一、内置编码X-线摄影暗匣的临床应用（论文文献综述）
郑小川[1]（2021）在《HBx降解SAMHD1通过Akt/p27通路促进肝癌细胞增殖的机制研究》文中研究表明目的:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是原发性肝癌的其中一种类型,是目前较为常见的恶性肿瘤之一[1],感染HBV能引起急性、慢性肝炎,同时也是引发肝细胞癌的一个重要危险要素[2,3]。HBV是一种环状部分闭合的双链DNA病毒,编码四种主要的病毒蛋白:HBV多聚合酶、HBV包膜蛋白、HBV核心蛋白和HBx蛋白。大量研究表明:HBx在病毒感染和肝癌的产生中扮演着重要的作用[4,5],但目前HBx诱导HCC发生发展的具体机制尚不明确。一型不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白（SAMHD1）是细胞内一种d NTP三磷酸水解酶,能够调控胞内dNTP的代谢水平[6]。如今报道SAMHD1能抑制HIV和HBV病毒DNA的复制[7,8]。同时,SAMHD1在肺癌中表达下调[9],在急性髓细胞白血病中能抑制细胞增殖[10,11],提示着其是一种潜在的抗癌因子。但目前SAMHD1在HCC的功能尚不清楚,同时HBV是否能调控SAMHD1及具体的机制尚不清楚,因此本课题探索了HBx调控SAMHD1泛素化降解,促进HBV诱导的HCC的潜在作用及机制。方法:第一部分:SAMHD1对HBV感染的肝癌细胞影响及机制研究。1.首先通过Western blot测定了15对乙肝病毒感染的肝癌样本以及相应癌旁组织中SAMHD1蛋白的表达情况,利用CRISPR-Cas9技术,设计特异性的gRNA在HBV整合的肝癌细胞HepGAD38上构建稳定敲除SAMHD1（KO-SAMHD1）的细胞系。3.经由MTT细胞增殖、克隆形成试验研究敲除SAMHD1在HepAD38细胞上对增殖的影响。4.在KO-SAMHD1的HepAD38细胞中检测分别采用RT-qPCR和Western blot检测细胞周期蛋白（cyclin A、cyclin B、cyclin D和cyclin E）、周期蛋白依赖性激酶（CDK1、CDK2、CDK4和CDK6）、细胞周期蛋白抑制剂/激酶抑制剂（p21和p27）转录和蛋白程度的表达情况。5.在KO-SAMHD1的HepAD38细胞中分离细胞浆与细胞核蛋白,Western blot检测p27在胞浆胞核中定位模式的改变。6.Western blot分析KO-SAMHD1后Akt以及活化形式p-Akt的蛋白表达水平变化。第二部分:HBx调控SAMHD1降解的机制研究。1.在肝癌细胞Huh7.0上分别过表达HBV编码的三种病毒蛋白:HBs,HBc和HBx;Western blot检测过表达上述三种病毒蛋白下SAMHD1表达情况的转变。2.在Huh7.0和HepG2细胞上梯度过表达HBx,分别在mRNA和蛋白水平上检测SAMHD1表达的转变。3.使用放线菌酮或MG132处理后,检测HBx对SAMHD1蛋白半衰期和泛素-蛋白酶体的影响。4.Co-IP实验检测HBx与SAMHD1的结合情况,泛素化IP检测HBx是否影响SAMHD1泛素化程度。5.构建HBx片段缺失突变体,通过IP实验检测HBx结合SAMHD1的区段。结果:第一部分:SAMHD1对HBV感染的肝癌细胞影响及机制研究。1.SAMHD1在HBV感染的肝癌组织中表达量较相对应的癌旁组织明显下调。2.KO-SAMHD1基因后,HepAD38的细胞增殖能力明显增强,细胞周期G2/M所占比例增加,G2/G0期占比减少,然而细胞中各个阶段的凋亡未检出明显的差异。3.qPCR同Western blot结果显示KO-SAMHD1后p27在mRNA和蛋白水平的表达减弱,p-CDK2和p-Rb表达水平增加。4.敲除SAMHD1后,未在HepAD38中检出Akt蛋白表达程度的显着差异,但其活性状态的磷酸化形式p-Akt蛋白水平增加。4.经由胞浆胞核蛋白抽提处理后,Western blot结果表明p27的核定位出现重新分布,部分由胞核转移至胞浆。第二部分:HBx调控SAMHD1的分子机制研究。1.在肝癌细胞Huh7.0中过表达HBx后SAMHD1蛋白水平明显下调,而过表达HBc或HBs并未出现相应的表型。2.在Huh7.0或HepG2细胞上梯度过表达HBx,结果表明SAMHD1在蛋白水平,而非RNA水平上表达下调。3.使用放线菌酮处理后,过表达HBx组的SAMHD1蛋白的半衰期时间显着缩短;MG132处理后HBx对SAMHD1蛋白的下调作用消失。4.Co-IP实验证实HBx与SAMHD1存在相互结合作用,泛素化IP表明HBx过表达后引起SAMHD1泛素化水平提升。筛选HBx和SAMHD1的IP实验表明HBx蛋白的C段（AA130-154）是与SAMHD1蛋白结合的关键区域。结论:SAMHD1蛋白在HBV感染的肝癌组织中低表达;SAMHD1通过Akt/p27信号通路,影响p27的核定位和转录水平的表达,从而抑制肝癌细胞（HepAD38）的增殖和细胞周期停滞。HBV编码的病毒蛋白HBx通过C端（AA130-154）与SAMHD1相互结合,并通过泛素-蛋白酶体途径影响SAMHD1的泛素化程度降解SAMHD1,从而影响SAMHD1在肝癌发生发展的作用。
高胜男[2]（2021）在《白介素37在支气管哮喘中的作用及其机制研究》文中研究指明背景:过敏性支气管哮喘是由过敏原致敏,共刺激因子存在的条件下,2型辅助T细胞（Th2）细胞产生白介素（IL）-5,IL-4,IL-13,诱导嗜酸性粒细胞存活和成熟,B细胞抗体类别转换,IgE合成,进而导致IgE交联和肥大细胞活化引起的气道炎症。目前临床上治疗以吸入糖皮质激素为主,重症或难治性哮喘加用抗IgE（奥马珠单抗）治疗,中性粒细胞为主型辅以白三烯调节剂,大环内酯类药物。为了实现支气管哮喘的个体化治疗,近年来致力于研究哮喘的不同亚型和病因,开发针对2型免疫相关细胞因子（IL-4,IL-5,IL-13,IL9等）的抗体。白介素37（IL-37）被证明在哮喘中可以减少哮喘小鼠肺组织嗜酸性粒细胞浸润,改善气道高反应性,减少黏液分泌,调节Th1/Th2平衡,且IL-37在哮喘患者中表达水平降低。本课题旨在研究IL-37在哮喘患者中的表达情况及其对小鼠哮喘炎症模型的改善程度,初步探索其影响哮喘2型免疫反应的作用模式及机制,为哮喘的靶向和个体化治疗提供理论依据。方法:我们收集了中日友好医院呼吸内科符合GINA2018诊断标准的门诊哮喘患者19例,健康志愿者7例的基本信息,哮喘症状及生活质量评分,临床检查及外周血。提取外周血单个核细胞（PBMCs）,qPCR检测PBMCs中IL-37基因表达差异,Spearman相关性分析其与临床特征之间的相关性。利用OVA致敏及激发BALB/c小鼠,构建的哮喘气道炎症模型,重组人IL-37（rh IL-37）鼻内滴入,H&E染色观察其对哮喘小鼠肺组织炎症,瑞氏-吉姆萨染色观察肺泡灌洗液（BALF）中炎细胞渗出,免疫组化染色观察IL-37相关受体表达情况,乙酰甲胆碱激发试验检测小鼠气道高反应性（AHR）变化。