一、Role of genetic abnormalities of PTEN and the phosphatidylinositol 3kinase pathway in breast and ovarian cancer tumorigenesis,prognosis and therapy（论文文献综述）
文婷婷[1]（2021）在《安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展》文中提出本研究将人非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（A549和H460）以及A549细胞异种移植裸鼠模型作为研究对象,研究安五脂素（Anwuligan,ANW）对NSCLC生物学功能产生的影响和其发挥作用的具体分子机制,阐明其在NSCLC治疗中的重要性,重点研究了ANW对NSCLC细胞中let-7c-3p和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响,及抑制let-7c-3p表达对于ANW抗NSCLC作用中的影响。本实验共分为3个部分:1、ANW抑制NSCLC细胞生长和转移本研究首先通过CCK-8实验检测到低于50μM的ANW对于正常肺细胞系（Beas 2B和MRC-5）无明显毒性,说明低于50μM浓度的ANW对于正常肺细胞来说是安全的。因此本研究将不同ANW（DMSO（control）、0μM（vehicle）、5μM、20μM、50μM）处理的A549和H460细胞分成五组进行实验,首先经CCK-8比色实验证实ANW处理24h即可杀伤NSCLC细胞,并且浓度越高,杀伤能力越强,说明ANW（≤50μM）对于NSCLC细胞具有选择性杀伤作用。并且进一步经Edu实验、成克隆实验以及流式细胞术细胞周期检测（PI染色）发现ANW可明显抑制NSCLC细胞系（A549和H460）的存活和增殖能力,且为浓度依赖性;划痕实验及transwell实验的结果显示20μM的ANW即可显着抑制NSCLC细胞系（A549和H460）的转移和侵袭能力,且呈浓度依赖性,收集ANW处理24h后的5组细胞进行western blot检测,结果表明ANW可减弱TGF-β诱导EMT相关标志蛋白的表达的影响,说明ANW可以延缓NSCLC的进展;顺铂是常见的肿瘤化疗药物,但其临床应用受到耐药性和毒性的限制。CCK-8比色法显示中浓度（20μM）ANW即可显着增强顺铂的抗NSCLC生长能力,细胞流式仪（AV/PI双染）检测细胞凋亡发现20μM的ANW与顺铂联合处理诱导A549和H460细胞凋亡的能力明显强于二者单独处理,收集细胞进行western blot检测,结果显示联合处理后凋亡相关蛋白（caspase3/7/9）活化也相对增强,这些结果表明ANW和顺铂联合用药可增强抗NSCLC作用。综上,ANW对NSCLC细胞的生长和转移具有明显的抑制作用,具有成为一种新的抗癌药物成分的潜力,值得进一步研究。2、ANW上调NSCLC细胞中的let-7c-3p的表达本研究在第一部分明确了ANW对NSCLC细胞的抑制作用,接下来对其作用机制进行了探究。先通过Deep Sequencing技术检测到经ANW（50μM）处理24h后A549细胞中多种mi RNA表达发生变化,其中22种mi RNAs水平变化最为明显,8种上调,14种下调,尤以let-7c-3p升高最为明显,并经q RT-PCR进一步明确ANW处理后A549和H460中let-7c-3p表达增加;本研究通过生信分析结果发现let-7c-3p主要与3-磷酸肌醇生物合成相关。众所周知,PI3K是一种胞内磷脂酰肌醇激酶,PI3K/AKT/mTOR信号通路在调节细胞周期,增殖,凋亡和自噬中起重要作用,western blot结果显示ANW（分3组:0、20、50μM）处理后,20μM和50μM的ANW可抑制A549和H460细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的磷酸化,说明ANW可调控NSCLC细胞中的PI3K/AKT/mTOR信号通路。PIK3CA是PI3K的催化亚单位,对维持PI3K的结构与功能具有重大作用。