阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响

一、阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响（论文文献综述）

史翔宇^[1]（2017）在《葡萄膜黑色素瘤血清差异表达蛋白质组学的研究》文中研究说明目的:使用蛋白质组学技术分析葡萄膜黑色素瘤（Uveal Melanoma,UM）患者和健康人血清提取液蛋白质表达谱的改变情况,以及蛋白质表达谱在术前、术后1个月至术后6个月时的变化趋势,建立UM诊断模型,并验证模型的灵敏度、特异度和分组正确率。方法:1.收集在北京同仁医院同仁眼科中心临床诊断为原发葡萄膜黑色素瘤患者8例,年龄2155岁,平均35.7岁。健康对照组（Controls,C）10例,分别标记为C1C10,年龄2454岁,平均34.2岁。清晨采集静脉血,随机选取1例患者的术前（Pre-surgery,PS）和术后1个月（1 month Post-operation,PO1）血清标本,分别选择MB-HIC C8（疏水磁珠）、MB-IMAC-Cu（金属亲和Cu磁珠）和MB-WCX（弱阳离子交换磁珠）三种磁珠进行分选。采用基质辅助激光解析/离子化飞行时间（Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization,Time-of-Flight,MALDI/TOF）质谱测定,使用Clin Pro Tools软件分析质谱图数据。2.收集原发葡萄膜黑色素瘤患者18例,年龄2168岁,平均39.6岁。术前采集静脉血,术后1个月和6月时分别采集静脉血。全部血清标本采用MB-IMAC-Cu（金属亲和Cu磁珠）进行蛋白质分离和提取以及质谱测定。3.随机选择C 3和PO6-4（6 month Post-operation,PO6）的,进行磁珠分离和质谱测定,评价同批次质谱测定的可重复性。4.每隔1天,随机选择PO1-9血清标本1管,进行磁珠分离和质谱测定,评价不同批次间质谱测定的可重复性。5.比较UM患者和健康对照组的血清提取液蛋白质表达谱的改变情况,筛选组间的差异表达。6.比较手术治疗前后不同时间点血清蛋白质表达谱的变化情况,筛选组间的差异表达。7.采用多肽波峰组合建立诊断模型,并用多种算法评价其分组能力,进行质谱鉴定。结果:1.质谱图中大部分多肽峰对应的质荷比不超过10000 Da。MB-IMAC-Cu捕获的多肽出峰数目多于另外两种磁珠,平均峰面积等指标优另外两种磁珠,表现了良好的分离蛋白质/多肽的能力和质谱质量。2.PO 6-4血清标本的变异系数在8.7%30.9%,平均为15.2%;C3血清标本的变异系数在4.5%28.2%,平均值为18.1%。说明同一批次实验结果的可重复性良好。3.PO1-9的血清蛋白标本,多肽峰峰值强度的变异系数为10.9%31.8%,平均值为19.1%。表明不同批次间质谱分析实验结果的可重复性良好。4.UM患者的术前血清标本和健康对照组的血清多肽谱检测结果,两组血清多肽谱的差异表达多肽为47种,UM潜在标志物13种,采用多肽对方法,联合应用可以提供区分两组样本的效力,灵敏度和特异度均有提高。5.UM患者术前和术后血清蛋白质分析,平均多肽峰强度的差异,在PS组和PO 1组之间的差异无统计学意义,在PS组和PO 6组以及PO 1组和PO 6组之间的差异均有显着性意义。6.提供对葡萄膜黑色素瘤患者潜在标志物及另外三个多肽质谱鉴定,鉴定出潜在标志物序列分别为G.EGDFLAEGGGVR.G,A.DSGEGDFLAEGGGVR.G。结论:MB-IMAC-Cu有良好的蛋白质/多肽分离能力,选择MB-IMAC-Cu用于后续大规模实验血清标本的处理。结论:利用蛋白质组学技术鉴定的葡萄膜黑色素瘤差异表达蛋白,进而得出诊断模型能够提供一定的分组诊断效力,但仍需进一步深入研究以阐释其具体作用机制和意义。磁珠蛋白分离和MALDI-TOF MS结合的蛋白质组学技术平台显示出广阔的应用前景。