对各组小鼠肺组织进行蛋白芯片抗体阵列检测分析,筛选差异表达蛋白,对差异蛋白进行基因本体分析（GO）及京都基因和基因组百科全书信号通路分析（KEGG）分析。接下来对差异基因相关文献进行回顾,挑选5个哮喘相关蛋白（CCL3,CCL4,CCL5,CXCL9,CXCL13）进行细胞水平验证。我们用Ficoll梯度分离方法将哮喘患者PBMCs进行分离体外培养,rhIL-37进行体外刺激,酶联免疫吸附法（Elisa）检测5个哮喘相关蛋白分泌水平变化。此外我们在人气道上皮细胞系BEAS-2B中验证IL-37对CXCL13分泌的影响。OVA构建上皮细胞过敏性炎症模型,rhIL-37进行体外刺激,Elisa检测刺激前后CXCL13的分泌水平变化。qRT-PCR检测NIK和CXCL13 mRNA表达变化,Western-blot检测NIK表达水平变化。质粒转染过表达NIK,Western-blot观察转染效率,Elisa检测转染前后细胞培养上清液中CXCL13的浓度变化。结果:1.哮喘患者组及健康对照组年龄,性别,BMI均无差异,哮喘组患者人外周血PBMC中IL-37 mRNA表达量明显低于对照组表达量;有过敏史的哮喘患者IL-37表达低于无过敏史患者,过敏性鼻炎患者IL-37表达低于无过敏性鼻炎患者;IL-37表达与FeNO呈现负相关,与哮喘控制ACT评分呈负相关,IL-37表达与诱导痰嗜酸性粒细胞比例,血嗜酸性粒细胞比例,FEV1/FVC,血清总IgE,哮喘生活质量评分mini-AQLQ无相关性。2.哮喘小鼠模型经五次隔天激发OVA/PBS（哮喘模型组）组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞,巨噬细胞,中性粒细胞数量增加,rhIL-37处理后,BALF中嗜酸性粒细胞和中性粒细胞相比OVA/PBS组数量减少,差异有统计学意义。Control组对乙酰甲胆碱无反应性,OVA/PBS组呈现气道高反应性,OVA/IL-37组气道高反应性降低。HE染色显示OVA/PBS组中性粒细胞及嗜酸性细胞浸润,OVA/IL-37组小鼠肺组织炎症细胞浸润较OVA/PBS组减少,上皮肿胀减轻,伴性血管扩张减轻。免疫组化分析IL-37相关受体显示IL-18Ra在Control组有中等量的基础表达,OVA/PBS组表达量较Control组稍减少,OVA/IL-37组表达量较Control组及OVA/PBS组显着升高。SIGIRR表达变化趋势与IL-18Ra一致。IL-1 8Rb在各组表达量差异无统计学意义。3.蛋白芯片结果显示,在OVA/PBS组升高（降低）而在OVA/IL-37组降低（升高）差异表达蛋白有20个,前十位依次为MIP-1α（CCL3）,MIP-1β（CCL4）,MCP-5（CCL12）,IL-4,TCA-3（CCL1）,MIG（CXCL9）,MCSF,BLC（CXCL13）,L-selectin,RANTES（CCL5）。KEGG富集到的通路有Toll样受体信号通路,肿瘤坏死因子（TNF）信号通路,Th1/Th2分化,JAK-STAT信号通路,IL-17E信号通路。GO共同富集到的细胞功能有趋化因子反应,趋化因子调控通路,趋化因子胞内反应,白细胞迁移调控等。4.IL-37 刺激哮喘患者 PBMCs 后 CCL3,CCL4,CCL5 分泌减少,50ng/mlIL-37 刺激浓度下分泌水平相对于20ng/ml浓度下减少幅度更明显;IL-37刺激哮喘患者PBMCs后CXCL9和CXCL13表达水平无明显变化。5.OVA刺激的过敏型上皮细胞模型中,NIK表达水平升高,CXCL13表达水平升高,给与IL-37处理后NIK和CXCL13表达水平降低。过表达NIK可以逆转IL-37对CXCL13的降低效应。结论:1.IL-37哮喘患者PBMCs中表达水平低于健康人,有过敏史患者IL-37表达低于无过敏史患者,有过敏性鼻炎患者IL-37表达低于无过敏性鼻炎患者,IL-37表达和FeNO水平与IL-37表达水平呈负相关。2.IL-37可以通过作用于受体IL-18Ra和SIGIRR减少哮喘炎症小鼠BALF中嗜酸性粒细胞数量,减少肺组织嗜酸性粒细胞浸润,降低气道高反应性,对哮喘气道炎症起保护性作用。3.IL-37在哮喘小鼠肺组织中可以下调MIP-1α（CCL3）,MIP-1β（CCL4）,MCP-5（CCL12）,IL-4,TCA-3（CCL1）,MIG（CXCL9）,MCSF,BLC（CXCL13）,L-selectin,RANTES（CCL5）等的表达,IL-37可能调控的通路有Toll样受体信号通路,肿瘤坏死因子（TNF）信号通路,Th1/Th2分化,JAK-STAT信号通路,IL-17E信号通路。4.IL-37可以通过抑制哮喘患者PBMCs中CCL3,CCL4,CCL5分泌控制炎症发展,而对PBMCs中CXCL9和CXCL13分泌无影响5.IL-37在气道上皮细胞中可以通过抑制NIK调节CXCL13的分泌从而抑制过敏性上皮免疫反应。
刘亚红[3]（2020）在《CXCR4通过激活JAK/STAT/GSK3β/β-catenin通路促进肾脏纤维化》文中研究说明研究背景及目的肾脏纤维化是各种类型慢性肾脏病（CKD）最终的共同病理结局,其潜在的确切机制尚不清楚,目前还没有针对肾脏纤维化的完全有效的治疗方法,因此,了解肾脏纤维化的潜在机制并确定治疗靶点对控制CKD的进展至关重要。近年来发现C-X-C趋化因子受体4（CXCR4）参与CKD的进展,我们课题组的前期研究发现CXCR4通过氧化应激介导足细胞损伤,也有报道巨噬细胞或者肾小管细胞的CXCR4基因敲除均可减轻肾脏纤维化。此次课题旨在探索肾小管上皮细胞来源的CXCR4通过β-catenin信号参与肾脏纤维化的可能机制。方法我们构建单侧输尿管梗阻（UUO）、双侧缺血再灌注（IRI）和单侧IRI（UIRI）的CKD小鼠模型和留取CKD患者肾组织。首先从蛋白和基因水平检测CKD肾脏中CXCR4、β-catenin表达的变化及两者的关系。接着向CKD小鼠腹腔注射CXCR4的特异性抑制剂AMD3100,或者尾静脉快速注射使携带的CXCR4编码基因进入肾脏、再腹腔注射β-catenin的小分子抑制剂ICG-001,应用Western blot、IHC、IF、RT-qPCR、Masson染色、过碘酸-希夫（PAS）染色、天狼星红染色和功能学检测等多种技术,从多个层面检测纤维化指标、GSK3β和β-catenin及下游靶基因的表达。在体外实验中,采用过表达或者干扰质粒转染以及细胞因子刺激的方法处理人近端肾小管上皮细胞（HKC-8）,确认GSK3β/β-catenin信号通路对纤维化的影响,并探索GSK3β/β-catenin的上游信号,最后通过CKD动物模型进行体内验证。结果CKD肾脏中CXCR4和β-catenin的表达均呈时间依赖性地增加并主要定位于肾小管上皮细胞,两者呈共表达现象;CXCR4和β-catenin的下游基因MMP-7的mRNA水平均以时间依赖方式上升,两者呈正相关。在CKD小鼠模型中,肾小管损伤,间质胶原蛋白沉积,纤维化指标如Fibronectin、α-SMA、Collagen I、Vimentin表达上调,GSK-3β受到抑制,β-catenin激活,其下游靶基因如PAI-1、Snail1、MMP-7表达增加,维持正常上皮完整性的标志蛋白E-cadherin的表达下调,但以上这些效应都被AMD3100抑制。