本研究预测分析PIK3CA 3’UTR序列可能是let-7c-3p的靶基因,通过双荧光酶基因报告系统检测发现let-7c-3p mimic可显着抑制PIK3CA3’UTR序列荧光素酶活性,对PIK3CA 3’UTR的突变序列无影响,此外,scramble对PIK3CA 3’UTR序列的荧光素酶活性无影响,说明let-7c-3p的确可以与PIK3CA 3’UTR序列结合,并且进一步通过q RT-PCR、western blot检测发现let-7c-3p可以直接抑制PIK3CA表达。重要的是,本研究构建并获取了携带PIK3CA基因的慢病毒,根据不同的转染物质以及慢病毒感染情况,分别将A549和H460细胞分成四组:mimic NC、let-7c-3p mimic、let-7c-3p mimic+vector和let-7c-3p+PIK3CA,通过western blot检测发现let-7c-3p+PIK3CA可以减弱let-7c-3p对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达的抑制作用。为了研究let-7c-3p在NSCLC细胞中的生物学功能,我们将let-7c-3p mimic、scramble转染到A549和H460细胞中,外加空对照（control组）,进行克隆形成实验、Edu荧光检测,证实过表达let-7c-3p可以抑制A549细胞和H460细胞的生长,并且通过划痕实验和transwell实验证明过表达let-7c-3p可以抑制A549细胞和H460细胞的侵袭和转移。综上,本部分研究发现ANW处理A549和H460细胞后可上调let-7c-3p,并且let-7c-3p的靶基因为PIK3CA 3’UTR序列,可调控PI3K/AKT/mTOR信号通路,过表达let-7c-3p可抑制NSCLC的发生和发展。3、let-7c-3p是ANW发挥抗NSCLC作用的必须靶点那么let-7c-3p是否是ANW发挥抗癌作用所必须的呢?在这部分的研究中,我们将let-7c-3p inhibitor及inhibitor NC分别转染到A549和H460细胞中,以此分为两组:inhibitor组和inhibitor NC组。随后用ANW（50μM）处理细胞,进行实验。在第一部分实验研究中,我们证实ANW对NSCLC细胞具有抑制生长、转移、侵袭以及促凋亡的作用。因此本部分研究首先通过CCK-8比色法实验、成克隆实验、Edu实验、细胞周期检测证实抑制let-7c-3p可减弱ANW对NSCLC细胞存活和增殖能力的抑制作用。接着通过划痕实验和Transwell实验证实抑制let-7c-3p可减弱ANW对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的抑制作用。最后通过细胞流式实验（AV/PI双染）检测两组细胞凋亡的数量,结果显示抑制let-7c-3p表达可减弱ANW对NSCLC促凋亡作用。收集两组细胞后进行western blot检测,结果显示抑制let-7c-3p表达后,可以逆转ANW对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白磷酸化水平的影响,并且抑制let-7c-3p表达,可以减弱ANW对凋亡相关蛋白caspase3/7/9以及对EMT相关标志蛋白的影响。本研究还建立了A549细胞的裸鼠异种移植模型,按照对裸鼠进行腹腔注射及瘤内注射不同药物,将其分为四组:control组、ANW组、ANW+inhibitor NC组和ANW+let-7c-3p inhibitor组,裸鼠肿瘤体积监测及肿瘤称重结果显示,与control组相比,ANW处理能有效地抑制肿瘤生长,而抑制let-7c-3p表达可消除ANW对NSCLC的抑制作用（P<0.01）,即本研究进一步通过体内实验证实了ANW通过上调let-7c-3p发挥抗肿瘤作用,即let-7c-3p是ANW作用NSCLC的靶标。并且对安乐死后裸鼠的肝、肾、心的切片进行HE染色后分析表明ANW对于正常组织细胞无明显毒性,说明作用于机体是较为安全的。综上,本部分研究通过体内和体外实验证实了let-7c-3p在ANW抑制NSCLC发生发展过程中的重要作用,为抗NSCLC的研究提供了新靶标,为NSCLC的治疗提供了新思路。