龚潇^[2]（2010）在《超声爆破微泡联合Avastin治疗兔眼脉络膜新生血管的实验研究》文中提出脉络膜新生血管（CNV）与许多眼底疾病有关,是致盲的常见原因[1]。而目前的治疗方法存在许多缺点,如:方法复杂、昂贵、疗效欠稳定等。由于在CNV形成和发展过程中血管内皮生长因子（VEGF）发挥着中心调控作用,阻断VEGF的作用已成为目前国内外CNV治疗方案中研究的热点和重点。因此近年有学者将被美国FDA批准的通过抑制血管生成发挥抗癌作用的新药Avastin（即bevacizumab,血管内皮生长因子单克隆抗体）用于眼部新生血管性疾病,特别是年龄相关性黄斑变性的治疗,并取得了较好的治疗效果。而超声微泡造影剂作为一种新型声学造影剂,爆破过程中可有效增加局部组织通透性,提高局部药物浓度,以达到靶向治疗作用。本研究首先利用氩绿激光构建了兔眼脉络膜新生血管模型,其次将超声爆破微泡与抗血管内皮生长因子单克隆抗体Avastin （bevacizumab）联合,用于兔CNV的治疗,观察VEGF蛋白的表达和对CNV的抑制情况,为临床治疗CNV提供了一种新的思路。方法:动物模型的建造:用氩绿激光（波长514.5nm）距视乳头23个视盘直径的颞侧髓线上下视盘网膜密集处照射20个点,激光光斑间隔300μm,激光光斑直径50μm,激光功率0.7 W,曝光时间0.1 s,建造实验性色素兔脉络膜新生血管模型。在造模后第21d进行组织病理学和FFA观察,确定CNV的形成。造模成功后再进行以下研究:将CNV兔分为对照组:不做任何处理; Avastin组（A）:玻璃体内注射Avastin;超声微泡+Avastin组（U+MB+A）:玻璃体腔内注射Avastin及超声微泡,再用频率1MHZ,声强分别为0.5W/cm2超声辐照眼球60s,工作时间20%超,每周两次,处理后7d、14d、28d用免疫荧光及Western-blot检测VEGF蛋白表达,FFA观察CNV的抑制情况。结果:在分组处理后7d、14d、28d超声微泡+Avastin组免疫荧光及Western-blot检测VEGF蛋白表达均明显低于Avastin组（p<0.05）,FFA结果显示超声微泡+Avastin组荧光渗漏吸光度（A值）明显低于Avastin组（p<0.05）,且与对照组差异均有统计学意义（p<0.05）。以28天作为疗效判定时间点,FFA检查结果显示Avastin组荧光渗漏平均强度为66.96±4.41 ,与对照组（119.60±6.57 ）相比,差异有统计学意义（t=16.2952;p=0.0000）;超声微泡+Avastin组为54.75±4.41,与Avastin组相比,差异有统计学意义（t=4.7955;p=0.0000）。且各组荧光渗漏强度随时间变化均呈下降趋势。分组处理后28d,组织免疫荧光及Western-blot检测VEGF蛋白表达结果显示,Avastin组为23.9825±3.3180与0.5666±0.0179,与对照组相比,差异有统计学意义（t=7.0327,p=0.0000;t=9.2596,P=0.0000）;超声微泡+Avastin组为19.5636±1.5006与0.3214±0.030 ,与Avastin组相比,差异有统计学意义（t=2.9724,p=0.0140;t=17.1 937,p=0.0000）,且各组VEGF蛋白表达随时间变化呈下降趋势。结论:1、采用一定波长、功率的氩绿激光进行视网膜光凝方法,可较好复制实验性色素兔脉络膜新生血管模型。2、玻璃体腔注射Avastin,对脉络膜新生血管有一定疗效3、超声微泡与Avastin联合使用时,可有效增加Avastin对脉络膜新生血管的治疗效果。