UUO模型中肾脏外源性过表达CXCR4增强β3-catenin激活而导致的纤维化加重现象被ICG-001阻断。同样地,体外实验也发现CXCR4/β-catenin轴在肾小管上皮细胞损伤导致的纤维化中发挥重要的作用。机制研究方面:体外实验显示SDF-1α以时间依赖方式诱导JAK2/STAT3和JAK3/STAT6的磷酸化,过表达CXCR4、STAT3或STAT6均显着降低GSK3β的mRNA水平,SDF-1α诱导β-catenin与STAT3或STAT6的共定位及核内转移,而沉默STAT3或STAT6阻断了 GSK3β/β-catenin信号和纤维化;体内实验也证实阻断CXCR4信号可抑制JAK/STAT的激活,基因敲低CXCR4阻断JAK/STAT/GSK3β/β-catenin导致的肾脏纤维化。结论CXCR4通过一条新的信号通路JAK/STAT/GSK3β激活β-catenin以促进肾脏纤维化,故靶向抑制CXCR4表达可能因同时抑制多条下游信号级联通路而更好地延缓慢性肾脏病向肾脏纤维化的进展。
邹望远[4]（2011）在《PKCγ调控神经病理性疼痛的蛋白质组学研究》文中研究表明研究背景：神经病理性疼痛（Neuropathic Pain, NP）是临床常见但却缺乏有效治疗手段的症状和疾病,其发生、发展和维持的生物学机制及其治疗是一个具有挑战性的研究课题。NP发病机制目前尚不完全清楚,且缺乏有效的治疗措施,因此对NP及其相关的疼痛分子靶机理进行深入研究十分重要。众多研究表明,PKCγ在NP中枢敏化过程中起着非常重要的作用,是慢性疼痛基因治疗重要的分子靶,从而对PKCγ调控NP的确切机制值得深入研究。本研究拟从蛋白质组学结合RNA干扰技术探讨NP重要分子靶的作用机理,不仅有利于NP病理机制研究方法的完善,而且能为NP研究提供新的实验依据和思路。目的：为阐明PKCγ调控神经病理性疼痛的病理机制,本研究构建介导PKCγ基因shRNA重组慢病毒载体,体外转染原代培养的大鼠神经元,观察shRNA在体外对PKCγ表达的干扰效应。鞘内注射介导PKCγ基因shRNA的慢病毒载体于脊髓水平体内沉默PKCγ基因表达,并观察其对坐骨神经结扎（CCI）致神经病理性疼痛大鼠的镇痛效应。应用RNA干扰联合蛋白质组学技术高通量检测与PKCγ基因功能相关的蛋白质,筛选鉴定出PKCγ调控NP的特异蛋白,发现NP治疗新的靶点。方法：针对已筛选确定的PKCγ基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeⅠ（?）（?）EcoRI酶切后的pGCSIL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白（GFP）]连接产生重组慢病毒载体pGCSIL-shPKCy-GFP （LV-shPKCγ）, PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,从而构建出介导PKCγ基因shRNA重组慢病毒载体。将LV-shPKCγ、pHelper 1.0和pHelper 2.0三质粒共转染293T包装细胞,包装后产生慢病毒,逐孔稀释滴度法测定慢病毒滴度。将慢病毒体外转染原代培养的大鼠神经元细胞,神经元细胞分为三组：Con组,未感染任何病毒的细胞组（Control）; NC组,加阴性对照病毒感染的细胞组（Negative Control）; RNAi组,加RNA干扰靶点病毒感染的细胞组（Knock Down）,以Con组为对照,慢病毒转染神经元3天后,观察绿色荧光蛋白（GFP）表达情况。以Con组及NC组为对照,慢病毒感染神经元细胞5天后,Real-time PCR和Western blot检测（?）PKCγ基因mRNA和蛋白表达水平的干扰效率。成年雄性SD大鼠,体重260-320g,鞘内置管成功5天后,建立坐骨神经结扎（CCI）致神经病理性疼痛模型,随机分为以下4组：CCI+生理盐水（NS组,n=24）；CCI+pGCSIL-GFP空白载体组（LV-NC组,n=32）；CCI+pGCSIL-shPKCy-GFP载体组（LV-shPKCγ组,n=32）；假手术组+生理盐水（Sham组,n=24）,Sham组仅暴露右侧坐骨神经分支,不结扎。CCI术后第5天,大鼠鞘内分别注射两种不同剂量NS, LV-NC或LV-shPKCγ各5μ1及10μ1。鞘内给药7天后各组各取16只大鼠断头处死,取L4-L5脊髓腰膨大处,Real-time PCR检测PKCy mRNA的表达,Western blot法检检测脊髓组织PKCy蛋白的表达。LV-NC组（?）（?）LV-shPKCγ组各取8只大鼠观察GFP脊髓转染效果。所有大鼠均测基础痛阈值,并在第3天、1、2、3、4、5、6周时测定大鼠右后爪机械痛阈值（PMWT）和热痛阈值（PWTL）。建立大鼠鞘内置管及坐骨神经结扎（CCI）致神经病理性疼痛动物模型,鞘内注射介导PKCγ基因RNA干扰的重组慢病毒载体LV-shPKCγ,脊髓水平稳定沉默CCI致神经病理性疼痛大鼠的PKCy基因表达,然后建立空白载体组（CCI+LV-NC, LV-NC组,n=8）和慢病毒载体介导RNA干扰组（CCI+LV-shPKCγ, LV-shPKCγ组,n=8）两组大鼠脊髓组织的蛋白质双向凝胶电泳（2-DE）表达谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）结合生物信息学对两组大鼠脊髓腰段蛋白质表达谱的部分差异表达蛋白质点进行分析和鉴定,Western blot验证其部分差异表达的蛋白质。结果：PCR鉴定和测序证实,本研究成功构建了PKCy shRNA的重组慢病毒载体LV-shPKCγ。包装慢病毒后,浓缩慢病毒悬液的滴度为1×109TU/ml。慢病毒载体体外转染实验大鼠神经元致PKCγ基因的mRNA和蛋白表达水平均一致降低,与对照组比较,干扰组mRNA水平干扰效率达95%P<0.05),干扰组蛋白表达水平干扰效率达80%以上（P<0.05）。鞘内注射LV-shPKCγ7天后,与对照组比较,脊髓PKCγmRNA及蛋白质表达水平显着降低（P<0.05）；LV-NC组（?）（?）LV-shPKCγ组脊髓背角均可见大量GFP绿色荧光蛋白表达；与对照组比较,（?）LV-shPKCγ组PMWT（?）（?）PTWL较注射前明显延长,于第1周开始差异有统计学意义（P<0.05）,镇痛效应可持续6周。LV-NC组（?）（?）LV-shPKCγ组大鼠腰段脊髓组织双向电泳图谱中各分离出清晰的约1050个蛋白质点,两组蛋白质斑点总体分布相似,2-DE图谱中分离出明显差异表达的36个蛋白质点,与LV-NC组比较LV-shPKCγ组有19个蛋白点表达显着上调,17个蛋白点表达显着下调。选取其中20个丰度较高、分辨清楚的差异蛋白质点进行MALDI-TOF MS质谱鉴定分析,共获得20个肽质量指纹图谱。利用Mascot查询软件搜索,共鉴定出18个差异表达蛋白质。生物信息学分析初步鉴定的蛋白质分类为：能量代谢酶类相关蛋白,抗氧化蛋白,分子伴侣、热休克蛋白,突触相关蛋白,细胞骨架蛋白等。涉及到细胞代谢、分子基因表达调控、突触传递等众多事件,Western blot验证了SNAP-25、TERA及AR三个部分差异表达的蛋白质,同蛋白质组学结果的表达变化水平相一致。结论：1.本研究成功构建了介导PKCy基因shRNA重组慢病毒载体（LV-shPKCγ）。2.本研究构建的重组慢病毒载体（LV-shPKCγ）能有效下调体外培养的大鼠神经元细胞PKCγ基因mRNA和蛋白的表达。3.鞘内注射不同剂量的LV-shPKCγ对神经病理性疼痛大鼠有显着持久的镇痛作用。4.联合应用RNA干扰和蛋白质组学技术筛选鉴定出18个PKCγ基因功能相关差异蛋白质,有助于阐明PKCγ调控神经病理性疼痛的分子机理,为发现慢性疼痛治疗新的靶点提供实验依据和线索。