李红娜[2]（2021）在《GPR35基因调控PI3K/AKt/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖的研究》文中研究说明目的:从分子学探讨G蛋白偶联受体35（G Protein-Coupled Receptor 35,GPR35）调控磷酸肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响,以及GPR35基因上调引起肿瘤坏死因子受体相关蛋白1蛋白表达变化对乳腺癌发病机制的研究。方法:首先培养乳腺癌细胞（MDA-MB-231）,采用基因修饰方法构建研究所用的过表达GPR35细胞模型,采用Western blot和免疫荧光检测乳腺癌细胞中GPR35的表达;采用MTT方法检测过表达GPR35后乳腺癌细胞增殖率的变化。采用qPCR方法检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中PI3K、AKt1、AKt3、mTOR、TRAP1mRNA的表达水平;采用Western blot验证基因的表达,检测调控信号通路蛋白PI3K、总AKt、总mTOR的表达以及TRAP1蛋白的表达,进一步检测过表达GPR35后乳腺癌细胞中p-PI3K、p-AKt、p-mTOR蛋白的表达水平。结果:Western blot方法检测乳腺癌细胞中过表达GPR35a组和过表达GPR35b组中GPR35蛋白的表达水平均高于正常组（p<0.05）,其中过表达GPR35b组GPR35蛋白的表达水平高于过表达GPR35a组（p<0.05）;细胞免疫荧光染色实验方法确定GPR35主要定位于胞浆中,与正常组作对比,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组乳腺癌细胞中GPR35蛋白（绿色）的表达明显增加;MTT方法检测乳腺癌细胞增殖实验表明,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组乳腺癌细胞的增殖率明显高于正常组（p<0.05）,其中过表达GPR35b组乳腺癌细胞的增殖率高于过表达GPR35a组（p<0.05）;qPCR实验检测乳腺癌细胞中PI3K、AKt1、AKt3、mTOR基因的表达水平,正常组、过表达GPR35a组和过表达GPR35b组三组间两两比较均无明显变化（p>0.05）;qPCR实验检测乳腺癌细胞中TRAP1 mRNA的表达水平,过表达GPR35a组和过表达GPR35b组TRAP1 mRNA的表达水平均高于正常组（p<0.05）,其中过表达GPR35a组TRAP1 mRNA的表达水平高于过表达GPR35b组（p<0.05）;Western blot方法检测乳腺癌细胞中PI3K、总AKt、总mTOR蛋白的表达水平,正常组、过表达GPR35a组和过表达GPR35b组三组间两两比较均无明显变化（p>0.05）,与基因表达水平一致;而过表达GPR35a组和过表达GPR35b组p-PI3K、p-AKt、p-mTOR、TRAP1蛋白的表达水平均高于正常组（p<0.05）,并且过表达GPR35b组p-PI3K、p-AKt、p-mTOR、TRAP1蛋白的表达水平均高于过表达GPR35a组（p<0.05）。结论:（1）GPR35过表达能促进乳腺癌细胞（MDA-MB-231）的增殖,与乳腺癌的发生、发展密切相关。（2）GPR35通过磷酸化激活PI3K/AKt/mTOR信号通路,上调TRAP1 mRNA和蛋白表达,促进乳腺癌细胞的增殖。
周凌智[3]（2021）在《EphA2、Ephrin A1在乳腺癌组织的表达及意义》文中研究指明目的:研究乳腺癌组织中Eph A2、Ephrin A1表达情况。方法:1、筛选大理大学第一附属医院2013-2018年乳腺癌根治或改良根治术且术前未经新辅助治疗的存档女性标本250例,年龄26-74岁,其中≤45者88例,>45岁者162例;肿瘤大小<5cm者153例,≥5cm者97例;浸润性导管癌216例,其他（包括导管内癌,粘液癌,浸润性小液癌等）34例;有淋巴转移162例,无淋巴转移的有88例;TNM分期一期25例,二期118例,三-四期107例;组织学分级一级33例,二级148例,三级69例;2、用免疫组化（IHC）检测250例乳腺癌组织中Eph A2、Ephrin A1蛋白表达;3、用原位杂交（ISH）检测Eph A2、Ephrin A1 m RNA表达;4、间接免疫荧光法（IFA）检测Eph A2、Ephrin A1表达。采用χ2检验进行相关性分析。结果:250例乳腺癌病理标本中Eph A2、Ephrin A1蛋白阳性率分为74.80%、71.60%;Eph A2、Ephrin A1 m RNA阳性率分为83.60%、72.80%,并且均与临床分期、淋巴结转移、组织学分级相关（p<0.05）。IFA检测显示在乳腺癌细胞中Eph A2、Ephrin A1高表达。结论:Eph A2、Ephrin A1可能与乳腺癌发生发展有关,有望成为乳腺癌防治的新指标。