应希^[3]（2009）在《α晶状体蛋白对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究》文中指出视神经损伤后如何修复,提高其临床治疗效果,一直是神经科学研究的热点。近年来,外源性α晶状体蛋白在视神经损伤后修复中发挥的作用日益受到人们关注。已有的研究表明,α晶状体蛋白对RGCs的存活和突起生长有显着促进作用,是重要的晶状体源性“神经保护物质”。同时,α晶状体蛋白还可以通过抑制视网膜小胶质细胞的增殖、迁移及活化,降低细胞中TNF-α、iNOS蛋白的浓度及mRNA的表达,减轻其对RGCs的损害。既往文献证实,当细胞受到应激剌激和其它损伤因素作用时,可启动胞内HSPs基因,促使HSPs合成,从而对细胞有一定的保护作用。因此,α晶状体蛋白作为热休克蛋白家族成员,是否参与了视神经损伤后的内源性保护?视网膜神经节细胞是否能表达内源性α晶状体蛋白?倘若视神经损伤后,能使视网膜神经节细胞高表达α晶状体蛋白,是否具有更为理想的神经保护作用?上述问题均未见文献报道。由此,进一步探讨内源性α晶状体蛋白在视网膜神经节细胞中的变化和作用,可能为临床治疗视神经损伤提供新的途径。【目的】通过建立大鼠视神经钳夹伤模型,进一步明确外源性α晶状体蛋白对神经损伤后轴突生长的定量变化;通过离体和在体研究,探讨视网膜神经节细胞中内源性α晶状体蛋白的表达;在此基础上,采用腺病毒介导的基因转染技术,分析α晶状体蛋白高表达对视网膜神经节细胞凋亡的影响。从而阐明α晶状体蛋白在视神经损伤所诱导的神经节细胞凋亡中的作用,并为基因治疗或合成新型的短肽药物治疗视网膜视神经损伤奠定实验基础。【方法】1、以成年Long Evans大鼠为研究对象,建立视神经钳夹损伤模型,玻璃体腔单次注射10-4g/L外源性α晶状体蛋白。通过视神经冠状切片和神经轴突镀银染色方法,利用计算机图象分析系统,分别于损伤后1、2、4周,定量分析和比较视神经损伤远端0.5mm、2mm、5mm处的视神经轴突数量。2、原代培养新生大鼠视网膜神经节细胞,通过免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜,观察培养的细胞中内源性α晶状体蛋白的表达,并采用RT-PCR方法检测细胞中内源性α晶状体蛋白mRNA的表达规律。同时,利用成年大鼠视神经钳夹损伤模型和全视网膜铺片的免疫组化方法,观察视神经损伤对视网膜神经节细胞中内源性α晶状体蛋白表达的影响。3、利用同源重组原理,将α晶状体蛋白cDNA克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,构建携带α晶状体蛋白编码基因的重组腺病毒表达载体。脂质体法转染293细胞,获得重组腺病毒质粒Ad-Crystallinα。4、将重组腺病毒Ad-crystallinα感染培养的大鼠视网膜神经节细胞,并给予缺氧刺激,通过RT-PCR和werstern blot检测细胞中α晶状体蛋白、caspase-3、bcl-2的表达水平,探讨α晶状体蛋白高表达对缺氧后视网膜神经节细胞凋亡的影响。【结果】1、视神经损伤后,神经轴突数量的改变主要发生在损伤后2周内,并且离损伤点越近,其神经轴突数量减少越明显。通过单次玻璃体腔给药途径,外源性α晶状体蛋白可以显着减少大鼠视神经损伤后神经轴突数量的丢失。但在损伤后4周,α晶状体蛋白的神经保护作用明显减弱。2、用新生大鼠进行视网膜神经节细胞原代培养,培养的RGCs可表达内源性α晶状体蛋白,阳性染色位于RGCs胞膜和轴突。在原代培养第3～5d的RGCs中,内源性α晶状体蛋白mRNA的表达显着增强（P<0.05）。3、正常成年大鼠视网膜神经节细胞内源性α晶状体蛋白表达为阴性。而视神经钳夹伤后的成年大鼠视网膜中可见内源性α晶状体蛋白阳性表达。4、采用RT-PCR方法成功扩增crystallinα目的片段,KpnⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒pAdTrack-CMV-crystallinα,蛋白电泳及测序结果显示质粒构建成功,可观察到载体片段和目的基因片段。质粒与腺病毒骨架质粒pAdeasy–1同源重组成功后转染293细胞,进行5次传代纯化后获得重组腺病毒Ad-crystallinα。所获得的腺病毒滴度为1. 143×109 ifu / mL。5、Ad-crystallinα可在培养的大鼠视网膜神经节细胞中高表达。与单纯缺氧组相比,缺氧刺激后Ad-crystallinα转染组细胞中α晶状体蛋白表达量约为单纯缺氧组细胞的1.8倍,统计学差异显着（P<0.05）。6、给予细胞缺氧刺激后,与单纯缺氧组相比,Ad-crystallinα转染组RGCs中caspase-3的蛋白表达水平下降59%,统计学差异非常显着（P<0.01）。【结论】1、α晶状体蛋白在视神经损伤后修复中发挥重要作用。通过玻璃体腔注射途径单次给药,可明显减少受损视神经轴突数量的丢失。2、在离体条件下,原代培养的新生大鼠视网膜神经节细胞有内源性α晶状体蛋白表达。在动物实验中,视神经损伤可以诱发成年大鼠视网膜表达内源性α晶状体蛋白,提示α晶状体蛋白可能参与了视网膜内源性神经保护作用。3、成功构建了高表达α晶状体蛋白的重组腺病毒质粒。4、腺病毒载体介导的α晶状体蛋白可成功转染培养的大鼠视网膜神经节细胞,并高表达α晶状体蛋白。高表达的α晶状体蛋白可显着降低由缺氧诱导的视网膜神经节细胞中caspase-3表达水平,从而减缓RGCs凋亡。