聂华萍[5]（2010）在《RhoGDIα和peripherin参与MAPK信号通路介导NGF启动肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性》文中研究指明研究背景支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病,哮喘患者体内存在神经、内分泌和免疫系统紊乱。神经生长因子（nerve growth factor,NGF）对神经元的生长、分化和发育起促进作用。近年来认为,除了促进气道炎症和重构并加剧免疫应答失衡外,NGF还能启动肾上腺髓质细胞冗余性,使哮喘状态下肾上腺髓质嗜铬细胞有向神经元转化的倾向,导致体内肾上腺素的合成和／或释放障碍,从而参与哮喘的发展。在我们前期的实验中,用差异蛋白质组学技术比较NGF刺激前后蛋白质谱,经筛选并鉴定出17种表达有差异的蛋白。本实验分别通过体外和体内实验验证其中两种蛋白RhoGDIa和peripherin是否参与NGF启动哮喘肾上腺嗜铬细胞冗余性过程。NGF必须依赖一定信号转导通路的介导才能发挥其生物学作用。MAPK信号通路与NGF的生物学效应密切关联。MAPK信号通路是NGF诱导PC12细胞（大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤株）分化的主要正调节途径。因此,本研究拟以牛肾上腺髓质嗜铬细胞作为靶细胞,进一步探讨MAPK信号通路是否参与NGF启动肾上腺嗜铬细胞冗余性,并介导其中RhoGDIa和peripherin的表达。目的观察NGF干预对体外培养的牛肾上腺髓质嗜铬细胞（AMCC）中RhoGDIa和peripherin表达的影响,以及NGF抗体对支气管哮喘大鼠肾上腺髓质组织中的上述两种蛋白表达的影响,以期探讨RhoGDIa和peripherin是否参与NGF启动哮喘肾上腺髓质细胞冗余性过程。方法体外验证实验：体外培养牛肾上腺髓质嗜铬细胞,并在相差显微镜和电镜下鉴定AMCC。用100ng/ml NGF干预AMCC,检测NGF干预时间对AMCC中RhoGDIa和peripherin表达水平的影响。用细胞免疫荧光法检测AMCC中RhoGDIa和peripherin的表达部位。体内验证实验：48只SD大鼠随机均分成4组,每组12只（正常对照组,哮喘模型组,NGF干预组,NGF抗体干预组）。用OVA致敏、激发方法建立哮喘模型,对哮喘大鼠分别施予NGF或NGF抗体干预。干预完成后,取各组大鼠肺组织、双侧肾上腺组织。观察各组大鼠支气管肺组织病理变化,用免疫组化方法和Western Blot法检测各组大鼠肾上腺组织中RhoGDIa和peripherin的蛋白表达情况。结果新分离的AMCC在相差显微镜下多呈圆形,折光性强,散在分布。电镜下可见胞质中均匀分布大小不等、电子密度不同的嗜铬颗粒。NGF干预后,RhoGDIa在AMCC的胞浆及胞膜上均有表达,而peripherin仅在AMCC的胞浆中显着表达。NGF干预与AMCC中RhoGDIa和peripherin的表达呈时效关系。其中RhoGDIa的表达水平在NGF刺激48h后明显降低,而peripherin蛋白的表达在刺激48h后显着升高。体内实验中,哮喘模型组和NGF干预组大鼠气道周围有大量炎症细胞浸润,支气管壁和肺泡间隔显着增厚,而与之相比,NGF抗体干预组大鼠气道周围炎症细胞浸润程度明显减轻,支气管和肺泡间隔增厚亦有所改善。免疫组化结果提示,哮喘组大鼠肾上腺髓质组织可见RhoGDIa或peripherin表达阳性的细胞,而且该组RhoGDIa阳性产物的平均灰度值明显高于正常对照组（P<0.01）,但peripherin阳性产物的平均灰度值则明显低于正常对照组（P<0.01）（灰度值越低提示表达量越高,反之亦然）。与哮喘组比较,NGF干预组大鼠肾上腺髓质组织中RhoGDIa蛋白阳性产物的灰度值进一步升高（P<0.01）,NGF抗体干预组灰度值则明显降低（P<0.01）。然而,NGF干预组大鼠peripherin阳性产物的灰度值显着低于哮喘组（P<0.01）,NGF抗体干预组peripherin的灰度值则较哮喘组明显增高（P<0.05）。Western Blot结果显示,哮喘组大鼠肾上腺组织中RhoGDIa蛋白表达的相对密度明显低于对照组（P<0.01）；但与哮喘组比较,NGF干预组和NGF抗体干预组大鼠肾上腺组织中该蛋白表达的相对密度均无明显统计学差异（P>0.05）。哮喘组肾上腺组织中peripherin蛋白表达的相对密度明显高于对照组（P<0.01）；而与哮喘组相比,NGF抗体干预组大鼠肾上腺组织中该蛋白表达的相对密度显着降低（P<0.05）,NGF干预组则无明显统计学差异（P>0.05）。结论两个差异蛋白RhoGDIa和peripherin在体内外表达趋势与差异蛋白质组学结果一致。这两种差异蛋白可能参与NGF启动哮喘大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性过程。目的研究MAPK信号通路是否参与NGF启动肾上腺嗜铬细胞冗余性,并介导其中RhoGDIa和peripherin的表达。方法分离培养AMCC后给予100ng/mlNGF刺激,用Western Blot法检测五个不同时间点p-ERK、p-JNK和p-p38的表达情况,并确定NGF诱导上述磷酸化蛋白表达高峰的时间点。用等量DMSO、50μMPD98059（ERK抑制剂）、20μM SP600125（JNK抑制剂）和20μM SB202190（p38抑制剂）分别处理AMCC30min后,再予100ng/ml NGF继续培养,分别于前述各蛋白表达最强时间点和72h时在电镜下观察AMCC超微结构的变化,收集细胞上清用ELISA法测定肾上腺素（Ad）浓度,并用Western Blot法检测72h时各处理组细胞内RhoGDIa和peripherin的表达。结果AMCC中p-ERK、p-JNK和p-p38蛋白呈NGF诱导时间依赖性表达。其中p-ERK和p-JNK的表达在NGF刺激15min时达高峰,而p-p38则有15min和90min两个表达高峰。电镜结果显示,NGF刺激72h的AMCC胞浆中嗜铬颗粒明显较少,且聚集在细胞一侧,伴部分空泡样变的线粒体；p38抑制剂SB202190能抑制NGF对AMCC超微结构的影响,而ERK抑制剂PD98059和JNK抑制剂SP600125则不能抑制NGF对AMCC结构的影响。ELISA结果显示,与NGF组比较,三种抑制剂预处理后的细胞上清中Ad浓度在培养15min时无明显改变；而培养72h的结果显示,与NGF组（6.88±0.77）相比,PD+NGF组（4.65±0.36,P<0.01）上清中Ad浓度明显下降,SP+NGF组（6.23±0.54,P>0.05）上清中Ad浓度无明显改变,而SB+NGF组（8.02±0.67,P<0.01）上清中Ad浓度则升高。Western Blot结果显示,SB202190能遏阻NGF对RhoGDIa表达的抑制作用,而且还能抑制NGF诱导peripherin表达的作用,但PD98059和SP600125却无上述作用。结论NGF启动AMCC冗余性中RhoGDIa和peripherin的表达可能是通过p38/MAPK信号转导通路的介导得以实现。
