一、大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除（论文文献综述）
张伊[1]（2021）在《孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究》文中指出目的:随着手术技术的不断提高和麻醉学科的不断发展,孕期手术的开展日益增多,妊娠期麻醉的需求也不断增长。吸入性麻醉药作为宫内手术的首选麻醉方法,其神经毒性这一话题成为麻醉学科和社会关注的焦点。孕中期一直被临床上视为孕期手术的相对安全时期,绝大部分孕妇非产科手术均在孕中期进行,以保证部分胎儿疾病可以得到早期干预和治疗。但随着大量的动物实验表明常用的吸入性麻醉药物会影响未成熟大脑的发育,造成认知功能的损害,人们逐渐意识到,相对安全的手术期并不意味着是相对安全的麻醉期。孕中期作为神经系统发育的关键时期,神经系统正处于大量增殖、分化及迁移的神经发生过程中,此时外界的细微影响（如药物或环境）均可能会导致远期神经系统发育的异常。近年来已有多篇关于孕中期母体麻醉药暴露对子代神经干细胞产生影响的研究报道,但其机制尚未明确。课题组的前期研究中已表明,孕中期大鼠连续三日暴露于3%浓度的吸入性麻醉药七氟醚2小时（h）后,影响了子代的神经系统发育及远期学习记忆能力,但单次3%浓度七氟醚暴露对子代大脑发育影响甚微。孕中期大鼠暴露于3.5%七氟醚2h后,可引起子代大脑中神经干细胞的过度自噬,从而导致其过度凋亡和增殖抑制,而暴露于2%七氟醚2 h的子代大脑并未表现出神经干细胞凋亡与增殖的异常。这表明吸入性麻醉药七氟醚对子代神经系统的影响与吸入的浓度、时间或暴露次数有关。近年来越来越多的研究表明麻醉药物能导致神经干细胞的分化水平异常。细胞周期决定细胞命运,一旦设定的细胞进程被打破,就可能导致严重的后果。神经分化作为神经系统发育中至关重要的过程,过早或抑制神经分化均可导致远期的神经系统发育障碍。在神经系统发育过程中,有多个基因参与维持神经干细胞的干性,使神经干细胞按照设定进行分化。有文献报道ATN1是维持神经干细胞干性的一个关键基因。我们的预实验结果也表明多次七氟醚麻醉后可导致子代大鼠和原代海马神经干细胞内的ATN1表达水平下降。目前尚未有关于不同暴露次数的七氟醚对于神经干细胞分化的影响及其机制的相关研究,因此本研究旨在探究七氟醚是否通过调控ATN1表达水平影响神经干细胞的分化水平。MicroRNAs（miRNAs）是一类由内源基因编码,高度保守的,长度仅约为20-24个核苷酸的单链非编码RNA,在生物体内有着重要的调控作用。已有多篇文献报道miRNAs在神经系统发育过程中有着重要作用。我们通过生物学软件预测mi R-410-3p与ATN1有特异性靶向结合位点并通过实验证明了其靶向结合能力。实验结果表明,多次七氟醚麻醉后,原代海马神经干细胞内的mi R-410-3p的表达水平上升。本研究旨在探究mi R-410-3p在七氟醚导致神经干细胞分化异常过程中的作用。综上所述,本研究旨在明确大鼠在孕中期单次与多次七氟醚暴露后对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响,并拟探究七氟醚通过调控mi R-410-3p和ATN1表达水平影响海马神经干细胞的分化作用。研究方法:1、实验动物选择Sprague Dawley（SD）大鼠,进行合笼后记录孕期时间,孕鼠于孕期（Gestational,G）14日接受3%七氟醚麻醉2 h一次或G13、G14、G15连续三日接受3%七氟醚麻醉2 h,麻醉结束后于24 h,72 h及子代出生后28天（Postnatal,P28）利用Western Blot和免疫荧光实验方法检测神经干细胞标记物Nestin、神经元标记物β-tubulin III及星形胶质细胞标记物GFAP以观察神经干细胞分化情况。2、原代神经干细胞取自G14-16的SD大鼠海马区并通过免疫荧光验证其干性及分化能力,培养并传代至2-4代进行单次4.1%七氟醚麻醉2 h或连续3日4.1%七氟醚麻醉2 h,麻醉结束后于24 h,72 h及28 d通过Western Blot和免疫荧光实验观察七氟醚对神经干细胞分化的影响。3、前期实验发现七氟醚处理后ATN1表达水平降低,导致神经干细胞提前分化。构建ATN1过表达慢病毒载体感染神经干细胞,空载病毒感染的神经干细胞为阴性对照组,进行多次七氟醚麻醉后于上述相同时间点通过RT-q PCR、Western Blot和免疫荧光实验检测ATN1表达水平及神经干细胞的分化情况。4、利用生物学软件对可能调控ATN1表达水平的mi RNA进行分析预测,筛选出ATN1可能为mi R-410-3p的潜在靶基因,并利用双荧光素酶报告确认mi R-410-3p与ATN1靶向结合。5、预实验结果表明七氟醚处理后海马神经干细胞内mi R-410-3p表达水平升高,构建mi R-410-3p敲减慢病毒载体感染神经干细胞,进行多次七氟醚麻醉后,通过RT-q PCR、Western Blot和免疫荧光实验检测mi R-410-3p和ATN1表达水平及神经干细胞的分化情况。结果:1、母体单次七氟醚麻醉后子代大鼠海马神经干细胞的Nestin、β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数与对照组相比无统计学差异。多次七氟醚吸入导致子代大鼠海马神经干细胞在24 h和72 h时Nestin蛋白表达水平下降,β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数增多;在生后28 d时β-tubulin III蛋白表达水平降低,GFAP蛋白表达水平升高,海马CA1区β-tubulin III阳性细胞数减少,GFAP阳性细胞数增多。2、单次七氟醚麻醉后原代海马神经干细胞的Nestin、β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数与对照组相比无统计学差异。多次七氟醚麻醉导致原代海马神经干细胞在24 h和72 h时Nestin蛋白表达水平下降,β-tubulin III和GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数增多;在28 d时β-tubulin III蛋白表达水平降低,GFAP蛋白表达水平升高,β-tubulin III阳性细胞数减少,GFAP阳性细胞数增多。3、多次七氟醚麻醉导致子代大鼠神经干细胞和原代海马神经干细胞的ATN1表达水平下降;ATN1过表达并进行七氟醚麻醉后,在24 h和72h,与多次七氟醚麻醉组相比,ATN1、Nestin表达水平明显升高,β-tubulin III和GFAP表达水平降低,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数明显减少;在28 d,β-tubulin III表达水平升高,GFAP表达水平降低。4、ATN1可与mi R-410-3p靶向结合。5、多次七氟醚麻醉导致神经干细胞内mi R-410-3p表达水平上升;mi R-410-3p沉默并进行七氟醚麻醉后,在24 h和72 h,与多次七氟醚麻醉组相比,mi R-410-3p表达水平明显降低,ATN1、Nestin表达水平升高,β-tubulin III和GFAP表达水平降低,β-tubulin III和GFAP阳性细胞数明显减少;在28 d,β-tubulin III表达水平升高,GFAP表达水平降低。结论:1、多次七氟醚麻醉导致子代大鼠神经干细胞及原代海马神经干细胞过早分化为神经元和星形胶质细胞,并在远期导致神经元减少和星形胶质细胞增加;单次七氟醚麻醉对子代大鼠神经干细胞及原代海马神经干细胞的分化并无影响。2、多次七氟醚麻醉后海马神经干细胞内ATN1表达水平下降,ATN1过表达可减轻七氟醚对原代大鼠海马神经干细胞早期及远期分化水平的影响;单次七氟醚麻醉对神经干细胞内ATN1表达水平无影响。3、ATN1与mi R-410-3p靶向结合;多次七氟醚麻醉后海马神经干细胞内mi R-410-3p表达水平上升,mi R-410-3p沉默可减轻七氟醚对原代大鼠海马神经干细胞早期及远期分化水平的影响;单次七氟醚麻醉对神经干细胞内mi R-410-3p表达水平无影响。
冯金歌[2]（2020）在《中期因子（Midkine）调控神经干细胞增殖对AD模型小鼠神经保护作用的研究》文中指出阿尔茨海默病（AD）是一种慢性神经退行性疾病,主要以老年人发病为主,通常由瞻妄、发呆等轻型症状逐渐发展为认知功能障碍,甚至生活不能自理的重症症状,是痴呆症的主要原因之一。由于该病神经元损伤后无法修复,因此很多研究者致力于寻找一种能够代替受损神经元的方法。神经干细胞（NSCs）是一种具有多向分化能力的潜能细胞,且具有自我更新,增殖和迁移的功能,并能分化发育为成熟的神经元、星形胶质细胞以及少突胶质细胞,虽然NSCs在脑内的数量相对较少,但其分化的神经细胞却能影响大脑的整体生理机能,产生的神经元可形成新的神经网络并可调节现有神经网络的活性,这为AD治疗提供了新的临床策略。Midkine（MK）是一种肝素结合的分泌性生长因子,因在胚胎发育中期高表达而得名,是一种能促进正常组织稳态和疾病发展的多重功效因子。MK在人类神经系统和多种恶性肿瘤中高表达,可介导细胞生长、存活、转移、迁移和血管生成等过程。然而MK对神经干细胞增殖以及分化的调控机制,还处于研究空白阶段。本研究拟探讨MK对神经干细胞增殖的促进作用及其生物学机制,并尝试利用MK改善AD模型小鼠的神经干细胞数目及认知功能,为修复或替代AD中受损的神经细胞提供备选方案。方法本研究为了检测MK在体外实验中对NSC增殖分化的影响,以SPF级C57BL/6J小鼠或MK基因敲除小鼠13.5天胚胎大脑皮层的神经干细胞为实验对象,使用原代神经球培养的方法获得体外实验用的小鼠神经干细胞,并利用免疫化学荧光染色、Western Blot、Real-time PCR等实验方法,检测了NSC数量变化以及相关蛋白的表达水平,初步明确了MK对NSC增殖的促进作用。为了探讨MK对AD模型鼠体内NSC的影响,随机分配三组模型鼠,每组5只,分别腹腔注射500ug/kg MK、PTN或PBS,通过免疫荧光染色检测侧脑室NSC数量变化,并通过水迷宫试验进一步证明了MK对AD模型小鼠的认知功能改善作用。实验结果均用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析。结果本研究首先利用野生型和MK基因敲除小鼠的NSC进行体外培养实验,明确了MK对神经干细胞增殖的促进作用,并进一步利用APP/PS1的转基因小鼠证明了MK在AD模型小鼠脑内的NSC增殖促进作用,证明其可用于改善AD模型小鼠的干细胞数目及认知功能,得到了以下研究结果:1.体外实验中NSC的MK基因高表达,敲除MK后NSC的增殖能力明显降低,添加MK后的NSC增殖状况明显改善。2培养基中添加MK组的Akt蛋白磷酸化水平升高。3.通过向AD模型小鼠腹腔注射MK,可观察到脑内神经干细胞的数量增加,并通过水迷宫测试证明了AD模型鼠的认知行为能力得到改善。水迷宫试验中对照组、MK组及PTN组的逃避潜伏期分别为43±7s、22±4s、38±9s（P<0.01）,60s跨越平台次数分别为4.5±0.5次、9.0±0.8次、4.3±0.4次（P<0.01）。结论中期因子MK在小鼠神经干细胞中特异性高表达,并通过激活Akt增殖信号转导通路促进神经干细胞的增殖,可作为影响AD模型小鼠发病过程及作为疾病治疗干预手段之一。