杜乐辉^[4]（2009）在《Fe3O4纳米磁流体介导的50℃局部热疗对兔VX2肝癌作用的实验研究》文中研究指明第一部分兔VX2肝癌模型的建立及超声影像评价目的:建立兔VX2肝癌模型,探讨该模型的超声影像学表现并进行比较评价,为该模型的应用提供实验依据。方法:开腹直视下穿刺法将VX2瘤组织块种植于20只日本大耳白兔肝左叶,建立兔肝癌模型。分别于接种后2周、4周行彩色多普勒、能量多普勒及超声造影检查,半定量分级法分别比较三种超声对肿瘤血流检测率的敏感性,每次超声检查后随机处死10只荷瘤兔,测量肿瘤的实际大小取标本进行病理学鉴定,并与超声结果进行对照。结果:兔肝癌种植成功率为100%,且该法建立的兔VX2肿瘤大小较一致,同期间比较无显着性差异（P＞0.05）。超声与实际测得肿瘤的最大径比较差异无显着性（P＞0.05）,两者具有很好的一致性。彩色多普勒、能量多普勒及超声造影均能敏感的检出肿瘤内血流信号,种植2周的小肿瘤以瘤周供血为主,能量多普勒对血流的检出率明显高于彩色多普勒,而种植4周的较大肿瘤血管丰富,表现为瘤周粗大的供瘤血管或散在弥漫分布的点、条状血流,以高速低阻血流为主,彩色多普勒和能量多普勒均显示以三级病灶为主,无显着性差异,种植2周和4周的肿瘤超声造影显示“快进快出”的增强模式,可见完整、细致的肿瘤血管分支及其微小血管。VX2瘤细胞呈团片状或巢状浸润性分布,可见多个核分裂相,与肝实质无明显边界。结论:瘤组织块穿刺种植法建立的兔VX2肝癌模型复制成功率高且稳定,实验可比性好。超声能有效的监测肿瘤大小及其变化。彩色多普勒和能量多普勒能敏感的检测出肿瘤血流,但能量多普勒对低速血流敏感,尤其是对小肝癌,而超声造影可更有效的反映大小肝癌瘤内微血管分布及血流灌注情况。第二部分磁流体介导的50℃局部热疗兔VX2肝癌的可行性研究和对肿瘤生长的影响目的:评估Fe3O4纳米磁流体的体内外升温性能,初步评价磁流体局部热疗兔VX2肝癌模型的可行性及其对肿瘤生长的影响。方法:将纳米磁流体进行透射电镜检测和体外不同电流强度下的升温实验。将接种14天的荷瘤兔随机分为5组:即假治疗对照组（PT组）、生理盐水对照组（NS组）、磁流体对照组（MF组）、磁流体热疗Ⅰ组（MFH1组）、磁流体热疗Ⅱ组（MFH2组）。MFH1组在直接瘤内注射磁流体后立即暴露于交变磁场,50℃加热30min,MFH2组在5天后再重复加热一次。注射磁流体后第1天和第14天进行CT扫描。所有荷瘤兔分别于第一次热疗前和第一次热疗后5天、14天取血检查血常规及肝肾功能。种植后3周热疗组各处死2只实验兔病理学检查,4周后处死所有实验兔,测量肿瘤大小,计算肿瘤的体积抑制率,大体观察标本并进行病理学检查。结果:磁流体粒径分布尚均匀,10nm左右,有部分聚集。体外磁流体升温速率随电流增大而增大,在电流为100A即磁场强度为47.95Gs时,磁流体先快速上升至70℃后变缓慢最后维持在80℃不上升。磁流体体内可在5～10min内升至50℃,通过手动调节磁场强度可将肿瘤温度控制在相对稳定的范围内50℃±2℃,而正常肝组织和直肠几乎不升温。CT可清晰地显示体内磁流体局限性的高密度影。热疗前后各组间同时间点及同组间不同时间点的血常规、肝肾功能比较均无明显差异（P＞0.05）。种植后4周各组肿瘤最大径分别（4.25±0.68）cm、（4.70±1.12）cm、（4.16±0.88）cm、（2.83±0.51）cm、（2.03±0.34）cm,肿瘤体积分别为（25.82±11.92）cm3、（32.01±13.14）cm3、（23.35±12.17）cm3、（7.43±1.86）cm3、（2.62±1.35）cm3。MFH1组和MFH2组的肿瘤体积抑制率分别为68.19%～76.79%和88.8%～91.87%,肿瘤生长受到明显抑制,与各对照组间比较差异均具有显着性（P＜0.05）。大体观察热疗组肿瘤区域可见明显的凝固性坏死,与周围组织分界清楚,磁流体满布于瘤内,MFH1组可见局灶的结节状或环形新鲜肿瘤组织残存,MFH2几乎全部坏死,呈豆腐渣样或液化。显微镜下对照组肿瘤细胞密集,生长活跃,可见散在小坏死灶,MF组瘤内磁流体呈团状分布,热疗组肿瘤大片坏死呈嗜红染的颗粒状或无结构组织,部分肿瘤细胞碎裂、核固缩,磁流体呈放射状弥漫分散于瘤内,可见摄取磁流体的肿瘤细胞及淋巴细胞浸润,坏死组织周围形成厚的纤维组织包裹,MFH1组尚可见局灶性或周围环形的活肿瘤细胞残存,MFH2组肿瘤组织几乎完全坏死,甚少见活肿瘤细胞残存。结论:Fe3O4纳米磁流体在体内外均具有良好的升温性能,在体内可使肿瘤区成功的获得较均匀分布的50℃热消融温度,而正常组织不升温。磁流体对细胞无明显毒性;50℃的MFH可导致肿瘤组织明显坏死,显着抑制肿瘤生长;同时,热疗可促进瘤内磁流体的分散,实现热疗的旁效应;兔VX2瘤细胞可摄取磁性纳米粒子;磁热疗对肿瘤组织的杀伤作用与热疗次数相关;CT可作为敏感地检测体内磁流体分布的手段。一次性注射磁流体后,磁流体介导的50℃热疗兔VX2肝癌安全、可行、有效,靶向性好,且可进行重复热疗,具有潜在的临床应用价值。第三部分磁流体介导的50℃局部热疗兔VX2肝癌的超声造影评价和对血管作用的研究目的:探讨超声造影对磁流体热疗兔VX2肝癌的疗效评估价值,探讨磁流体热疗对兔VX2肝癌营养血管及对血管生成因子VEGF表达的影响。方法:将接种14天的荷瘤兔随机分为5组及PT组、NS组、MF组、MFH1组、MFH2组,分组处理后于种植后4周行超声造影检查,观察肿瘤内血供情况及测量肿瘤坏死率,并与病理学检查相比较,同时进行血管壁弹力纤维染色及VEGF的免疫组化检测。结果:各组超声造影测得的肿瘤坏死了率分别为17.89±7.45%、20.52±6.58%、16.78±8.92%、72.93±10.45%、94.28±3.54%。热疗组的坏死率明显高于各对照组,MFH1组可见局灶的结节状或环形强化,与肉眼及病理观察的肿瘤存活区一致,MFH2组几乎完全坏死,未见残存的活肿瘤组织,超声造影与病理测得的肿瘤坏死率比较无显着性差异,具有很好的一致性。磁热疗可使肿瘤滋养血管的血管壁破坏,弹力纤维断裂、散乱,血管管径越小效果越好,管径小于50μm的效果最好,MFH2组对血管的破坏程度明显大于MFH1组。种瘤后4周各组肿瘤VEGF的表达阳性率分别为63.87±7.24%、59.44±8.89%、65.25±10.04%、28.57±5.66%、5.84±2.97%,热疗组明显低于各对照组,差异具有显着性（P＜0.01）,以MFH2组更低。结论:超声造影可准确的反映磁流体热疗引起兔VX2肝癌凝固性坏死的范围及活肿瘤组织的残存,可作为评价磁流体热疗疗效的有效手段。磁流体介导的50℃热消融可有效的破坏肿瘤滋养血管,抑制VEGF的表达,可能是其治疗肿瘤的重要机制之一。