汤莹[6]（2010）在《小豆蔻明基于mTOR作用靶标的研究》文中研究说明目的观察FK506结合蛋白12 （FK506 binding protein 12, FKBP12）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin, mTOR）基因转染人非小细胞肺癌A549细胞对增殖以及对40s核糖体蛋白s6激酶（70 kDa ribosomal protein s6 kinase, p70S6K）和白细胞介素-2（Interleukin, IL-2）的影响,并以小豆蔻明（Cardamonin, CAR）进行干预,检测]mTOR信号通路中信号分子及相关因子的表达,以明确CAR抑制细胞增殖的直接作用靶标。方法1构建真核表达载体RT-PCR扩增人平滑肌细胞FKBP12全长基因,构建pcDNA3.1/Hygro（+）-FKBP12真核表达载体；pcDNA3.0-mTOR真核表达质粒由美国印第安纳大学寿伟年教授惠赠。2鉴定重组质粒制备感受态细胞DH5a并分别转化pcDNA3.1/Hygro（+）-FKBP12、pcDNA3.0-mTOR重组质粒,培养扩增后以碱裂解法抽提质粒,经酶切法、PCR法及DNA测序法鉴定。3建立稳定转染细胞株（1）建立稳定转染细胞株应用脂质体转染方法将两种重组表达质粒分别转染人非小细胞肺癌A549细胞,并用潮霉素B （Hygromycin B）及G418筛选得到稳定转染细胞株。（2）检测基因表达产物Western blot方法对转染前后细胞中FKBP12、mTOR基因及其相关因子的表达进行鉴定。（3）测定转染细胞株生长曲线MTT方法测定FKBP12、mTOR蛋白过表达对人非小细胞肺癌A549细胞体外增殖的影响。4验证小豆蔻明作用机制（1）实验分组将转染细胞和非转染细胞分别给药后分为空白对照组（CG）,溶剂对照组（SG）, RAP组（RAPG, 10-7mol·L-1）,CAR1组（CARG1,3×10-5mol·L-1）,CAR2组（CARG2,10-6mol·L-1）。（2）细胞增殖测定采用MTT法比较转染前后药物对细胞增殖的影响。（3）靶标相关蛋白表达测定Western blot方法检测细胞P-mTOR、P-p70S6K1、FKBP12及IL-2的表达。结果1重组质粒构建及鉴定从DH5a提取的pcDNA3.1/Hygro（+）-FKBP12质粒浓度为379ng·μL-1, OD260/OD280为1.93; pcDNA3.0-mTOR质粒浓度为306ng·μL-1, OD260/OD280为1.89。双酶切、PCR鉴定可见目的基因片段,DNA测序亦证实其序列正确。2稳定转染细胞株建立（1）重组表达质粒pcDNA3.1/Hygro（+）-FKBP12和pcDNA3.0-mTOR分别转染A549细胞,经Hygromycin B （250μg·mL-1）和G418（300μg·mL-1）筛选得到稳定转染的A549-FKBP12细胞株及A549-mTOR细胞株。（2） FKBP12基因转染A549后,FKBP12及IL-2蛋白的表达明显增多（P<0.01,n=3）。mTOR基因转染A549后,mTOR、P-mTOR及P-p70S6K1蛋白表达上调（P<0.01,n=3）。（3）转染的A549细胞株体外增殖速率明显加快。3小豆蔻明作用机制验证（1）CAR对三种细胞株增殖的影响①RAP抑制A549-FKBP12及A549-mTOR转染细胞株增殖作用较正常A549细胞株强（分别为0.503±0.023 vs 0.426±0.056; 0.465±0.032 vs 0.426±0.056;P<0.01）。②CAR对A549-mTOR转染细胞株增殖的抑制较正常A549细胞株强（CAR1,CAR2分别为0.456±0.023 vs 0.363±0.054; 0.316±0.028 vs 0.266±0.512; P<0.01）,但对A549-FKBP12转染细胞株的增殖无影响。（2）CAR抑制细胞增殖的可能机制①RAP可抑制P-mTOR、P-p70S6K1、FKBP12及IL-2的表达及过表达（P<0.01）。②CAR干预后,仅对P-mTOR、P-p70S6K1蛋白表达及过表达有抑制作用（P<0.01）,而对FKBP12、IL-2蛋白表达及过表达无显着影响。结论1 mTOR基因、FKBP12基因转染A549细胞株体外增殖加速。2 CAR与RAP均可阻断mTOR-p70S6K1信号通路,抑制A549细胞增殖。3 CAR作用机制与mTOR直接相关,不依赖FKBP12的激活。
任展宏[7]（2008）在《Glu-Con G抑制小鼠吗啡诱导条件性位置偏爱以及对相关脑区细胞外信号调节激酶作用的研究》文中进行了进一步梳理1.目的阿片类药物成瘾是一种慢性复发性脑病，戒毒是当今世界面临的一个具有重要科学和社会意义的难题。现有的药物戒毒方法虽能减轻吸毒者的戒断反应，但顽固的心理（精神）依赖使得复吸率高达95％以上。研究表明，NMDA受体参与了阿片依赖的形成，因此针对NMDA受体研究防治阿片成瘾药物成为最近研究的热点。已证明，竞争性和非竞争性NMDA受体拮抗剂能够抑制吗啡、可卡因和苯丙胺诱导的位置偏爱效应。本研究利用视频跟踪-计算机自动分析条件性位置偏爱（Conditioned PlacePreference，CPP）实验系统，研究NMDA受体拮抗剂芋螺毒素Conantokin G的类似物[Glu3，4,7,10,14]-Conantokin G（Glu-Con G）对吗啡诱导小鼠CPP表达的影响，评价该类似物在干预吗啡精神依赖方面的药效；结合蛋白质印迹技术检测细胞外信号调节激酶1／2（Extracellular signal-regulated kinase1／2，ERK1／2）磷酸化改变情况，探讨Glu-Con G干预吗啡精神依赖可能的分子机制。2．材料和方法2．1实验动物清洁级成年雄性昆明种小鼠，体重18～22g。2．2主要药物及试剂盐酸吗啡注射液（沈阳第一制药厂）；[Glu3，4,7,10,14]-Conantokin G（Glu-Con G）（Sigma公司）；多克隆抗p-ERK1／2抗体（Cell Signal公司）；多克隆抗ERK1／2抗体（Cell Signal公司）；单克隆抗β-Actin抗体（Sigma公司）；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（北京博奥森生物技术有限公司）。