李渊渊[3]（2018）在《人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖及分化的作用》文中指出目的人参皂苷（ginsengsaponin,GS）是中药人参干燥根的主要有效成分,现代中药药理学实验及临床运用等研究证明,人参皂苷对神经组织的生长和神经网络的建立具有促进作用。人参皂苷可上调缺血再灌注后脑组织的HIF-1 α蛋白和VEGF蛋白含量,通过旁分泌和自分泌的形式诱导神经干细胞的增殖与分化,从而促进脑损伤结构和功能的修复。本研究在课题组前期工作的基础上,探讨人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）胎鼠海马神经干细胞（NSCs）增殖及分化的作用。方法1胎鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定采用孕15-17d的SD大鼠,清洁级,体外分离培养胎鼠海马神经干细胞,并传代培养,通过免疫荧光染色法分别以Nestin、BrdU对神经干细胞及神经干细胞的增殖进行鉴定,以Tuj-1、Vimentin分别对神经元和星形胶质细胞祖细胞进行神经干细胞的分化鉴定。2建立胎鼠海马神经干细胞氧糖剥夺再灌注（OGD/R）模型将经过免疫荧光鉴定纯度为95%的胎鼠海马P2神经干细胞制备成单细胞悬液,显微镜下计数,调整细胞密度为1×105个/mL,均匀接种。设置正常组、模型组,正常组采用神经干细胞完全培养液、正常细胞培养箱（37℃、5%CO2）进行培养;模型组采用无葡萄糖的Earle氏液培养。在启动OGD前,预先用N2循环流通三气培养箱,以除去残留的O2,待箱内O2约为16%时,放入已接种神经干细胞,继续置换培养液中的02,待箱内环境（37℃、1%02、5%C02、94%N2）持续30min后,计时培养4h;取出细胞,用神经干细胞完全培养液代替原培养液,继续放置37 ℃5%CO2培养箱中复氧培养4h以产生再灌注损伤。3 MTS法检测人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖的最佳作用浓度及最佳作用时间收集并制备P2神经干细胞单细胞悬液,将人参皂苷设置10个浓度梯度（200、100、50、25、12.5、5、2.5、1、0.5、0μg/mL）,分别加入细胞培养液中对细胞进行培养,设置空白对照组,运用MTS法检测其在490nm波长处的OD值,计算以上不同浓度对神经干细胞增殖的影响,进而筛选出人参皂苷促进神经干细胞增殖的最佳作用浓度。同理,将人参皂苷以最佳作用浓度对神经干细胞单细胞悬液进行培养,并设置10个不同时间点（0、1、3、6、12、24、48、72、96、120h）及空白对照组,同样运用MTS法筛选出人参皂苷促进神经干细胞增殖的最佳作用时间点。4免疫荧光细胞染色法检测人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖及分化的作用收集并制备P2神经干细胞单细胞悬液,设置正常组、模型组及人参皂苷组;其中正常组进行常规细胞培养;模型组和人参皂苷组于三气培养箱中缺氧培养4h,再灌注4h;取出细胞,将人参皂苷以最佳作用浓度分别加入以上三组继续以最佳作用时间点予以培养,运用免疫荧光细胞染色法检测各组神经干细胞增殖及分化相关的特异性标志物Nestin、BrdU、Tuj-1 以及 Vimentin 的表达情况。结果1胎鼠海马神经干细胞的分离培养和鉴定体外成功分离培养胎鼠海马神经干细胞,经鉴定其纯度达95%以上。2人参皂苷促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖的最佳作用浓度及最佳作用时间点①人参皂苷促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖的最佳作用浓度为1μg/mL。②人参皂苷促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖的最佳作用时间为点48h。3免疫荧光细胞染色法检测人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖及分化的影响与正常组比较,模型组Nestin分别与BrdU、Tuj-1、Vimentin标记的阳性细胞个数减少、和（或）突起数目减少,细胞体积减小;与模型组比较,人参皂苷组阳性细胞个数和（或）突起数目及体积明显增多,但少于正常组。人参皂苷具有促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞的增生及分化作用。结论11μg/mL和48h是人参皂苷促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）胎鼠海马神经干细胞增殖的最佳作用浓度及最佳作用时间点。人参皂苷能够促进氧糖剥夺再灌注（OGD/R）胎鼠海马神经干细胞阳性细胞和突起数目明显增多,并分化为神经元、星形胶质细胞的祖细胞,从而提示人参皂苷具有促进脑缺血后神经干细胞增殖和分化的作用,修复脑组织损伤。
贾单单[4]（2016）在《间歇运动激活心梗大鼠骨骼肌和心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路改善心功能》文中认为目的：探讨间歇运动上调心肌梗死（mycardial infarction, MI）大鼠骨骼肌白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor, LIF）及其受体表达抑制骨骼肌萎缩改善心功能。方法：3月龄雄性Sprague-Dawley大鼠,左冠状动脉前降支（Left anterior descending coronary artery, LAD）结扎术建立心肌梗死模型,随机分为5组：安静组（Control）、间歇运动组（CE）、假手术组（Sham）、心梗组（MI）、心梗+间歇运动组（ME）,每组12只。CE和ME组心梗术后1周开始预适应运动训练,运动方式10～15m/min,30min/d,共5d,再以递进式跑台训练,1Om/min×10min热身运动,25m/min×6min 和 15 m/minx4min,依次交替,60min/d×5d/wk,共8周。训练结束后次日,大鼠腹腔麻醉,血流动力学结合心电图评定大鼠心功能,处死并迅速分离切取腓肠肌和心肌组织,组织学方法测定腓肠肌细胞横截面积,Masson染色观察分析心肌胶原容积（Collagen volume fraction, CVF）百分比,TUNEL法检测骨骼肌和心肌细胞凋亡,Western Blot检测腓肠肌和心肌LIF、LIFR、p-STAT3、 STAT3、Bcl-2、Bax、VEGFA 和 α-SMA蛋白表达,RT-qPCR检测腓肠肌和心肌LIF/LIFR基因表达,免疫荧光和免疫组织化学检测LIF、LIFR、血管性血友病因子（von Willebrand Factor, vWF）和 CD31表达。结果：（1）间歇运动显着改善心梗大鼠骨骼肌萎缩现象。心梗大鼠腓肠肌重量、腓肠肌重量／胫骨长度比值、腓肠肌细胞横截面积、腓肠肌α-actin和 α-myosin蛋白表达显着减小,间歇运动显着提高心梗大鼠腓肠肌重量、腓肠肌／胫骨长度比值、腓肠肌细胞横截面积、腓肠肌α-actin和α-myosin蛋白表达。表明,心梗诱导大鼠骨骼肌萎缩,间歇运动显着改善心梗大鼠骨骼肌萎缩现象。（2）间歇运动可激活正常大鼠骨骼肌LIF-LIFR-STAT3信号通路。大鼠腓肠肌LIF表达于胞浆,LIFR表达于胞膜。间歇运动显着提高正常大鼠腓肠肌LIF/LIFR基因和蛋白及STAT3磷酸化水平。表明,间歇运动可激活正常大鼠骨骼肌LIF-LIFR-STAT3信号通路。（3）间歇运动显着激活心梗大鼠腓肠肌LIF-LIFR-STAT3信号通路。心梗大鼠腓肠肌L IF/LIFR基因和蛋白表达及STAT3磷酸化水平显着下降,间歇运动显着上调心梗大鼠腓肠肌LIF/LIFR基因和蛋白表达及STAT3磷酸化水平。表明,心梗后腓肠肌LIF-LIFR-STAT3信号通路被抑制,间歇运动可激活心梗腓肠肌LIF-LIFR-STAT3信号通路。（4）间歇运动显着抑制心梗大鼠骨骼肌细胞凋亡。心梗大鼠腓肠肌TUNEL阳性颗粒和Bax蛋白表达显着增加,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显着减小；间歇运动可使心梗大鼠腓肠肌TUNEL阳性颗粒和Bax蛋白表达显着减少,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显着增加。表明,心梗大鼠骨骼肌发生细胞凋亡现象,间歇运动显着抑制心梗大鼠骨骼肌细胞凋亡。（5）间歇运动激活正常大鼠心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路；心梗心肌LIF/LIFR基因和蛋白表达及STAT3磷酸化水平显着增加；间歇运动可进一步增加心梗心肌LIF/LIFR基因和蛋白表达及STAT3磷酸化水平。表明,心梗心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路显着激活；间歇运动可大幅度激活大鼠心梗心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路。（6）间歇运动可显着抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡。心梗大鼠心肌TUNEL阳性颗粒IOD值和Bax蛋白表达显着增加,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显着减少；间歇运动干预可使心梗大鼠心肌TUNEL阳性颗粒的IOD值和Bax蛋白表达显着减小,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值显着增加。表明,心梗大鼠心肌细胞发生凋亡现象,间歇运动可显着抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡。（7）间歇运动显着促进心梗心脏血管再生。心梗心脏CD31和VEGF-A蛋白表达显着降低,α-SM A蛋白表达显着增加；间歇运动可使心梗心脏CD31和VEGF-A蛋白表达显着升高。