到的逆转录法）。cDNA文库，是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”，又叫“散弹射击法”。
人工合成主要是通过DNA自动合成仪，通过固相亚磷酸酰胺法合成，具体过程可以网上查询，反正是可以按照已知序列将核苷酸一个一个连接上去成为核苷酸序列，一般适于分子行棚较小而不易获得的基因。对于大的基因一般是先用化学合成法合成引物，再利用引物获得目的基因。
目的基因简介：
目的基因(geneofinterest)，也称靶标基因，是指在实验中研究或操纵的特定基因。比如，转基因研究中转入到生物体内的外源的抗虫基因Bt或抗除草剂基因CP4-EPSPS等。
目的基因可以是生物体本身的，也可以是来自不同生物缓答体的。比如Bt基因来自苏云金芽孢杆菌。
目的基因相关的操作包括目的基因鉴定、分离、克隆、转化及转化后鉴定和测试等。
当产生许多拷贝的目的基因后，可以通过酶切反应(或gataway系统)，扰带慧将目的基因酶促连接到构建载体中，然后将整个构建在细菌中表达，从报告基因选取阳性转化体，通常涉及含有插入DNA的菌落中的一些颜色变化。挑取阳性菌落，做液体培养，提取质粒DNA，进行酶切，切胶纯合。获得的DNA可用于后续的转化。