2．3主要实验装置及软件视频跟踪一计算机自动分析CPP实验系统；BIO-RAD电泳及转膜装置；Rat／MiceTracking软件；Quantity-One软件；SPSS统计软件。2．4实验方法2．4．1 Glu-Con G对CPP表达的影响：成年雄性昆明小鼠d1、d3、d5、d7腹腔注射（i．p．）吗啡（5mg／kg）后放入白盒内自由活动50 min，d2、d4、d6、d8给予生理盐水后放置黑盒训练50 min。对照组小鼠均给予生理盐水，其它处理同吗啡组小鼠。Glu-Con G干预CPP表达组在实验的d9于CPP测试前半小时，侧脑室注射（i．c．V．）不同剂量的Glu-Con G（0、30、60、120pmol），给药容量为2μl／只，观察其对吗啡诱导CPP表达的干预作用。2．4．2蛋白质印迹技术检测ERK1／2磷酸化情况取海马（H）、前额叶皮质（PFC）和纹状体提取总蛋白，灌制SDS-PAGE凝胶（10％分离胶和5％积层胶），每孔30μg上样，70V恒压电泳后恒流300mA湿法电转膜。5％脱脂奶粉封闭3h后抗p-ERK1／2一抗（1：2000）4℃孵育过夜，TBST洗膜后放入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗（1：5000）室温孵育2h，显影、定影。再将膜放入洗膜缓冲液（Stripping buffer）中50℃水浴振摇30min，5％脱脂奶粉封闭3h后抗ERK1／2一抗（1：2000）4℃孵育过夜，洗膜后二抗（1：5000）孵育2h，显影、定影。再用TBST液快速洗膜，抗β-Actin一抗（1：2000），室温孵育2h，洗膜后抗Actin二抗室温孵育2h后显影、定影。2．5实验观察指标及统计分析条件性位置偏爱与蛋白质印迹检测结果均用均数士标准差表示。小鼠白盒停留时间（s）作为位置偏爱指标，用Kruskal-Wallis法进行组间差异的比较，然后进行多个样本均数间的多重比较。总运动距离作为运动活性指标，穿梭次数、总中心徘徊距离、总中心停留时间、白盒中心徘徊距离、白盒中心停留时间作为探索活动指标，方差齐者用方差分析进行组间差异的比较，并用LSD法进行多个样本均数的两两比较，方差不齐者用Kruskal-Wallis法进行组间差异的比较，然后进行多个样本均数间的多重比较。P<0．05视为有统计学差异。对位置偏爱、运动活性、探索活动等指标，用偏相关分析检验指标之间的两两相关性。P<0．05视为有统计学差异。Western blot胶片用GS-800扫描仪扫描入计算机，用Bio-rad quantity one densitomonter图像分析软件计算每张胶片中各条带的调整后相对灰度与条带面积的乘积，以相应条带的内参Actin的平均灰度做标准，计算ERK1／2和p-ERK1／2各条带的相对比值，以对照组的相对比值作为100％，进行归一化处理后半定量分析。P<0．05视为有统计学差异。3．结果3．1吗啡诱导的条件性位置偏爱模型的建立连续三天的天然偏爱结果显示：小鼠在黑盒停留时间（s）较白盒长（第一天黑盒和白盒停留时间分别为489．9±147．0s和410．1±147．0s，P<0．05；第二天黑盒和白盒停留时间分别为520．7±120．9s和379．3±120．9s，P<0．05；第三天黑盒和白盒停留时间分别为520．5±128．3s和379．5±128．3s，P<0．05）。经过8天条件化训练后，5mg／kg吗啡组小鼠在白盒停留时间显着长于生理盐水对照组（分别为606．8±127．3s和313．8±181．2s，P<0．05）。3．2 Glu-Con G对吗啡诱导的CPP表达的影响吗啡诱导的CPP表达阶段，芋螺毒素类似物Glu-Con G处理组（0、30、60、120 pmol）同吗啡组白盒停留时间（606．8±127．3s）相比，呈剂量相关性减少（0pmol组白盒停留时间为565．4±273．3s，P=0．916；30pmol组白盒停留时间为534．3±101．8s，P=0．093；60pmol组白盒停留时间为426．1±123．9s，P=0．016；120pmol组白盒停留时间为378．1±250．9s，P=0．046）。反映运动活性的总运动距离以及反映探索活性的穿梭次数、总中心徘徊距离、总中心停留时间、白盒中心徘徊距离和白盒中心停留时间各组间比较无显着差别（P>0．05）。3．3各指标间相关性分析指标间的偏相关分析结果表明：代表位置偏爱指标的白盒停留时间与代表探索活性的白盒中心停留时间（r=0．452，P<0．05）存在相关性；代表运动活性指标的总运动距离与穿梭次数（r=0．439，P<0．05）、总中心徘徊距离（r=0．574，P<0．05）、白盒中心徘徊距离（r=0．501，P<0．05）之间存在相关性；反映探索活性的5个指标之间，穿梭次数与总中心徘徊距离（r=0．505，P<0．05）、总中心停留时间（r=0．274，P<0．05）、白盒中心徘徊距离（r=0．454，P<0．05）之间存在相关关系，而与白盒中心停留时间（r=0．191，P=0．132）无相关关系；总中心徘徊距离与总中心停留时间（r=0．718，P<0．05）、白盒中心徘徊距离（r=0．827，P<0．05）、白盒中心停留时间（r=0．403，P<0．05）之间存在相关关系；总中心停留时间与白盒中心徘徊距离（r=0．679，P<0．05）、白盒中心停留时间（r=0．801，P<0．05）之间存在相关关系；白盒中心徘徊距离与白盒中心停留时间（r=0．641，P<0．05）之间存在相关关系。3．4 ERK1／2和p-ERK1／2在Glu-Con G干预吗啡诱导CPP表达前后的变化PFC、HP以及纹状体脑区中ERK1／2表达在各处理组之间未见差别（P>0．05）；吗啡组的PFC、HP以及纹状体脑区p-ERK1／2蛋白增多，均明显高于对照组（P<0．05），同吗啡组相比，30、60和120pmol Glu-Con G干预组和盐水组HP以及纹状体脑区中p-ERK1／2蛋白减少（P<0．05），60和120pmol Glu-Con G干预组和盐水组PFC脑区中p-ERK1／2蛋白减少（P<0．05）。4．结论1．小鼠天然偏爱黑盒，5mg／kg吗啡可以成功建立小鼠对白盒的条件性位置偏爱；2．Glu-Con G剂量相关性抑制吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱表达，其有效剂量范围在30～60pmol（相当于0．0015～0．003mg／kg），所用剂量的Glu-Con G并不引起小鼠运动活性和探索活性异常；3．吗啡可以使海马、前额叶皮质和纹状体脑区的p-ERK1／2水平增加，但不影响ERK1／2的表达；4．Glu-Con G可以呈现剂量相关性减少吗啡诱导海马、前额叶皮质和纹状体脑区p-ERK1／2，为证明NMDA受体和ERK1／2参与吗啡成瘾提供了更多的实验依据。