心梗心脏PCNA和vWF阳性微血管密度显着增加,间歇运动可使心梗心脏PCNA和vWF阳性微血管密度进一步增加。表明,心梗心脏发生代偿性血管新生,间歇运动显着增加心梗心脏微血管密度。（8）间歇运动显着增加正常和心梗大鼠血清LIF水平。正常大鼠血清LIF浓度很少。机体受外界刺激,LIF靶器官可分泌LIF入血。心梗大鼠血清LIF浓度增加,间歇运动干预进一步刺激远隔器官LIF的分泌,增加血清LIF浓度。（9）间歇运动显着降低心梗心脏胶原纤维容积百分比,改善心梗心脏病理性重塑,显着改善心梗大鼠心功能。（10）骨骼肌LIF表达与骨骼肌细胞凋亡存在相关性；心肌LIF表达与心肌细胞凋亡、血管再生及心功能改善存在相关性；骨骼肌、血清和心肌LIF蛋白表达与心功能各项参数呈显着相关。推测,间歇运动改善骨骼肌萎缩,刺激骨骼肌细胞产生并分泌LIF入血,作用于心梗心脏的LIFR,激活LIF-LIFR-STAT3信号通路,抑制心肌细胞凋亡,刺激心肌血管再生,改善微循环和心脏病理性重塑,显着提升心梗心功能。结论：（1）间歇运动显着改善心梗大鼠骨骼肌萎缩现象;激活正常和心梗大鼠骨髂肌LIF-LIFR-STAT3信号通路,抑制心梗大鼠骨骼肌细胞凋亡（2）间歇运动激活正常和心梗大鼠心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路,抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡,促进心梗心脏血管再生,降低心梗心脏胶原纤维容积百分比,改善心梗心脏病理性重塑,显着改善心梗大鼠心功能。（3）间歇运动显着增加正常和心梗大鼠血清LIF水平。骨骼肌LIF表达与骨骼肌细胞凋亡存在相关性；心肌LIF表达与心肌细胞凋亡、血管再生及心功能改善存在相关性；骨骼肌、血清和心肌LIF蛋白表达与心功能各项参数呈显着相关。（4）间歇运动改善骨骼肌萎缩,改善心梗心脏功能的可能机制,是通过刺激骨骼肌细胞产生并分泌LIF入血,作用于心梗心脏的LIFR,激活LIF-LIFR-STAT3信号通路,抑制心肌细胞凋亡,刺激心肌血管再生,改善微循环和心脏病理性重塑,显着提升心梗心功能。
丁慧,岳丽杰,杨春兰[5]（2013）在《次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶研究进展》文中提出次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase,HPRT）是一种细胞质酶,在体内广泛存在,它不仅参与嘌呤碱基的补救合成途径,而且关系到嘌呤类药物的代谢,是调控该类药物药理效应和毒性反应的关键酶。其基因突变可影响酶的活性,不仅可能导致不同临床表现的代谢疾病的发生,而且影响体内嘌呤类药物的代谢。同时,HPRT作为管家基因,是诊断许多疾病的靶点基因。文章概括了HPRT研究的新进展,通过总结国内外研究现状,发现HPRT的研究既推动了嘌呤类药物个体化用药的发展及新药物的研发,又促进了HPRT突变相关遗传代谢疾病的诊断和治疗。
杨阿莉[6]（2013）在《脑出血大鼠脑内细胞外基质相关基因表达的研究》文中研究表明背景和目的：脑出血（intracerebral hemorrhage, ICH）属于脑血管病中的危重类型,在中国的发病率明显高于西方国家。尽管ICH急性期治疗策略已经越来越规范化,但仍局限于血肿清除以及对症支持治疗,针对脑出血造成的神经功能缺失目前尚无有效的治疗方法,致使其病死率及致残率近十年来仍居高不下。已知的脑出血后损伤机制表明细胞外基质（extracellular matrix, ECM）的组成、结构和分布均发生了变化,血脑屏障（blood brain barrier, BBB）破坏、脑水肿的形成等都与ECM密切相关。既往研究证实ECM参与胚胎及各种组织、器官的形成、发育、修复和再生。ECM的组成成分与神经系统的多种生理病理过程密切相关。此外,与ECM功能相关的蛋白如基质金属蛋白酶家族（matrix metalloproteinases, MMPs）,整合素家族（integrins）,选择素家族（selectins）以及透明质酸酶等均可作用于ECM,参与炎症反应、肿瘤转移、血管发生及创伤愈合等过程。因此,本研究拟从脑出血后ECM相关基因表达变化的角度,探讨脑出血后组织和神经功能恢复的作用机制,将为基础和临床探索脑出血治疗策略提供新的线索和思路。方法：本研究分为2个部分。第一部分：通过立体定位向大鼠脑内注射Ⅶ型胶原酶复制脑出血模型,假手术组注入等体积生理盐水。采用基因芯片法检测脑出血后ECM相关基因表达变化。第二部分：根据第一部分实验结果,选择胶原（collagen）Ⅰ、collagen Ⅲ、collagen Ⅳ,MMP-2、MMP-9、膜型（memberane-type, MT）1-MMP以及integrin αvβ3、integrin α5β1进行蛋白表达验证。大鼠分假手术组及脑出血组,处理同第一部分。采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）-右旋糖酐（dextran）灌注结合激光共聚焦显微镜观察损伤区微血管构筑及血流灌注情况；免疫组化方法检测脑出血损伤区增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）+/血管性血友病因子（von Willebrand factorv, WF）+标记的新生血管密度变化及collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、collagen Ⅳ, MMP-2、MMP-9、MT1-MMP以及integrin αvβ3、integrin α5β1的时空分布；Western blot技术检测脑出血后collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、collagen Ⅳ, MMP-2、MMP-9、MT1-MMP以及integrin β3、integrin a5的蛋白表达。结果：基因芯片结果显示：脑出血后ECM相关基因如细胞分化抗原（cluster of differentiation, CD）44、骨桥蛋白（oesteopontin, OPN/SPP-1）、钙粘蛋白（cadherin）-1、弹性蛋白微原纤维界面因子（elastin microfibril interfacer, EMILIN）-1、胞间粘附因子（intercellular adhesion molecule, ICAM）-1、转化生长因子（transforming growth factor, TGF）-β以及大部分的ECM胶原成分、MMPs及integrins成员等于不同时间点均有不同趋势的变化。FITC-dextran灌注结果显示：脑出血后4天,损伤处周围血流灌注较假手术组明显减少,脑出血后7天到14天损伤脑组织周围微血管密度较4天时逐渐增大,血流灌注增多,21天到达高峰。免疫组化结果显示：脑出血后4天血肿周围即可见至JPCNA+/vWF+标记的细胞核,且持续增高至14天。在血肿周围可见大量collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、collagen Ⅳ, MMP-2、MMP-9、 MT1-MMP以及integrin αvβ3、integrin α5β1阳性血管。Western blot结果显示：脑出血后4天collagen Ⅰ、collagen Ⅲ、collagen Ⅳ, MMP-2、 MMP-9、MT1-MMP以及integrin β3、integrin a5蛋白表达较假手术组明显增高。Collagen Ⅰ、collagen Ⅲ蛋白表达增高至14天,持续到21天；collagenⅣ蛋白表达从14天开始有所降低；MMP-9蛋白表达7天时即开始有所减少,MMP-2、MT1-MMP、integrin β3、integrin α5蛋白表达随着时间延长逐渐增高至14天,21天时开始降低。结论：1.脑出血后,ECM相关基因表达改变,可能参与脑内炎症反应、组织修复过程；2.脑出血后,collagens、MMPs和integrins表达持续增高,可能改变脑微血管与周围ECM的相互作用,影响血管新生,修复损伤组织。
黄小杰[7]（2013）在《调控paraspeckles和神经干细胞小分子化合物高内涵筛选模型的建立与优化》文中研究说明高内涵筛选技术（high content screening, HCS）是根据在细胞内获取多个靶标的荧光数据,而建立起来的筛选方法。并且HCS能够在保持细胞结构和功能完整性的前提下,检测被筛样品对细胞形态、生长、分化、迁移、凋亡、代谢途径及信号转导等各个环节的影响。此外,HCS还能在单一实验中获取大量与基因、蛋白及其他细胞成分相关的信息,确定其生物活性和潜在毒性。同时,HCS也是一种应用高分辨率的荧光数码影像系统,旨在获得被筛样品对细胞产生的多维立体和实时快速的生物效应信息,在细胞水平上检测多个指标的多元化、功能性筛选技术平台,它是交叉多个学科的方法。本论文主要开展调控paraspeckles新型小分子化合物的高内涵筛选的建立与优化及神经干细胞高内涵筛选模型的建立与优化这两方面的工作。Paraspeckles是最新发现的位于哺乳动物染色体区间的亚细胞核结构体,由长链非编码RNA-NEAT1与DBHS蛋白家族构成的结构复杂的RNA-蛋白复合体。Paraspeckles通过识别RNA的3’端非编码区域存在的经A-to-Ⅰ编辑的反向重复序列,将特定RNA滞留于核内,调控相关基因的表达。在多种细胞生命活动过程中如应激反应、细胞分化和病毒感染等,paraspeckles结构体能有效调控基因表达,参与生理病理过程。但是迄今为止,paraspeckles的具体功能和调控机制还不是非常明确。本课题拟以细胞核中paraspeckles结构体数量的显着性变化为指标,通过高内涵筛选化合物库,希望获得可有效调控paraspeckles结构体数量的小分子化合物,并以其为探针工具对paraspeckles结构体调控机制及生理功能进行更加深入的研究。本论文中,在前期构建过表达EYFP-PSP1α的HEK293细胞系和鉴定EYFP-PSP1α能够标记paraspeckles结构体在细胞中的定位与数量的基础上,优化高内涵筛选模型相关条件,如细胞密度、细胞板的选择、免疫组化实验步骤、荧光成像拍摄条件等,以及根据paraspeckle实际大小,调整高内涵数据图像分析参数如荧光点的长、宽、体积及荧光强度等参数,从而确立高内涵筛选模型及分析条件,Z’因子为0.71,符合筛选质控要求。进一步对具有生理活性的2560个天然产物和生物活性分子库中的1906个已知功能的药理活性分子进行快速、大批量筛选,在4466个化合物中,发现140个化合物可显着改变细胞中paraspeckles数量的新型化合物。