周雪梅[4]（2021）在《TGF-β1、p-AKT在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系》文中研究表明目的:分析TGF-β1、p-AKT、E-cadherin、Vimentin在乳腺癌中的表达及其相互关系,探讨乳腺癌中TGF-β1、p-AKT与上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的关系。方法:收集2012年09月至2014年12月蚌埠医学院第一附属医院病理科保存完整的132例乳腺癌组织蜡块及相应的癌旁正常组织蜡块,通过免疫组织化学染色方法检测TGF-β1、p-AKT、及EMT相关因子E-cadherin、Vimentin在组织中的表达情况,并结合收集的临床病例资料,利用SPSS25.0统计学软件分析得到数据。结果:（1）所选病例TGF-β1、p-AKT、Vimentin在乳腺癌组织中的阳性表达率（53.8%、50.0%、49.2%）均高于癌旁正常组织（14.4%、13.6%、6.1%）,P<0.05;E-cadherin在癌组织中的表达强度低于癌旁组织,P<0.05。（2）在乳腺癌组织中TGF-β1与E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.485,P<0.001）,与Vimentin的表达呈正相关（r=0.446,P<0.001）;p-AKT与E-cadherin的表达呈负相关（r=-0.561,P<0.001）,与Vimentin的表达呈正相关（r=0.516,P<0.001）;TGF-β1与p-AKT的表达呈正相关（r=0.441,P<0.001）;E-cadherin与Vimentin的表达呈负相关（r=-0.472,P<0.001）。（3）TGF-β1、p-AKT、E-cadherin、Vimentin的表达水平与乳腺癌患者的年龄无关（P>0.05）,与患者的肿瘤直径、病理学分级、淋巴结转移与否及TNM分期等显着相关（P<0.05）。（4）生存分析结果显示TGF-β1、p-AKT、E-cadherin、Vimentin的表达水平、肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期均与乳腺癌的预后相关,并且都是乳腺癌的独立危险因素。结论：（1）TGF-β1、p-AKT、E-cadherin、Vimentin均参与了肿瘤的发展过程,并提示乳腺癌中存在EMT。（2）TGF-β1、p-AKT可能协同诱导EMT,TGF-β1可能通过PI3K/AKT信号传导通路诱导EMT的发生,促进乳腺癌的侵袭、转移。（3）TGF-β1、p-AKT、E-cadherin、Vimentin的表达与乳腺癌的预后显着相关,对乳腺癌的预后判断有一定的价值。
赵彬[5]（2021）在《基于条件重编程细胞培养的三阴性乳腺癌敏感药物筛选的研究》文中指出目的:乳腺癌是女性中最常见的恶性肿瘤,三阴性乳腺癌是指ER、PR及HER-2表达均为阴性的乳腺癌。与其他类型的乳腺癌相比,三阴性乳腺癌进展快,侵袭性强,容易复发和转移。目前三阴性乳腺癌术后的辅助治疗手段比较单一,缺乏特异性的治疗靶点,亟需寻找个体化的、有效的治疗靶点。条件重编程细胞模型是一种可在不转入外源基因的情况下诱导体细胞的无限增殖的细胞模型,具有培养成功率高,成本低,与原肿瘤一致性强的优点,具有用于个体化肿瘤药敏预测的潜力。本研究中,我们构建了三阴性乳腺癌的条件重编程细胞模型,并使用该模型进行了高通量敏感药物筛选实验,以探索条件重编程细胞药敏试验在三阴性乳腺癌的个体化治疗中的应用。方法:（1）前瞻性收集2019年3月1日至2020年3月1日就诊于中国医学科学院北京协和医院乳腺外科、确诊为乳腺癌并拟行手术治疗的乳腺癌病例信息。术中留取肿瘤组织及配对正常乳腺组织的标本并培养条件重编程细胞。选择病理证实的三阴性乳腺癌条件重编程细胞传代扩增。（2）通过全外显子测序和转录组测序检测条件重编程三阴性乳腺癌细胞及原肿瘤组织的DNA突变谱和转录组表达谱,对比条件重编程细胞与原肿瘤组织在常见突变基因位点的一致性,通过Pearson相关性分析检验条件重编程细胞与原肿瘤组织转录组表达谱的一致性。