司艳芳^[5]（2008）在《RNA干扰cx43基因对培养的人RPE细胞的作用及其蛋白质组学分析》文中指出背景和目的:实验证明RPE在多种缝隙连接蛋白中主要表达cx43,cx43能够在细胞间形成缝隙连接,从而促进细胞间的信息交流,这种信息交流和连接蛋白本身对RPE的增殖、分化、移形等细胞行为均有影响,而RPE功能和结构的正常是维持视网膜色素上皮层完整性和生理功能的重要因素,其异常与多种眼病的发生有关,因此,我们希望通过RNA干扰的方法研究cx43对RPE的生物学作用,并且通过蛋白质组学方法分析cx43基因被干扰后的蛋白质表达变化,为治疗相关的眼病提供可能的途径或策略。实验方法:1、培养原代的人RPE细胞,经过细胞角蛋白（ck）、S-100和神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学鉴定后,通过AO/PI染色技术确定培养细胞的存活率,描记其生长曲线,第3-5代用于以下细胞实验2、生物合成针对人cx43基因的三条小干扰RNA和一条阴性RNA通过脂质体转染RPE细胞后,通过RT-PCR的方法确定抑制效率最高的干扰片断3、将该片段以不同浓度通过阳离子脂质体转染培养的人RPE细胞后,采用MTT法观察其对细胞的增殖力的作用;通过流式细胞仪观察其对细胞周期的影响;通过扫描电镜观察其对细胞形态的影响;通过免疫细胞化学和Weston blot观察其对cx43蛋白表达的作用;采用激光共聚焦和荧光淬灭恢复技术观察荧光恢复速率平均百分率,评价其对细胞间通讯功能的影响;通过制作RPE细胞损伤模型,观察其对损伤修复能力的作用4、分离纯化转染siRNA的RPE组和正常对照组RPE细胞的全部蛋白质,应用等电聚焦电泳和SDS-PAGE双向电泳技术,银染显示分离出的蛋白质斑点,经凝胶图像分析软件对两个样本进行胶图分析,寻找差异蛋白点。胶内酶解差异表达的蛋白点,基质辅助电离解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）获得肽质量指纹图谱（PMF）,搜寻蛋白质数据库并鉴定蛋白质,分析其生物学意义。结果:1、原代培养的细胞呈多角形,包含大量色素,容易传代,色素随着传代次数逐渐减少。免疫细胞化学染色:ck和S-100抗体染色阳性,阳性细胞率≥94%,GFAP抗体染色阴性,可以确定是高纯度的上皮来源的色素细胞即视网膜色素上皮细胞。AO/PI染色活细胞比率≥96%,细胞生长状态良好,传代后第3、4天细胞处于对数生长期,平均6天传代一次。2、通过RT-PCR证实三条生物合成的siRNA均能抑制人RPE细胞cx43基因的转录,抑制效率最高的是siRNA1,抑制率达到72%。3、siRNA1转染人RPE细胞后,显着促进细胞的增殖,差异有统计学意义（p＜0.01）,其促增殖作用有浓度依赖性,浓度为1.25ug/ml时达到饱和,促增殖作用最强,增殖率为146%,细胞平均5天传代一次;抑制cx43基因后,S期细胞比率明显增多,差异有显着性（p＜0.05）;细胞的扫描电镜显示转染siRNA后,细胞表型发生变化,细胞体积增大,表面触手增多;免疫细胞化学显示体外培养的人RPE细胞表达cx43,表达部位在细胞膜、细胞质和胞核。转染siRNA24h后,cx43染色变浅,48h后染色明显变。通过计算机图像分析系统显示48h后cx43染色强度降低76%;与Weston blot结果一致,转染24h后,cx43的蛋白表达下降,48h明显抑制cx43的表达,抑制率达到62%;cx43基因被干扰后,细胞荧光恢复速率降低,细胞间通讯功能明显降低;细胞损伤修复能力下降4、通过银染的方法在RPE组三块胶中分离出共有的蛋白质斑点861个,组间匹配率达到92%;转染siRNA组三块胶分离出共有的蛋白质斑点887个,组间匹配率达到93%。经过软件图像分析,发现Volume值改变≥2.0的点共78个。其中上调的16个点,下调的18个点,有19个点在RPE上存在,而转染组不存在,25给在转染组存在而RPE组不存在。随机选取了7个点进行蛋白质谱分析:SP-H抗原、P27BBP、MAPK、IMPDH和HSP70表达上调,β-actin表达下降,VDAC在转染siRNA后出现表达。结论:RNA干扰是一种高效的特异性基因研究工具。Cx43不仅影响细胞间通讯功能,其正常表达对细胞的增殖、生长周期、损伤修复等多种细胞行为也非常重要,通过蛋白质谱发现其表达异常可以引起多种蛋白的失调,可能对许多眼病的发生起着不可忽视的作用。