之后,对筛选出的化合物进行复筛,确定12个化合物可以显着降低细胞内paraspeckles的数量。最后,使用Vestern Blotting、荧光原位杂交和Northern Blot对筛选出的化合物进行验证,发现这些化合物确实能够减少NEAT1（?）勺表达量,证明该高内涵筛选模型的可行性。下一步,我们将计划以筛选到的小分子化合物为工具探针,进一步研究相关信号通路对paraspeckles的调控机制及其可能的生理病理意义。神经干细胞是一群具有分化为神经元细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞的能力,可自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。神经干细胞的研究是目前神经科学研究的前沿领域,不仅因为其对神经发育研究的重要性,更主要的是其对神经退行性疾病具有潜在的治疗价值。无论是体外神经细胞的移植还是内源性神经的激活,首先都需要充分了解神经干细胞在生理或病理过程中增殖和定向分化的精密调控机制,从而实现高效可控的诱导其分化产生功能神经元或特定类型神经胶质细胞。最近几年,化学生物学研究方兴未艾,基于化学生物学研究发现小分子探针不仅可作为重要的工具化合物有力推动神经干细胞的基础研究,更由于其结构简单、易于进入血脑屏障和进一步结构优化的特点,具有基于干细胞研究方向的新一代药物研发前景。此外,对神经干细胞定向分化诱导的探索也将为我们的中药现代化研究带来新的切入点。因此,本课题拟建立神经干细胞定向分化高内涵筛选模型,希望通过对国家化合物样品库具有结构多样性的天然产物库、生物活性分子库及多样性库进行大量、随机、准确的筛选,找到能高效调节神经干细胞定向分化的诱导剂并对其作用机制作进一步探讨,这不仅有助于深化对神经干细胞分化调节机制的认识,而且有望找到具有自主知识产权的先导化合物作为治疗神经退行性疾病等中枢神经系统损伤的药物。本论文中,首先分离E12.5-E13.5天原代胚胎大脑皮层神经干细胞,进行单层培养。利用增殖培养基及分化培养基培养及处理神经干细胞,免疫细胞化学染色技术检测神经干细胞标志蛋白Nestin、神经元标志蛋白β Ⅲ-Tubulin及星型胶质细胞标志蛋白GFAP表达量,鉴定所分离传代培养的神经干细胞具有自我更新和分化能力。确认用于高内涵筛选所用的神经干细胞原代分离条件如小鼠品系确定、孕鼠天数、分离部位、分离方法、细胞代数、细胞传代条件、细胞贴壁培养等。然后建立和优化高内涵筛选模型相关条件,包括细胞接种密度、分化过程中是否半数换液、分化时间和DMSO浓度、成像条件、免疫组化条件等,以及确定高内涵图像分析参数,包括通过细胞核染色荧光强度确定研究对象,通过β Ⅲ-Tubulin免疫荧光强度确定神经元数量等。以GSK3-beta抑制剂BIO为阳性化合物,计算Z’-因子为0.45,属于可接受范围。下一步,我们将对国家化合物样品库具有结构多样性的天然产物、生物活性分子库及多样性库进行随机、准确的筛选,希望找到能高效调节神经干细胞定向分化的诱导剂并对其作用机制作进一步探讨。
梁军[8]（2013）在《Wharton’s jelly间质干细胞分化为胆碱能神经元的实验研究》文中提出目的：利用神经干细胞条件培养基、骨形态发生蛋白4（bone morphogeneticprotein4, BMP4）和成纤维细胞生长因子8（fibroblast growth factor8, FGF8）诱导Wharton’s jelly间充质干细胞（Wharton’s jelly mesenchymal stem cells，WJ-MSCs）分化为胆碱能样神经元。方法：植块法提取WJ-MSCs；提取胚胎14天端脑神经干细胞，制备神经干细胞条件培养基；诱导时，10%胎牛血清DMEM-Ham’s F-12培养基培养WJ-MSCs1天，神经干细胞条件培养基培养半量换液培养2天，神经干细胞条件培养基全量培养7天，神经干细胞条件培养基、BMP4和FGF8联合诱导10天；诱导后，用免疫荧光双染法和RT-PCR技术检测胆碱乙酰基转移酶（cholineacetyltransferase, CHAT）、神经丝蛋白（neurofilament, NF）、Islet-1和Lhx8的表达，用乙酰胆碱检测试剂盒检测乙酰胆碱分泌情况。结果：诱导后，部分WJ-MSCs转变成根茎样细胞；免疫荧光双重染色检测到胆碱能神经元表型，即CHAT和NF阳性共表达，它们的mRNA也有阳性表达（P<0.01）；分化的胆碱能神经元表型细胞可分泌乙酰胆碱（P<0.01）；免疫荧光双重染色检测到，分化的胆碱能神经元表型细胞共表达胆碱能神经元发生时表达的转录因子lslet-1和Lhx8，二者的mRNA也有阳性表达（P<0.01）。结论：神经干细胞条件培养基、BMP4和FGF8可以诱导WJ-MSCs分化为胆碱能样神经元；分化的细胞表达胆碱能神经元表型CHAT和NF，可分泌Ach，表达胆碱能神经元发生时表达的关键转录因子lslet-1和Lhx8。
李青[9]（2012）在《脑脊液对内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究》文中认为脊髓损伤是脊柱骨折的严重并发症,是困扰临床医生的一大难题。人类神经干细胞的分离、培养成功,为脊髓损伤的治疗提供了一条新的思路,使脊髓损伤恢复变为可能。神经干细胞已经有成熟的体外培养体系,但是,如何将体外培养的神经干细胞移植于体内存活且生长,代替损伤组织重建损伤的脊髓,恢复脊髓神经功能,仍有很多复杂的技术间题未能解决。在成年哺乳动物脊髓的室管膜、膜下区存在内源性神经干细胞,并且在脊髓损伤后出现大量反应性增生。当脊髓损伤后,通过对内源性神经干细胞的定向分化调控,使其迅速分化为神经元或再髓鞘化的少突胶质细胞,代替损伤脊髓组织来重建损伤的脊神经,形成神经通路,恢复脊髓功能,是脊髓损伤治疗的理想方法。脑脊液有营养和保护脑与脊髓的作用,其化学成分与脑脊髓组织细胞外液的成分大致相同。已有研究发现,神经干细胞能在脑脊液中均能存活、增殖和分化；向侧脑室中注射神经生长因子可使损伤的脑组织中内源性神经干细胞增殖加快并向神经元分化；脑脊液对神经元的形成及神经干细胞增殖分化起重要作用。本实验第一部分研究成年大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞的增殖、分化规律。通过选用成年健康Wistar大鼠42只,随机分为正常对照组（A组,n=14）和脊髓损伤组（B组,n=28）。利用动脉瘤夹压迫法建立脊髓损伤动物模型,于伤后1天、3天、1周、2周、3周、4周、8周进行取材,观察局部病理组织学改变及用免疫组织化学方法检测局部脊髓组织在不同时段Nestin（?）勺阳性表达变化。结果发现A组只有极少数室管膜细胞胞浆内Nestin表达阳性,且在不同时间段Nestin表达无明显变化。B组脊髓组织中Nestin于损伤后1天时有少量表达；3天时室管膜细胞Nestin表达明显升高,1周达到高峰,与A组比较差异具有显着性（P=0.000）；2周时开始下降,4周时很少有Nestin表达,8周时两组Nestin的表达差异无显着性（P>0.05）。说明正常成年大鼠脊髓组织中存在有内源性神经干细胞,其主要存在于脊髓中央管周围的室管膜及膜下区。当脊髓损伤后这些内源性神经干细胞表达明显增加,在损伤原位增生、分化,但随着时间的推移内源性神经干细胞逐渐减少。本实验第二部分探讨经侧脑室向脑脊液中注射碱性成纤维细胞生长因子或／和骨形成蛋白-2后,大鼠脊髓损伤部位内源性神经干细胞的增殖分化情况,了解脊髓损伤后脑脊液成分的改变对内源性神经干细胞增殖分化的影响,为脊髓损伤的治疗提供新方法。具体方法为选用成年健康Wistar大鼠60只,利用动脉瘤夹钳夹压迫法建立脊髓损伤动物模型。将其随机分为4组：按分组通过脑室向脑脊液中注射不同物质,A组注射生理盐水作为对照组；B组注射骨形成蛋白-2；C组注射碱性成纤维细胞生长因子；D组注射骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子组。于脊髓损伤后1周、2周、3周、4周、8周进行取材,将脊髓组织进行免疫组织化学方法检测,观察并比较各组大鼠损伤脊髓组织中在不同时间段BrdU及Nestin的阳性表达变化情况。实验结果发现在脊髓损伤后1周时,各组脊髓组织中BrdU（?）日性细胞数的表达差异无显着性（P>0.05）；在脊髓损伤后2周时,A组损伤脊髓组织中BrdU开始下降,B、C、D三组损伤脊髓组织中BrdUP日性细胞数进一步增多；在脊髓损伤后3周时,A组脊髓组织中BrdU染色阳性细胞明显减少,B、C、D组中BrdU阳性细胞达到高峰,与A组比较差异具有显着性（P=0.000）；在脊髓损伤后4周时,B、C、D三组损伤脊髓组织中BrdU阳性细胞数开始减少；在第8周时,A组中BrdU几乎无表达,B、C、D三组中BrdUP日性细胞数仍有少量表达,与A组比较差异无显着性（P>0.05）。脊髓组织中Nestin阳性细胞数的表达,在脊髓损伤后1周时,各组差异无显着性（P>0.05）；在脊髓损伤后2周时,A组损伤脊髓组织中Nestin开始下降,B、C、D三组损伤脊髓组织中Nestin阳性细胞数进一步增多；在脊髓损伤后3周时,B、C、D组中Nestin阳性细胞达到高峰；在脊髓损伤后4周时,B、C、D三组损伤脊髓组织中Nestin阳性细胞数开始减少,B组中下降的更明显；在第8周时,A组中中NestinP日性细胞几乎无表达,B、C、D三组中BrdU阳性细胞数仍有少量表达,与A组比较差异具有显着性（P=0.000）。我们实验结果说明成年Wistar大鼠脊髓损伤后,在脑脊液中加入碱性成纤维细胞生长因子和（或）骨形成蛋白-2,损伤脊髓组织中内源性神经干细胞明显增多,说明碱性成纤维细胞生长因子和骨形成蛋白-2能够促进脊髓内源性神经干细胞的增殖和分化。脊髓损伤后通过改变脑脊液的成份会对脊髓内源性神经干细胞增殖和分化产生影响。