（3）使用高通量药敏试验检测上述细胞对110种药物的敏感性,分别构建剂量-效应曲线,计算药物敏感性评分（DSS）,并根据DSS评分寻找每株条件重编程细胞的敏感药物。使用RRA算法整合DSS评分,得到反应药物有效性的综合药物排序。（4）检索外显子测序结果中与相关药物敏感性相关的基因,并与药敏结果进行比对。通过基因集变异分析（GSVA）计算经典通路或重要基因集的活化程度评分,通过Pearson相关性分析检验各通路GSVA评分与条件重编程细胞药物敏感性DSS评分的关联。（5）获取GEO数据库和TCGA数据库中三阴性乳腺癌的高通量mRNA芯片数据和转录组测序数据,通过差异基因筛选、差异基因富集分析以及Kaplan-Meier生存分析寻找三阴性乳腺癌预后生物标记;通过GSVA分析和Kaplan-Meier生存分析寻找与三阴性乳腺癌患者预后显着相关的生物通路。结果:（1）成功构建了 6株条件重编程三阴性乳腺癌细胞和6株配对正常乳腺组织的条件重编程细胞。条件重编程三阴性乳腺癌细胞和原肿瘤组织的DNA突变谱相似,二者的转录组基因表达也具有较强的相关性（R=0.855）。（2）PF-04691502,一种PI3K/Akt和mTOR双靶点抑制剂是RRA综合药物敏感性评分最佳的药物,而其他排名前十位的药物中,有2种mTOR抑制剂,2种Akt靶向药物,1种Syk（脾酪氨酸激酶）抑制剂,1种拓扑异构酶抑制剂,1种EGFR抑制剂,1种植物来源的小分子药物（重楼皂苷VI）。mTOR抑制剂西罗莫司、替西罗莫司、利罗莫司和Torin1的DSS评分具有较高的相关性（R=0.82～0.97）。EGFR靶向药物阿法替尼、吉非替尼、拉帕替尼的DSS评分具有较高的相关性（R=0.61～0.93）。（3）条件重编程细胞转录组中PI3K-Akt通路的GSVA评分与Ipatasertib的DSS评分显着相关（R=0.587,P=0.045）。mTOR通路的GSVA评分与Torin 1的DSS评分显着相关（R=0.62,P=0.030）。EGF通路的GSVA评分与吉非替尼的DSS评分具有显着相关性（R=0.60,P=0.039）。（4）我们进一步通过GEO和TCGA数据分析了 GSVA评分与三阴性乳腺癌患者预后的关系,发现Akt1/mTOR信号通路、HIF信号通路、VEGF信号通路和脂肪合成相关通路的GSVA评分升高与三阴性乳腺癌患者的较短的总体生存期相关（P<0.05）。T细胞抗原受体信号通路GSVA高评分或抗原加工和呈递通路GSVA评分较高的患者总体生存期较长（P<0.05）。结论:（1）本研究培养的6株条件重编程三阴性乳腺癌细胞与原肿瘤组织具有较高的一致性,可以作为个体化肿瘤模型用于三阴性乳腺癌发病机制研究和药敏试验。（2）条件重编细胞药敏试验结果较稳定,可以用于三阴性乳腺癌药物敏感性预测。本研究中的条件重编程三阴性乳腺癌细胞对靶向PI3K-Akt、mTOR、EGFR、Syk通路的药物以及拓扑异构酶Ⅱ抑制剂比较敏感。（3）条件重编程细胞转录组数据中PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA评分与针对相应通路的靶向药物的有效性成正相关,三阴性乳腺癌肿瘤组织中转录组PI3K-Akt和mTOR等通路的GSVA评分与三阴性乳腺癌患者总体生存显着相关,因而GSVA评分也可以用于三阴性乳腺癌的药物敏感性预测以及患者预后的评价。
陈雪[6]（2021）在《基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨固正消癌方调节PTEN治疗大肠癌的作用机制》文中认为研究目的:本团队在前期临床实验中已发现固正消癌方在提升大肠癌患者的生存质量、改善患者功能状态以及缓解患者病痛等方面发挥出极大优势,在较好的疗效基础上,本实验利用生物分子学技术,观察固正消癌方对PI3K/AKT/mTOR信号通路以及PTEN的影响,为固正消癌方治疗肠癌,抑制癌细胞的转移增殖提供更直面客观的理论依据,为制定大肠癌的诊疗共识提供新视点。研究内容:1.采用江苏省中医院病理科提供的2018-2019年间的20对病理组织（结直肠癌组织及相应癌旁组织各20例）和2020年6月1日一10月31日五个月内于我院肛肠科行肠癌手术后留存的标本组织5对（结直肠癌组织以及相应癌旁组织各5例）,分别应用免疫组化方法以及q-PCR技术检测PTEN、PI3K、AKT、mTOR蛋白分子在各样本组织和标本组织中的含量,统计各蛋白因子在结直肠癌组织及相应癌旁组织中的表达量并计算差异情况,由此间接反映各因子是否参与人结直肠癌的发展。