朱贵勤,王济平,景传博,车鸣,尹承香[8]（2002）在《内置编码X-线摄影暗匣的临床应用》文中认为本文提供了一种实用新型内置编码X -线摄影暗匣 ,由匣体、日期编码组、流水号编码组构成 ,在匣体的边部开有编码条插槽 ,由编码插条组成的日期编码组和流水号编码组设置在编码条插槽之中。本实用新型的内置编码X -线摄影暗匣和现有技术相比 ,具有设计合理、结构简单、取材方便、易于加工、体积小、操作简便等特点 ,尤其是在插入暗匣空间有限的进口X -线机上使用 ,更显其优势。
孙劲旅[9]（2002）在《户尘螨过敏原实验研究》文中指出尘螨是最重要吸入物过敏原之一，尘螨过敏反应的发病率不断增加，日益受到人们重视。尘螨过敏可表现为过敏性鼻炎、过敏性哮喘和过敏性皮肤疾患。尘螨的过敏反应可发生在各个年龄阶段，并且在婴幼儿过敏性哮喘中尘螨是最主要的过敏原。因此，有关尘螨的研究一直是变态反应学科的研究热点。 目前，国内培养的螨多为混合螨，为保证本研究的可靠性和重复性必须应用高纯度的户尘螨螨体原料。本研究纯种户尘螨螨体购自于Allergon公司，采用Coca’s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后，在蛋白质的回收率方面进行比较，结果为：C0：C1：L：T=5.7：6.3：9：8；即回收率：裂解液＞Trizol法＞Coc a’s液。在蛋白质浓度检测方法中，本研究率先使用了二喹啉甲酸（BCA）法检测蛋白浓度取得了较好结果。 应用Coc a’s液、裂解液及Trizol法提取纯种户尘螨螨体蛋白后，经过双向电泳，实验结果为：Coca’s液提取的蛋白仅仅有少量低分子量的蛋白点：用裂解液提取的蛋白可见明显增多低分子量的蛋白点，但无中分子量的蛋白点；Trizol法提取的蛋白可见中分子量的蛋白点如174-178Kd和133.0Kd的蛋白质。结合蛋白质浓度测定我们发现：使用Coca’s液提取的尘螨蛋白质浓度低，蛋白点少。使用裂解液提取的尘螨蛋白质浓度虽然较高，但是没有中分子量的蛋白点，不能全面反映尘螨的过敏原。使用Trizol法提取的蛋白质浓度中等，有中分子量蛋白点，反映的蛋白点更加全面。 纯种户尘螨螨体经Trizol液提取后进行双向电泳，在考染和银染时出现6个特征性的蛋白点，二个为位置彼此孤立的酸性蛋白，其中一个酸性蛋白（2D31点）的等电点（pI）和分子量（MW）（以下pI和MW表示方法相同）分别为4.4和133.0Kd；另一个为（2D161点）4.81和35.4Kd。另有4个位置彼此非常接近的中性蛋白，分别为（2D107点）7.2和49.5Kd、（2D 116点）7.2和46.4Kd、（2D105点）6.9和50.2Kd、（2D 114点）6.9和47.0Kd。并且，在十二次的双向电泳中均发现这6个位置和形态独特的蛋白点，这些特征性的蛋白点可能为此种纯种户尘螨螨体在双向电泳时比较特征性的图谱，作为一种双向电泳的指纹图谱，在鉴定
二、内置编码X-线摄影暗匣的临床应用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、内置编码X-线摄影暗匣的临床应用（论文提纲范文）
（1）HBx降解SAMHD1通过Akt/p27通路促进肝癌细胞增殖的机制研究（论文提纲范文）
| 符号说明 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 SAMHD1对HBV感染的肝癌细胞影响及机制研究 |
| 第一节 材料和方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 小结 |
| 第二章 HBx调控SAMHD1 的分子机制研究 |
| 第一节 材料和方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 泛素-蛋白酶体系统在乙型肝炎病毒感染中发挥的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
（2）白介素37在支气管哮喘中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 IL-37在人外周血单个核细胞中的表达 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1.研究对象 |
| 2.主要仪器设备 |
| 3.主要试剂 |
| 4.研究方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 哮喘小鼠模型的构建和处理 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| 1.哮喘模型小鼠行为学改变 |
| 2.各组小鼠BALF白细胞分类计数 |
| 3.小鼠气道高反应性变化 |
| 4.肺组织病理形态学改变 |
| 5.免疫组化检测IL-37相关受体的表达 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第三部分 哮喘小鼠肺组织蛋白芯片分析 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1.GSM-CAA-4000试剂盒 |
| 2.样品 |
| 3.实验步骤 |
| 4.数据分析方法 |
| 三、结果 |
| 1.差异表达蛋白(Differential expression proteins,DEPs) |
| 2.差异蛋白检查结果 |
| 3.基因本体分析(gene ontology analysis,GO)和京都基因和基因组百科全书(KyotoEncyclopedia of Gene and Genomes,KEGG)信号通路分析 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第四部分 IL-37处理后的差异表达趋化因子验证研究 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1.研究对象: 同第一部分 |
| 2.主要仪器设备 |
| 3.主要试剂 |
| 4.研究方法 |
| 三、结果 |
| 1.PBMCs提供者基本信息 |
| 2.rhIL-37处理患者PBMCs后趋化因子表达变化 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第五部分 上皮细胞系BEAS-2B中IL-37调控趋化因子CXCL13分泌机制研究 |
| 一、研究背景 |
| 二、材料与方法 |
| 1.主要仪器和设备 |
| 2.材料与试剂 |
| 3.研究方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 参考文献 |
| 附录: 缩略词表 |
| 致谢 |
| 文献综述 白介素37的抗炎作用机制及其在哮喘中的研究进展 |
| 参考文献 |
（3）CXCR4通过激活JAK/STAT/GSK3β/β-catenin通路促进肾脏纤维化（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 肾脏疾病患者的肾活检组织 |