邹志浩[10]（2011）在《基质细胞衍生因子1α诱导胎源细胞向帕金森病鼠脑内迁移的实验研究》文中进行了进一步梳理帕金森病（Parkinson’s Disease PD）是一种好发于中老年、以锥体外系黑质（Substantia nigra, SN）多巴胺（Dopamine, DA）能神经元进行性变性、坏死为主要病理表现,是仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease, AD）最常见的中枢神经系统退行性疾病,也是发病率第一位的运动神经系统退行性疾病。PD的发病机制尚不清楚,目前认为是环境以及遗传等多种因素所共同作用的结果。对于PD患者而言,当DA的含量减少至生理水平的70%以上时,就会出现临床症状,并以进行性加重的运动迟缓、肌强直、静止性震颤以及植物神经紊乱等为主要特征,并可能伴有心理以及精神症状改变。统计资料表明,PD总发病率为0.1%-0.2%,其中55岁以上人群发病率为1.4%,而75岁以上人群这一比率上升至3.4%；数据表明,随着年龄的增长,PD的发病率呈逐渐上升趋势。随着我国乃至世界人口老龄化速度的加快,PD患者的患病人数也在日趋增加,病人因此而饱受痛苦,同时也给社会及家庭带来巨大的负担。目前,PD的治疗手段主要有：内科治疗、外科治疗,以及细胞移植治疗等方法。内科治疗以口服DA制剂,DA受体激动剂,DA增强剂,抗胆碱类药物、单胺氧化酶（MAO-B）抑制剂及儿茶酚胺邻甲基转移酶（COMT）抑制剂等药物为主,虽然服用早期对于PD患者疗效确切,能够起到缓解症状的作用,但是都不能延缓PD的自然病程进展,同时随着口服药物时间的延长,疾病的进展,单次药物的剂量需要不断加大,服用药物的间隔时间不断缩短,并出现药物耐受现象以及“异动”症状等副作用,同时,长期服用DA类药物还可以加重对中脑内残余DA神经元的损伤,而加重病情；外科治疗对于中晚期PD患者的近期疗效具有较好的效果,目前常用的手术方式包括：立体定向下核团毁损术以及丘脑底核（STN）深部脑刺激电极埋植术（DBS）等。核团毁损手术是一种破坏性手术,对于双侧症状明显患者,通常为避免更严重的并发症而以一侧手术为主,由于可能存在毁损灶的自我修复作用,其远期疗效受到限制；而DBS手术疗效确切,并有逐渐取代核团毁损术的趋势,但是,DBS高昂的价格又限制其能够得到广泛的应用,同时,术后仍不能改变PD的自然进程。因此,无论是内科治疗还是外科治疗,都只是缓解症状的手段,属于对症治疗,并不能阻止和逆转PD患者SN区DA能神经元进行性减少的病理进程。随着基因工程技术以及干细胞理论和实验研究的不断深入,为PD的治疗提供了一个全新的理念及可能。目前认为,PD是最适合于给予细胞移植及基因治疗的疾病之一,因此,细胞移植及基因治疗为PD的真正治愈提供了广阔的空间。基质细胞衍生因子-1α（stromal cell derived factor-1, SDF-1α）是一类新近发现的α（CXC）趋化因子家族成员。SDF-1α在神经系统发育以及脑损伤中具有重要的调节和趋化作用。研究发现,SDF-1α大量及选择性地在发育的中枢神经系统中表达,并随着发育过程,表达量呈进行性降低。而其唯一配体CXCR4对于中枢神经系统的发育是非常重要的,CXCR4能使得神经元顺其梯度改变发生迁移。另有研究也证实,CXCR4受体或SDF-1α基因敲除的小鼠出生后表现出器官发育上的缺陷：包括神经系统发育障碍,并于出生前后死亡；而且SDF-1α及其受体CXCR4在小脑、海马和大脑新皮质的发育中发挥重要的作用。对于这一作用,普遍认为SDF-1α在低浓度时刺激神经元轴突延伸,而在高浓度时抑制神经元轴突形成,在部分轴突观察到SDF-1α可以促进轴突分支,这种作用可能与CXCR4在神经元的表达部位有关。在神经元祖细胞,CXCR4大量表达在胞体和轴突前沿,随着细胞分化成熟,CXCR4主要沿着轴突和树突表达,很少在胞体表达。另外,相关研究称,表达CXCR4的骨髓干细胞能够沿着SDF-1α的浓度梯度而定向迁移；在组织及器官损伤的情况下,SDF-1α能促进骨髓干细胞、炎症细胞募集到损伤部位,它既是调节组织、器官损伤修复的关键细胞因子,也是一个调节局部炎症的重要趋化因子。同时也有研究发现,血管内皮生长因子（VEGF）能促进血管内皮细胞SDF-1α的表达,同时通过阻断SDF-1α/CXCR4轴可以起到抑制VEGF依赖的血管形成作用；而且高表达CXCR的肿瘤细胞有更高的转移潜能,伴自分泌SDF-1α的肿瘤细胞株转移潜能更高。因此,SDF-1α的生物学特性也决定了它可能在组织、器官损伤的修复过程中发挥着“诱导”或“召唤”内源或者外源干细胞迁移等重要作用。在PD的细胞移植研究中,种子细胞的选择一直是研究的热点。胎源干细胞（Gestation-derived stem cells, GdSCs）是一群来源于胚胎、胎儿以及胎儿附属器官的干细胞,包括胚胎源性干细胞（Embryo-derived stem cells, EdSCs）、胎儿源性干细胞（Fetal-derived stem cells, FdSCs）以及胎儿附属器官源性干细胞（Fetal appendage-derived stem cells, FAdSCs）,其中FAdSCs包括脐血间充质干细胞（umbilical cord blood mesenchymal stem cells, UCBMSCs）、脐带间充质干细胞（umbilical cord mesenchymal stem cells, UCMSCs）以及胎盘间充质干细胞（placenta mesenchymal stem cells, PMSCs）等。胚胎以及胎儿自身发育成熟的过程,其实就是大量各个阶段的干细胞（全能干细胞、多能干细胞以及成体干细胞等）不断流动更新以及增值分化的过程,在这一过程中,每个细胞、组织乃至器官都存在巨大的发育潜能以及强大的可塑性。此前的研究已经证实,EdSCs在体外环境下能够像DA能神经元分化；近期也有研究显示,在神经元条件培养基、音猬蛋白（sonhedgehog, SHH）（?）（?）成纤维细胞生长因子-8 （Fibroblast growth factor 8, FGF-8）共同作用下,UCMSCs能够被成功诱导为表达酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）、并能够分泌DA的DA能神经元。然而,在成体干细胞（Adult stem cells, ASCs）的研究中,即使ASCs具有横向诱导分化能力已经被普遍承认,但是,将其定向诱导分化分为特定神经元或DA能神经元依然是研究中的“瓶颈”；虽然在2006年,日本科学家Takahashi和Yamanaka将4种转录因子（Oct4, Sox2, Klf4和c-Myc）在体外同时转导小鼠的皮肤成纤维体细胞,使之成为具有像EdSCs一样有多发育潜能的诱导多能干细胞（induced pluripoten tstem cells, iPS）,但是iPS的研究依然存在着定向分化不稳定以及较强的致瘤性重要缺陷。因此,在PD的干细胞移植以及基因的目前治疗中,仍以中脑来源的FdSCs移植疗效最为肯定。但是,这种治疗方法受到移植时机选择以及伦理问题、胎源细胞来源少等限制,难以得到广泛应用。因此,如果能够能够利用胎儿发育过程中巨大的种子细胞来源,通过某种“自然召唤”的诱导方式使GdSCs达到特定损伤部位,在其微环境的诱导下向特定细胞分化,最终起到修复、治疗的目的,而又不损伤胎儿,则可能根本解决供体来源以及伦理等问题。因此,本研究的目的旨于观察胎源细胞在PD动物模型体内的迁移,评价其对PD模型的治疗作用,同时,探讨胎源细胞在体内的迁移机制,以及为进一步可迁移胎源细胞生物学特性的鉴定以及筛选提供前提条件,为胎源细胞以及SDF-1α的临床应用提供实验依据。因此,本研究共分为三个部分：第一部分帕金森病MPTP小鼠的建立及评价本部分研究中,采用小剂量间隔多次的方法,共计16天分6次皮下注射MPTP成功制作了C57BL/6j小鼠PD模型。在每次注射MPTP药物后以及制模后每日上午9时连续1小时观察小鼠行为变化情况及持续时间；并在制模开始后第0、4、7、13、16天局部注射MPTP后30分钟,给予行爬杆实验,并记录所用时间爬杆实验检测小鼠协调运动能力；分别于制模开始后第16天局部注射MPTP后,以及制模后第30天,采用免疫组化方法统计并比较各组小鼠中脑黑质TH+神经元数量的改变；分别于制模开始后第10、16天局部注射MPTP后,以及制模后第30天,应用高效液相色谱-荧光检测器检测各组小鼠黑质DA含量的变化,并综合评价小鼠PD模型。结果提示,MPTP组小鼠注射药物后在行为学上出现了肢体震颤、弓背、竖尾、竖毛、后肢张开、运动迟缓、步态不稳等改变,较好地模拟PD的症状；同时在爬杆实验上,MPTP组小鼠爬杆时间呈逐渐延长趋势（F=39.532,P<0.001）,同时较对照组延长（F=234.896,P<0.001）,其中制模后第16天所用爬杆时间（19.36±1.68）秒较对照组（12.31±7.52）秒延长约3倍；病理学检查方面,MPTP组小鼠中脑黑质TH+神经元数量较对照组显着减少（F=712.128,P<0.001）,同时呈逐渐下降（t=7.387,P<0.001）,制模开始后30天（54.40±5.77）个/高倍视野,仍较对照组（313.20±25.13）个/高倍视野减少约82.6%,与PD的病理改变相符；在中脑DA神经递质检测方面,MPTP组小鼠DA含量较对照组显着减少（F=1655.877,P<0.001）,并呈进行性下降（F=433.320,P<0.001）,制模开始后30天,仍较对照组减少约81.3%,较好的模拟了PD的神经递质改变。以上结果表明,MPTP小剂量、多次皮下注射建立的C57BL/6j小鼠亚急性PD模型成功率高,死亡率低,在行为学、病理以及脑内神经递质改变等方面较好的模拟了PD的变化,是一种较为理想的PD动物模型,为本实验下一步进展提供了前提条件。第二部分小鼠SDF-1α基因真核表达质粒的构建及鉴定在本部分研究中,采用分子生物学技术,在构建SDF-1α目的基因引物后,应用PCR方法,在小鼠cDNA中成功提取了目的基因SDF-1α基因,在限制性性内切酶XhoI及EcoRI酶切以及连接酶作用下,将小鼠SDF-1α基因克隆至载体pDsRed2-N1的多克隆位点上,构建了新的质粒pDsRed2-N1-SDF-1α;经过限制性性内切酶XhoI及EcoRI酶切产物凝胶电泳及测序后,证实在载体质粒pDsRed2-N1的多克隆位点内,XhoI及EcoRI酶之间成功插入了小鼠SDF-1α基因,成功构建了小鼠真核表达质粒pDsRed2-N1 SDF-1α;将质粒pDsRed2-N1-SDF-1α在脂质体LP2000的辅助下转染至人肝癌SMMC7721细胞系,转染后12小时,在荧光显微镜下可见早表达红色荧光；培养24小时后,荧光显微镜下可见荧光表达逐渐增多；流式细胞仪检测转染后人肝癌细胞红色荧光蛋白表达率为：转染后3天（26.48±4.77）%,5天后为（40.00±4.97）%,较第3天转染率显着增高（t=-4.394,P=0.002）,同时在转染后第5天,荧光免疫细胞化学SDF-1α-FITC染色后,经流式细胞仪双标细胞计数检测,红、绿荧光蛋白共表达率为（28.40±1.30）%,其中共表达细胞占红色荧光蛋白表达细胞的71.0%；结果表明,质粒pDsRed2-N1-SDF1α能够转染真核细胞,并同时表达指示蛋白RFP及小鼠SDF1a因子,其共表达率为71%。在引入RFP的表达后,使目的因子SDF-1α的表达在观察中更加直观化,为进一步活体实验中目的因子表达的检测以及追踪提供了便利条件。第三部分SDF-1α诱导胎源干细胞在PD鼠模型脑内的迁移本章研究中,将此前构建质粒pDsRed2-1-SDF-lα在立体定向技术下局部注射至PD模型小鼠脑内右侧尾状核头部,并使之与GFP基因工程雄性小鼠交配,并受孕、分娩。通过观察模型小鼠行为学改变、检测SN区DA含量,以及荧光显微镜/共聚焦显微镜下观察GFP细胞的表达,并通过流式细胞仪检测血液中GFP细胞数量,Western blots检测不同组织中SDF-1α的表达来综合评价PD模型小鼠症状的改善。