许燕^[6]（2007）在《超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的实验研究》文中研究指明脉络膜新生血管（CNV）是很多眼底疾病的共同病理过程,大多病例会转化为不可逆的盲,是视力预后极差的象征。虽然对它的治疗手段繁多,但存在复杂、昂贵,疗效欠确切等缺点。因此CNV的防治具有极大的意义。目前基因治疗尚处于研究阶段。微泡造影剂作为一种新型的基因载体,在声像图的监控下进行超声辐照,微泡能够在指定部位“爆破”,释放所携带的基因。本文通过体内实验探讨氩绿激光创建Long-Evans大鼠脉络膜新生血管模型的可行性并研究超声微泡造影剂携带EGFP基因对大鼠视网膜进行转染的效率及寻找有效的注射途径。全文分为三个部分,依次对大鼠脉络膜新生血管的形成,以微泡为基因载体与其他转染方法的转染效率对比,将基因载体以不同途径引入体内的转染效率对比作了研究。第一部分是实验性大鼠CVN模型研究。通过对雌性Long-Evans大鼠30只（60只眼,每只大鼠一眼为实验眼,另眼为对照眼）,以波长514.5 nm的氩绿激光（光斑直径50μm,功率0.8W,时间0.05s）,在距视盘2个视盘直径处围绕视乳头进行光凝,来建立CNV模型。分别于光凝后3,7,14,21,28天进行眼底荧光造影。检查后处死动物（6只/次）,摘除眼球取眼后段组织制作石蜡切片,常规HE染色。结果发现光凝后7天出现CNV,21天CNV大量形成,大鼠CNV发生率高（77.08%）;眼底造影、光镜下均有相应改变,FFA表现为视网膜血管无关的荧光素渗漏,光镜下可见到CNV结构。氩绿激光诱导Long - Evans大鼠CNV具有实验方法简便易行,成模时间短,维持时间长,成模率高,病理结构稳定等特点。第二部分是将微泡携带基因的转染效率与其他的转染方法进行了对比。雌性Long-Evans大鼠30只（60只眼）分为6组,以不同的转染方法进行EGFP基因的转染:①单纯超声照射组;②微泡+超声照射组;③裸质粒组;④质粒+超声照射组;⑤质粒+微泡;⑥质粒+微泡+超声照射组。两周后处死大鼠,做石蜡切片HE染色观察视网膜损伤情况,做冰冻切片在激光共聚焦显微镜下观察蛋白表达情况及分析EGFP质粒在大鼠色素上皮层的表达强度。结果显示:第①、②组大鼠视网膜及脉络膜各层组织结构清晰、完整,与正常大鼠组织结构无明显差异。EGFP在各组大鼠的视网膜包括色素上皮细胞层均有表达,第③、④、⑤组荧光强度较弱,第⑥组大鼠的视网膜荧光强度较强。第三部分是通过不同途径将携带EGFP质粒的超声微泡造影剂引入体内,比较两种注射方式的基因转染效率。雌性Long-Evans大鼠10只（20只眼）分为2组,以不同的注射方式将携带EGFP质粒的超声微泡造影剂引入体内:①尾静脉注射组;②球周注射组。两周后处死大鼠做冰冻切片,在激光共聚焦显微镜下观察蛋白表达情况及分析EGFP质粒在大鼠色素上皮层的表达强度。结果显示:EGFP在两组大鼠的视网膜包括色素上皮细胞层均有表达,且荧光强度均较强。本实验探讨创建Long-Evans大鼠脉络膜新生血管模型的可行性并研究超声微泡造影剂携带EGFP基因对大鼠视网膜进行转染的效率及寻找有效的注射途径。然而CNV的基因治疗尚处于起步阶段,真正应用于临床需更进一步的研究。