| 1.1.2 实验动物 |
| 1.1.3 实验细胞株 |
| 1.2 主要实验设备仪器及耗材 |
| 1.2.1 主要实验设备仪器 |
| 1.2.2 主要实验耗材 |
| 1.3 主要实验试剂及配制方法 |
| 1.3.1 主要实验试剂 |
| 1.3.2 主要实验试剂配制方法 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.4.1 肾病患者肾活检组织石蜡切片的免疫组化染色 |
| 1.4.2 动物实验方法 |
| 1.4.3 细胞实验方法 |
| 1.5 统计学分析 |
| 第二部分 结果 |
| 2.1 CXCR4在纤维化肾脏中表达上调,并伴随着β-catenin的激活 |
| 2.2 阻断CXCR4可减轻UUO诱导的肾脏纤维化 |
| 2.3 阻断CXCR4可抑制UUO诱导的β-catenin信号激活 |
| 2.4 阻断CXCR4可减轻UIRI诱导的肾脏纤维化 |
| 2.5 阻断CXCR4可抑制UIRI诱导的β-catenin信号激活 |
| 2.6 抑制β-catenin可减轻UUO模型中因CXCR4过表达而加重的肾脏纤维化、肾小管损伤 |
| 2.7 体外CXCR4/β-catenin轴在肾小管细胞损伤及纤维化中扮演重要角色 |
| 2.8 体外JAK/STAT信号介导β-catenin激活参与CXCR4信号转导 |
| 2.9 体内阻断CXCR4抑制JAK/STAT的信号转导 |
| 2.10 体内沉默CXCR4阻断JAK/STAT/GSK3β/β-catenin通路及改善肾脏纤维化 |
| 第三部分 讨论 |
| 参考文献 |
| 缩略语词汇表 |
| 攻读学位期间成果 |
| 致谢 |
（4）PKCγ调控神经病理性疼痛的蛋白质组学研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写注解 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 第一章 pGCSIL-shPKCγ-GFP/U6重组慢病毒载体的构建、鉴定、包装及其体外转染大鼠神经元 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 结论 |
| 第二章 鞘内注射慢病毒载体介导PKCγ基因RNA干扰对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第三章 应用RNA干扰和蛋白质组学技术筛选鉴定PKCγ调控神经病理性疼痛的相关蛋白质 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 全文总结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 |
（5）RhoGDIα和peripherin参与MAPK信号通路介导NGF启动肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 NGF调节AMCC和哮喘大鼠肾上腺髓质组织中RhoGDIα和peripherin的表达 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 附图 |
| 第二章 MAPK信号通路介导NGF启动肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性中RhoGDIα和peripherin的表达 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的主要研究成果 |
（6）小豆蔻明基于mTOR作用靶标的研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 FKBP12及mTOR真核表达载体稳定转染A549细胞株的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 小豆蔻明抑制A549细胞增殖作用靶标的研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 已发表文章 |
（7）Glu-Con G抑制小鼠吗啡诱导条件性位置偏爱以及对相关脑区细胞外信号调节激酶作用的研究（论文提纲范文）
| 1.中文摘要 |
| 2.英文摘要 |
| 3.论文:Glu-Con G抑制小鼠吗啡诱导条件性位置偏爱以及对相关脑区细胞外信号调节激酶作用的研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 4.综述:芋螺毒素conantokin的药理作用及构效关系研究进展 |
| 5.致谢 |
（8）内置编码X-线摄影暗匣的临床应用（论文提纲范文）
| 1 结构与制作 |
| 2 适用范围 |
| 3 临床资料 |
| 4 优点 |
（9）户尘螨过敏原实验研究（论文提纲范文）
| 论文部分 |
| 前言 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分：标准血清池的建立 |
| 第二部分：户尘螨蛋白的提取 |
| 第三部分：户尘螨蛋白的双向电泳 |
| 第四部分：户尘螨蛋白的双向免疫印迹 |
| 第五部分：户尘螨蛋白RAST抑制实验 |
| 小结 |
| 英文缩写词 |
| 参考文献 |
| 综述部分 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附件： |
| 1、Allergon公司纯种户尘螨螨体产品质量鉴定报告 |
| 2、Sigma公司鼠抗人IgE产品说明书 |
| 3、过敏原的命名法 |
| 致谢 |
四、内置编码X-线摄影暗匣的临床应用（论文参考文献）
- [1]HBx降解SAMHD1通过Akt/p27通路促进肝癌细胞增殖的机制研究[D]. 郑小川. 重庆医科大学, 2021(01)
- [2]白介素37在支气管哮喘中的作用及其机制研究[D]. 高胜男. 北京协和医学院, 2021(02)
- [3]CXCR4通过激活JAK/STAT/GSK3β/β-catenin通路促进肾脏纤维化[D]. 刘亚红. 南方医科大学, 2020(01)
- [4]PKCγ调控神经病理性疼痛的蛋白质组学研究[D]. 邹望远. 中南大学, 2011(12)
- [5]RhoGDIα和peripherin参与MAPK信号通路介导NGF启动肾上腺髓质嗜铬细胞冗余性[D]. 聂华萍. 中南大学, 2010(11)
- [6]小豆蔻明基于mTOR作用靶标的研究[D]. 汤莹. 福建医科大学, 2010(02)
- [7]Glu-Con G抑制小鼠吗啡诱导条件性位置偏爱以及对相关脑区细胞外信号调节激酶作用的研究[D]. 任展宏. 浙江大学, 2008(10)
- [8]内置编码X-线摄影暗匣的临床应用[J]. 朱贵勤,王济平,景传博,车鸣,尹承香. 医疗设备信息, 2002(12)
- [9]户尘螨过敏原实验研究[D]. 孙劲旅. 中国协和医科大学, 2002(11)