结果表明：两组模型小鼠随着制模时间的延长,部分运动症状均有所改善,但是两组中成功模型小鼠症状改善更为明显,但两组成功PD模型小鼠间症状无明显差异；两组成功模型PD小鼠DA含量（45.32±7.35）ng/g显着高于未成功模型PD小鼠（33.35±3.88）ng/g（F=28.386,P<0.001）,而且SDF-1α组提高更为显着（t=3.246,P=0.018）,但是,两组未成功PD小鼠间DA含量无显着差异（t=0.041,P=0.969）。两组成功模型PD小鼠血液中均可检测到GFP细胞的表达,但是SDF-1α组GFP细胞的表达量显着高于假手术组（t=18.155,P<0.001）,是假手术组的7倍。各组SDF-1α因子表达的检测结果可见,SDF-1α组针道附近脑组织中处于高表达状态,其次为其附近脑组织中,再次为在肝脏及血液的表达,而在假手术组脑组织中未见有明确表达；在GFP观察中可见,SDF-1α组经产小鼠嗅球内出现明显表达GFP的细胞,并且细胞形态已经出不具备了神经元样结构；同时在质粒pDsRed2-N1-SDF-1α移植局部脑组织中,可同时观察到RFP及GFP的表达,同时可以观察到GFP细胞在肝脏及脾脏血管及窦的壁上的表达；但是在假手术组却没有出现上述表现。同时在Y染色体特异表达基因Sry检测中可见,各组及部位之间交互效应显着（F=18.108,P=0.003）即不同分组间Sry基因含量有显着差异,SDF-1α组Sry基因含量显着高于假手术组（F=135.706,P<0.001）；SDF-1α组脑组织中Sry基因含量（16.36±1.98）%。显着高于同组肝脏组织（10.70±1.37）‰（t=4.076,P=0.015）；而在假手术组中,肝脏内Sry基因含量虽然高于同组脑组织,但是两者间无显着统计学差异（t=1.548,P=0.197）。结果表明：SDF-1α通过浓度的梯度改变,诱导了胎源干细胞向PD模型小鼠体内迁移,并PD模型小鼠起到了治疗作用。总之,胎源细胞能够在SDF-1α的诱导下向PD小鼠体内迁移,并能够通过血脑屏障迁移至小鼠脑内,并部分改善了PD小鼠的症状,提高了脑内DA的含量,达到治疗的目的。因此同时,SDF-1α是促使胎源细胞迁移的机制之一,而血液迁移是胎源细胞的主要移植途径。为进一步可迁移胎源细胞生物学特性的鉴定以及筛选提供前提条件,为胎源细胞以及SDF-1α的临床应用提供了实验依据。
二、大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除（论文提纲范文）
（1）孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:单次或多次七氟醚麻醉鼠神经干细胞分化水平的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验动物模型 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物合笼 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 麻醉处理 |
| 2.3 实验细胞模型 |
| 2.3.1 实验细胞 |
| 2.3.2 实验分组 |
| 2.3.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.4 Western Blot蛋白分析 |
| 2.4.1 蛋白提取 |
| 2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.4.3 配胶及电泳 |
| 2.4.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.4.5 二抗孵育与显影 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.5.1 组织固定、包埋及切片与细胞固定 |
| 2.5.2 免疫荧光 |
| 2.6 神经干细胞鉴定及分化鉴定方法 |
| 2.6.1 神经干细胞的鉴定方法 |
| 2.6.2 神经干细胞分化鉴定方法 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 原代大鼠海马神经干细胞及其分化能力的鉴定 |
| 3.2 孕中期七氟醚吸入对子代大鼠海马神经干细胞早期分化水平的影响 |
| 3.3 孕中期七氟醚吸入对子代大鼠海马神经干细胞远期分化水平的影响 |
| 3.4 七氟醚暴露对原代海马神经干细胞早期分化水平的影响 |
| 3.5 七氟醚暴露对原代海马神经干细胞远期分化水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 ATN1 调控七氟醚对大鼠海马神经干细胞分化影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验动物模型 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物合笼 |
| 2.2.3 实验分组 |
| 2.2.4 麻醉处理 |
| 2.3 实验细胞模型 |
| 2.3.1 实验细胞 |
| 2.3.2 实验分组 |
| 2.3.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.4 Western Blot蛋白分析 |
| 2.4.1 蛋白提取 |
| 2.4.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.4.3 配胶及电泳 |
| 2.4.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.4.5 二抗孵育与显影 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.5.1 组织固定 |
| 2.5.2 免疫荧光 |
| 2.6 实时荧光定量PCR |
| 2.6.1 RNA提取及浓度测定 |
| 2.6.2 反转录反应 |
| 2.6.3 qPCR |
| 2.7 慢病毒载体构建和感染 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 七氟醚暴露后子代大鼠海马神经干细胞内ATN1 表达水平下降 |
| 3.2 七氟醚暴露后原代海马神经干细胞内ATN1 表达水平下降 |
| 3.3 ATN1 过表达慢病毒感染神经干细胞的构建与鉴定 |
| 3.4 ATN1 过表达减轻七氟醚对海马神经干细胞ATN1 表达水平的影响 |
| 3.5 ATN1 过表达减轻七氟醚对海马神经干细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 miR-410-3p对七氟醚暴露后大鼠海马神经干细胞ATN1 表达水平及分化水平的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.2 实验细胞模型 |
| 2.2.1 实验细胞 |
| 2.2.2 实验分组 |
| 2.2.3 细胞培养及麻醉处理 |
| 2.3 Western Blot蛋白分析 |
| 2.3.1 蛋白提取 |
| 2.3.2 BCA法测定蛋白浓度及蛋白变性 |
| 2.3.3 配胶及电泳 |
| 2.3.4 转模、封闭及一抗孵育 |
| 2.3.5 二抗孵育与显影 |
| 2.4 免疫荧光 |
| 2.4.1 组织固定 |
| 2.4.2 免疫荧光 |
| 2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.5.1 RNA提取及浓度测定 |
| 2.5.2 反转录反应 |
| 2.5.3 qPCR |
| 2.6 双荧光素酶报告基因分析实验 |
| 2.6.1 细胞转染 |
| 2.6.2 双荧光素酶检测 |
| 2.7 慢病毒载体构建和感染 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 miR-410-3p靶向结合ATN1 |
| 3.2 七氟醚暴露后原代海马神经干细胞内miR-410-3p表达水平上升 |
| 3.3 miR-410-3p慢病毒感染神经干细胞的构建与鉴定 |
| 3.4 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对miR-410-3p表达水平的影响 |
| 3.5 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对ATN1 表达水平的影响 |
| 3.6 miR-410-3p沉默减轻七氟醚对大鼠海马神经干细胞分化的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本论文创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 麻醉药对神经干细胞分化影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）中期因子（Midkine）调控神经干细胞增殖对AD模型小鼠神经保护作用的研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 一、综述 |
| 参考文献 |
| 二、在学期间科研成绩 |
| 三、致谢 |
| 四、个人简介 |
（3）人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖及分化的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 神经干细胞的研究方法进展 |
| 1 概述 |
| 1.1 神经干细胞的定义及主要生物学特性 |
| 1.2 神经干细胞与疾病 |
| 1.3 神经干细胞研究方法 |
| 2 在体实验动物模型 |
| 2.1 实验性脑出血(experimental intracerebral hemorrhage, EICH)模型 |
| 2.2 大脑中动脉闭塞(MCAO)模型 |
| 2.3 脑衰老模型 |
| 2.4 阿尔茨海默病(AD)模型 |
| 2.5 基因敲出(knockout)模型 |
| 2.6 转基因模型 |
| 人淀粉样前蛋白(amyloid precursor protein, APP)转基因小鼠老年痴呆模型 |
| 3 离体实验细胞模型 |
| 3.1 氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型 |
| 3.2 衰老模型 |
| 3.3 神经干细胞药物筛选模型 |
| 4 神经干细胞来源 |
| 5 试验方法 |