李沭岩^[7]（2007）在《重组人血管抑制因子Vasostatin对脉络膜新生血管抑制作用的实验研究》文中研究指明目的:探讨重组人血管抑制因子Vasostatin抑制Nd:YAG激光诱导的小鼠脉络膜新生血管（choroidal noevascularization ,CNV）的作用。方法:取C57BL/6J成年小鼠30只,通过Nd:YAG激光眼底光凝诱导小鼠产生脉络膜新生血管,随机分为对照组、低剂量组和高剂量组,每组各10只小鼠。在眼底Nd:YAG激光光凝后立即分别给予A组（对照组）每只小鼠球后注射10ul生理盐水;治疗组各组每只小鼠球后注射重组人血管抑制因子Vasostatin,B组（低剂量组）10ul（2ug/ul）、C组（高剂量组）10ul（4ug/ul）。在光凝后7d、14d通过荧光素眼底血管造影（fundus fluorescence angiography, FFA）评价脉络膜新生血管的发生率。光凝后14d将动物处死,行组织学检查及观察CD105的表达情况。结果:治疗组在光凝后7d、14dCNV发生率及各光凝斑荧光素渗漏程度均比对照组轻。光凝后7d,A组脉络膜新生血管的发生率为68%,B组和C组脉络膜新生血管的发生率分别为56%、48%,经统计学处理,差异有显着性的意义（P=0.021,P<0.05）。光凝后14d,A组脉络膜新生血管的发生率为72%,B组和C组脉络膜新生血管的发生率分别为50%、38%,经统计学处理,差异有显着性的意义（P=0.007,P<0.01）。组织学检查显示治疗组脉络膜新生血管（CNV）范围小于对照组,与剂量和浓度呈正相关,经统计学处理,差异有显着性的意义（P<0.01）。而且治疗组CD105的表达少于对照组。结论:重组人血管抑制因子Vasostatin可以有效抑制激光诱导的小鼠实验性CNV。组织学检查显示治疗组脉络膜新生血管（CNV）范围减小,与Vasostatin剂量与浓度呈正相关,CD105的表达少于对照组。通过Nd:YAG激光照射脉络膜损伤来成功诱导了小鼠脉络膜新生血管模型,这种CNV模型制作方法可以为研究CNV的发病机制及治疗方法提供实验参考。