| 5.1 显微技术 |
| 5.2 细胞组分分析技术 |
| 6 研究展望 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药对神经干细胞的作用及其机制研究进展 |
| 1 概述 |
| 2 中药对神经干细胞的影响 |
| 2.1 在体研究 |
| 2.2 离体研究 |
| 3 中药复方及中药单体通过Notch信号通路调控神经干细胞增殖分化的研究 |
| 3.1 中药复方与Notch信号通路 |
| 3.2 中药单体与Notch信号通路 |
| 4 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 胎鼠海马神经干细胞的分离培养与鉴定 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要溶液制备 |
| 2 方法 |
| 2.1 胎鼠海马神经干细胞原代培养 |
| 2.2 神经干细胞传代培养 |
| 2.3 神经干细胞单克隆培养 |
| 2.4 神经干细胞分化培养 |
| 2.5 神经干细胞免疫荧光细胞染色鉴定 |
| 2.6 图像采集与形态学观察 |
| 3 结果 |
| 3.1 神经干细胞原代及传代培养的形态学观察 |
| 3.2 激光共聚焦显微镜镜下观察 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 实验二 神经干细胞氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型的建立及MTS检测人参皂苷对NSCs-OGD/R的最佳作用浓度及时间点 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要溶液制备 |
| 2 方法 |
| 2.1 神经干细胞原代培养及传代培养 |
| 2.2 实验分组及氧糖剥夺再灌注(OGD/R)模型的建立 |
| 2.3 MTS法检测人参皂苷对氧糖剥夺再灌注(OGD/R)神经干细胞增殖的最佳作用浓度 |
| 2.4 MTS法检测人参皂苷以最佳浓度(1μg/mL)作用于氧糖剥夺再灌注神经干细胞的最佳作用时间点 |
| 2.5 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 人参皂苷对NSCs-OGD/R的增殖的最佳作用浓度 |
| 3.2 人参皂苷对NSCs-OGD/R的增殖的最佳作用时间点 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 实验三 人参皂苷对NSCs-OGD/R增殖及分化的作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药品及试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 主要溶液的配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 胎鼠海马神经干细胞分离培养及鉴定 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 免疫荧光细胞染色法检测OGD/R神经干细胞的增殖和分化情况 |
| 3 图像采集与形态学观察 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简历 |
（4）间歇运动激活心梗大鼠骨骼肌和心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路改善心功能（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 第一部分 文献综述与选题依据 |
| 1 前言 |
| 2 运动与心梗心脏保护 |
| 2.1 运动对心梗心脏的保护效应 |
| 2.2 运动对心梗心脏保护的机制研究 |
| 3 LIF的生物学表征 |
| 3.1 LIF的分子表征 |
| 3.2 LIF受体分类与分布 |
| 3.3 LIF的生物学功能 |
| 4 LIF临床医学研究进展 |
| 4.1 LIF与骨代谢 |
| 4.2 LIF与肾脏疾病 |
| 4.3 LIF与缺血再灌注心肌保护 |
| 4.4 LIF与心梗心脏保护 |
| 5 LIF信号通路 |
| 5.1 骨骼肌LIF信号通路 |
| 5.2 心肌LIF信号通路 |
| 6 LIF的表达与分泌 |
| 6.1 骨骼肌LIF分泌特征 |
| 6.2 心肌LIF分泌特征 |
| 6.3 血液LIF检测 |
| 6.4 运动与骨骼肌LIF表达 |
| 7 选题依据 |
| 7.1 选题思路 |
| 7.2 实验设计思路 |
| 第二部分 间歇运动对心梗大鼠骨骼肌萎缩和LIF/LIFR表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物分组、心梗模型制备和运动方案 |
| 1.2 主要仪器和试剂 |
| 1.3 取材、样品制备 |
| 1.4 腓肠肌DiI染色 |
| 1.5 免疫荧光 |
| 1.6 TUNEL凋亡检测 |
| 1.7 Western Blot实验 |
| 1.8 RT-qPCR实验 |
| 1.9 数据采集与统计学处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 间歇运动显着改善心梗大鼠腓肠肌萎缩现象 |
| 2.2 间歇运动显着提高正常大鼠腓肠肌LIF/LIFR表达的IOD值 |
| 2.3 间歇运动显着提高正常大鼠腓肠肌LIF/LIFR基因表达 |
| 2.4 间歇运动显着激活正常大鼠腓肠肌LIF/LIFR-pSTAT3信号通路 |
| 2.5 间歇运动显着提高心梗大鼠腓肠肌LIF/LIFR表达的IOD值 |
| 2.6 间歇运动显着提高心梗大鼠腓肠肌LIF/LIFR基因表达 |
| 2.7 间歇运动显着激活心梗大鼠腓肠肌LIF-LIFR-STAT3信号通路 |
| 2.8 间歇运动显着抑制心梗大鼠腓肠肌细胞凋亡 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 间歇运动对心梗大鼠腓肠肌形态影响的分析 |
| 3.2 间歇运动对心梗大鼠腓肠肌骨架蛋白表达的影响 |
| 3.3 间歇运动对正常、心梗大鼠腓肠肌局部LIF/LIFR基因和蛋白表达影响的分析 |
| 3.4 间歇运动对心梗大鼠腓肠肌细胞凋亡的影响 |
| 3.5 心梗大鼠骨骼肌LIF表达与骨骼肌萎缩的相关分析 |
| 3.6 间歇运动对心梗大鼠骨骼肌萎缩改善的机制分析 |
| 4 小结 |
| 第三部分 间歇运动对心梗心肌LIF/LIFR表达、细胞凋亡和血管新生的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物分组、心梗模型制备和运动方案(同第二部分) |
| 1.2 主要仪器和试剂(同第二部分) |
| 1.3 取材、样品制备 |
| 1.4 免疫组织化学与免疫荧光 |
| 1.5 TUNEL凋亡检测(同第二部分) |
| 1.6 Western Blot实验 |
| 1.7 RT-qPCR实验方法(同第二部分) |
| 1.8 数据采集与统计学处理(同第二部分) |
| 2 实验结果 |
| 2.1 间歇运动激活正常大鼠心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路 |
| 2.2 间歇运动可显着激活大鼠心梗心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路 |
| 2.3 间歇运动可显着抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡 |
| 2.4 间歇运动显着促进大鼠心梗心脏血管再生 |
| 3 分析与讨论 |
| 3.1 间歇运动对正常大鼠心肌LIF/LIFR的影响 |
| 3.2 间歇运动对心梗大鼠心肌LIF/LIFR的影响 |
| 3.3 间歇运动对心梗大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制研究 |
| 3.4 间歇运动对心梗大鼠心脏血管再生的影响及其机制研究 |
| 4 小结 |
| 第四部分 间歇运动刺激骨骼肌LIF分泌改善心功能的关系 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物分组、心梗模型制备和运动方案(同第二部分) |
| 1.2 主要仪器和试剂(同第二部分) |
| 1.3 心脏质量指数和血流动力学指标测定 |
| 1.4 血清样品制备与LIF测试方法 |
| 1.5 数据采集与统计学处理(同第二部分) |
| 2 实验结果 |
| 2.1 间歇运动显着增加正常和心梗大鼠血清LIF水平 |
| 2.2 间歇运动显着降低心梗心脏胶原纤维容积百分比 |
| 2.4 间歇运动显着改善心梗大鼠心功能 |
| 2.5 骨骼肌LIF表达与骨骼肌细胞凋亡相关分析结果 |
| 2.6 心肌LIF表达与心肌细胞凋亡相关分析结果 |
| 2.7 心肌LIF表达与心肌血管再生相关分析结果 |
| 2.8 骨骼肌、血清和心肌LIF表达与心功能改善相关分析结果 |
| 3 讨论与分析 |
| 3.1 间歇运动刺激骨骼肌分泌LIF可进入血液循环 |
| 3.2 运动促进骨骼肌LIF表达与心功能改善关系密切 |
| 3.3 间歇运动刺激心梗大鼠骨骼肌分泌LIF保护心脏的可能机制 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间参加学术会议及科研成果 |
（5）次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶研究进展（论文提纲范文）
| 1 HPRT的一般生物特性 |
| 1.1 HPRT的基因结构 |
| 1.2 HPRT的蛋白结构 |
| 2 HPRT与嘌呤类药物代谢 |
| 2.1 嘌呤类药物体内代谢的研究现状 |
| 2.2 HPRT活性与6-MP药效及毒副反应的关系 |
| 3 HPRT突变的研究现状 |
| 4 HPRT缺陷的治疗与发病机理 |
| 5 影响HPRT突变的因素 |
| 6 研究HPRT的现实意义 |
| 7 结语 |
（6）脑出血大鼠脑内细胞外基质相关基因表达的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物模型的制作 |
| 2.2.2 动物分组 |
| 2.2.3 主要试剂配制 |
| 2.2.4 组织取材 |
| 2.2.5 基因芯片 |
| 2.2.6 脑出血后新生血管的检测 |
| 2.2.7 ECM相关基因的时空分布 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 脑出血后ECM相关基因的表达 |
| 3.2 脑出血后的血管新生 |
| 3.3 脑出血后ECM相关蛋白的时空表达 |
| 3.3.1 CollagenⅠ、collagenⅢ和collagenⅣ的表达 |
| 3.3.2 MMP-2,MMP-9和MTl-MMP的表达 |
| 3.3.3 Integrin αvβ3和integrin α5β1的表达 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 大鼠脑出血模型复制 |
| 4.2 脑出血后ECM相关基因转录水平的表达变化 |
| 4.3 脑出血后的血管新生 |
| 4.4 脑出血后ECM相关基因蛋白水平的表达变化 |
| 4.4.1 CollagenⅠ、Ⅲ和Ⅳ的表达 |
| 4.4.2 MMP-2,MMP-9和MT-1MMP的表达 |
| 4.4.3 Integrin αvβ3和α5β1的表达 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 ECM相关基因中英文名称对照 |
| 综述一 基质金属蛋白酶在血管生理病理过程中的作用 |
| 参考文献 |
| 综述二 整合素与神经系统疾病 |
| 参考文献 |
| 在校期间科研成果 |
| 致谢 |
（7）调控paraspeckles和神经干细胞小分子化合物高内涵筛选模型的建立与优化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 第一部分 调控paraspeckles小分子化合物的高内涵筛选的建立与优化 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 第一节 paraspeckles高内涵筛选模型在高内涵筛选系统Operetta上的建立与优化 |
| 第二节 paraspeckles高内涵筛选模型在高内涵筛选系统Operetta上初筛和复筛 |
| 第四章 结论 |
| 第五章 讨论与展望 |
| 第二部分 调控神经干细胞小分子化合物高内涵筛选模型的建立与优化 |
| 第一章 前言 |
| 第一节 神经干细胞 |
| 第二节 筛选调控神经干细胞命运的新型小分子化合物的意义 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 第一节 胎鼠大脑皮层原代神经干细胞的分离 |
| 第二节 稳定传代神经干细胞的鉴定 |
| 第三节 单层培养神经干细胞高内涵筛选系统相关参数的优化与确定 |
| 第四章 结论 |
| 第五章 讨论与展望 |
| 附录 |
| 缩略词列表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（8）Wharton’s jelly间质干细胞分化为胆碱能神经元的实验研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 与胆碱能神经元发生相关的因子 |
| 1.2 LIM 同源域蛋白家族与胆碱能神经元的发生 |
| 1.3 Wharton’s jelly 间充质干细胞的特征 |
| 1.4 WJ-MSCs 对神经系统疾病的治疗潜能 |
| 1.5 WJ-MSCs 的应用优势、不足之处和展望 |
| 第2章 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验取材 |
| 2.1.2 实验主要试剂 |
| 2.1.3 实验主要仪器 |
| 2.1.4 主要实验用液配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 WJ-MSCs 的提取、培养、传代 |
| 2.2.2 WJ-MSCs 的鉴定 |
| 2.2.3 神经干细胞条件培养基的制备 |
| 2.2.4 诱导 WJ-MSCs |
| 2.2.5 诱导后检测胆碱能神经元表型 |
| 2.2.6 乙酰胆碱检测试剂盒检测乙酰胆碱 |
| 2.2.7 检测胆碱能神经元发生时表达的转录因子 Islet-1 和 Lhx8 |
| 2.2.8 统计学处理 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 体外培养的 WJ-MSCs 呈梭形或不规则形态 |
| 3.2 WJ-MSCs 具有间充质干细胞的生物学特性 |
| 3.3 孕 14 天端脑细胞具有神经干细胞表型 |
| 3.4 诱导时，WJ-MSCs 逐渐转变为多突起的根茎样形态 |
| 3.5 诱导后的细胞出现胆碱能神经元表型 CHAT 和 NF |
| 3.5.1 免疫荧光双重染色检测到 CHAT 和 NF 的阳性共表达 |
| 3.5.2 RT-PCR 法检测到 CHAT 和 NF 的 mRNA 的表达 |
| 3.6 分化的胆碱能神经元表型细胞分泌乙酰胆碱 |
| 3.7 分化的胆碱能神经元表型细胞表达胆碱能神经元发生时表达的关键转录因子 Islet-1 和 Lhx8 |
| 3.7.1 免疫荧光双重染色检测到 Islet-1 和 Lhx8 共表达于分化的胆碱能神经元表型细胞 |
| 3.7.2 RT-PCR 法检测到 Islet-1 和 Lhx8 的 mRNA 表达 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 作者简介及在攻读博士学位期间发表文章 |
| 致谢 |
（9）脑脊液对内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文名词对照与缩写 |
| 前言 |
| 一、成年大鼠脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖、分化的研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 实验动物及分组 |
| 1.1.3 动物模型制备 |
| 1.1.4 实验动物的饲养及管理 |
| 1.1.5 标本采集及组织切片的制备 |
| 1.1.6 组织学观察(HE染色) |
| 1.1.7 免疫组织化学染色 |
| 1.1.8 图像分析 |
| 1.1.9 统计学处理 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 实验动物数量分析 |
| 1.2.2 大鼠BBB评分结果 |
| 1.2.3 HE染色结果 |
| 1.2.4 Nestin染色结果 |
| 1.2.5 BBB评分与Nestin阳性细胞数的相关性分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 内源性神经干细胞存在的部位 |
| 1.3.2 脊髓损伤后内源性神经干细胞增殖分化规律 |
| 1.4 小结 |
| 二、脑脊液对内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验动物及分组 |
| 2.1.3 动物模型制备 |
| 2.1.4 脑脊液中注射给药 |
| 2.1.5 实验动物的饲养及管理 |
| 2.1.6 增殖细胞的标记与取采 |
| 2.1.7 组织切片的制备 |
| 2.1.8 组织学观察(HE染色) |
| 2.1.9 免疫组织化学染色 |
| 2.1.10 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 运动评分结果 |
| 2.2.2 BrdU染色结果 |
| 2.2.3 BBB评分与BrdU阳性细胞数的相关性分析 |
| 2.2.4 Nestin染色结果 |
| 2.2.5 BBB评分与Nestin阳性细胞数的相关性分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 脑脊液与内源性神经干细胞 |
| 2.3.2 碱性成纤维生长因子在脑脊液中对内源性神经干细胞增殖、分化的影响 |
| 2.3.3 骨形成蛋白-2在脑脊液中对内源性神经干细胞增殖、分化的影响 |
| 2.3.4 BMP-2和bFGF在脑脊液中对内源性NSCs增殖、分化的影响 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 |
| 内源性神经干细胞与脊髓损伤 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（10）基质细胞衍生因子1α诱导胎源细胞向帕金森病鼠脑内迁移的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 基本材料和方法 |
| 第一章 帕金森病小鼠的建立及评价 |
| 第二章 小鼠SDF-1α基因真核表达质粒的构建及鉴定 |
| 第三章 SDF-1α诱导胎源干细胞在PD鼠模型脑内的迁移 |
| 全文总结 |
| 缩略词对照表 |
| 综述(一) |
| 参考文献 |
| 综述(二) |
| 参考文献 |
| 在学期间已发论文 |
| 致谢 |
| 统计学证明 |
四、大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除（论文参考文献）
- [1]孕中期七氟醚麻醉对子代大鼠海马神经干细胞分化的影响及机制研究[D]. 张伊. 中国医科大学, 2021
- [2]中期因子（Midkine）调控神经干细胞增殖对AD模型小鼠神经保护作用的研究[D]. 冯金歌. 沈阳医学院, 2020(01)
- [3]人参皂苷对氧糖剥夺再灌注（OGD/R）神经干细胞增殖及分化的作用[D]. 李渊渊. 北京中医药大学, 2018(08)
- [4]间歇运动激活心梗大鼠骨骼肌和心肌LIF-LIFR-STAT3信号通路改善心功能[D]. 贾单单. 陕西师范大学, 2016(05)
- [5]次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶研究进展[J]. 丁慧,岳丽杰,杨春兰. 遗传, 2013(08)
- [6]脑出血大鼠脑内细胞外基质相关基因表达的研究[D]. 杨阿莉. 中南大学, 2013(04)
- [7]调控paraspeckles和神经干细胞小分子化合物高内涵筛选模型的建立与优化[D]. 黄小杰. 华东师范大学, 2013(S2)
- [8]Wharton’s jelly间质干细胞分化为胆碱能神经元的实验研究[D]. 梁军. 吉林大学, 2013(08)
- [9]脑脊液对内源性神经干细胞增殖分化影响的实验研究[D]. 李青. 天津医科大学, 2012(01)
- [10]基质细胞衍生因子1α诱导胎源细胞向帕金森病鼠脑内迁移的实验研究[D]. 邹志浩. 南方医科大学, 2011(04)