佘海澄,黎晓新,于文贞,刘国栋,李春安,齐慧君^[8]（2004）在《阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响》文中研究表明目的 研究正常棕色挪威大鼠（BN大鼠）视网膜在810 nm激光阈下能量经瞳孔热疗（TTT）后的改变。方法 雄性BN大鼠36只,使用810 nm激光,采用不同阈下能量对BN大鼠进行TTT。分别于TTT后第1、3、7、14 d进行彩色眼底照相和眼底荧光造影（FFA）。TTT后6、12 h,1、3、7、14 d各处死6只大鼠,进行组织病理学观察。6、12 h和1 d的组织用TdT介导duTP缺口末端标记法（TUNEL）检查细胞凋亡。结果 TTT后第1 d可见大部分光斑处视网膜灰白色水肿。第3 d视网膜水肿减轻,RPE脱色素。其后视网膜逐渐出现色素沉着。FFA中可见到不同程度的高荧光。组织病理学切片上可见所有在眼底照相上曾出现灰白水肿的病灶,视网膜结构均有显着破坏。TUNEL染色可见视网膜全层均有细胞凋亡。TTT能量最低组6 h时凋亡细胞最多;激光斑旁视网膜较激光斑中央视网膜凋亡细胞多。 结论TTT阈下能量可引起不可逆的视网膜损伤,即使无病理改变也能引起视网膜细胞的凋亡。

二、阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响（论文提纲范文）

（1）葡萄膜黑色素瘤血清差异表达蛋白质组学的研究（论文提纲范文）

（2）超声爆破微泡联合Avastin治疗兔眼脉络膜新生血管的实验研究（论文提纲范文）

（3）α晶状体蛋白对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究（论文提纲范文）

（4）Fe3O4纳米磁流体介导的50℃局部热疗对兔VX2肝癌作用的实验研究（论文提纲范文）

（5）RNA干扰cx43基因对培养的人RPE细胞的作用及其蛋白质组学分析（论文提纲范文）

（6）超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的实验研究（论文提纲范文）

（7）重组人血管抑制因子Vasostatin对脉络膜新生血管抑制作用的实验研究（论文提纲范文）

四、阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响（论文参考文献）

• [1]葡萄膜黑色素瘤血清差异表达蛋白质组学的研究[D]. 史翔宇. 安徽医科大学, 2017(07)
• [2]超声爆破微泡联合Avastin治疗兔眼脉络膜新生血管的实验研究[D]. 龚潇. 重庆医科大学, 2010(05)
• [3]α晶状体蛋白对大鼠视网膜神经节细胞的保护作用研究[D]. 应希. 第三军医大学, 2009(05)
• [4]Fe3O4纳米磁流体介导的50℃局部热疗对兔VX2肝癌作用的实验研究[D]. 杜乐辉. 中南大学, 2009(02)
• [5]RNA干扰cx43基因对培养的人RPE细胞的作用及其蛋白质组学分析[D]. 司艳芳. 中国人民解放军军医进修学院, 2008(08)
• [6]超声微泡造影剂介导EGFP质粒转染大鼠视网膜的实验研究[D]. 许燕. 重庆医科大学, 2007(02)
• [7]重组人血管抑制因子Vasostatin对脉络膜新生血管抑制作用的实验研究[D]. 李沭岩. 吉林大学, 2007(03)
• [8]阈下能量经瞳孔热疗对正常大鼠视网膜的影响[J]. 佘海澄,黎晓新,于文贞,刘国栋,李春安,齐慧君. 眼科研究, 2004(06)

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