2.建立裸鼠皮下瘤模型,处死裸鼠完成荷瘤组织剥离并称重,记录各组裸鼠肿瘤重量变化并分析其差异性,采用Western Blot方法及免疫组化方法检测各组样本中PTEN、PI3K、AKT、mTOR、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR的蛋白表达含量并统计各组间差异。研究结果:1.临床实验中,免疫组化法结果示:癌旁组织中PTEN的表达量显着高于肠癌组（P<0.05）;癌旁组织中PI3K、AKT、mTOR的表达量显着低于癌症组织（P<0.05）。q-PCR结果示:结直肠癌组PTEN、PI3K、AKT、mTOR蛋白含量,与癌旁组织对比,PTEN表达量降低,PI3K、AKT、mTOR表达量升高,均有显着性差异（P<0.05）。2.裸鼠荷瘤重量检测结果示:固正消癌方低剂量组平均瘤重较模型组平均瘤重无明显差异（P>0.05）;固正消癌方中剂量组及高剂量组两组瘤重较模型组均降低（P<0.05）3.动物实验中,Western Blot结果示:与模型组相比,PTEN表达量在固正消癌方低、中、高剂量组均显着增高（P<0.05）;固正消癌方低、中、高剂量组的p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR表达量与模型组相比均显着降低（P<0.05）。免疫组化结果示:与模型组相比,固正消癌方低剂量组中p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量有下调趋势,但无统计学意义（P>0.05）,固正消癌方中、高剂量组中的p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达量显着低于模型组（P<0.05）;与模型组相比,固正消癌方低、中剂量组中PTEN表达量没有统计学差异（P>0.05）,高剂量组中PTEN表达量显着高于模型组（P<0.05）;与模型组相比,加入固正消癌方后低、中、高剂量三组中PI3K、AKT、mTOR总表达量有下调趋势均无统计学意义,（P>0.05）。研究结论:（1）PTEN蛋白在人结直肠癌组织中的低表达以及PI3K、AKT、mTOR等蛋白在人结直肠癌组织中的高表达共同说明了 PI3K/AKT/mTOR信号通路在人肠癌的发生发展中呈激活状态,是我们一直所探索的影响肠癌发病机制的关键信号轴之一。（2）固正消癌方可抑制裸鼠皮下种植瘤的增长同时抑制HT-29细胞的异常分化增殖。（3）固正消癌方可上调裸鼠种植瘤中PTEN表达量,降低p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达量,且与药物剂量呈相关性,高剂量的固正消癌方作用效果更显。（4）固正消癌方可通过调控PTEN基因抑制PI3K/AKT/mTOR通路的活性状态来发挥治疗大肠癌的作用。
黄晶[7]（2021）在《MiR-202-5p通过抑制PTEN促进结直肠癌细胞增殖的分子机制研究》文中指出研究背景及目的CRC（结直肠癌）是造成当今社会癌症死亡的主要原因之一。因为miR-202-5p在不同的环境下具有抑癌或致癌两种作用,所以miR-202-5p对结直肠癌发生发展的生物学功能仍存在一些争议。在目前的研究中,我们发现miR-202-5p在大多数人结直肠癌中存在异常表达。更加确切地来说,c-Myc对miR-202-5p具有转录上调作用,并通过直接抑制PTEN从而促进PI3K/Akt信号通路的激活。重要的是,我们进一步证实下调miR-202-5p或上调miR-202-5p可分别抑制和促进结直肠癌细胞增殖。此外,我们检测到PTEN蛋白水平的降低通常与结直肠癌组织中miR-202-5p的表达升高相关。我们由此可以推断出miR-202-5p的增加在结直肠癌中可能起着促进肿瘤发生的作用。方法1.利用qPCR检测结直肠癌组织中miR-202-5p的表达。接着从生物学功能上验证,转染miR-202-5p的模拟物或抑制剂后用细胞计数以及克隆形成实验来检测细胞增殖能力。2.利用EdU以及流式细胞术实验来鉴定miR-202-5p是如何影响细胞增殖的。3.预测miR-202-5p的靶基因,双荧光素酶实验验证miR-202-5p与靶基因结合。WB检测miR-202-5p对靶基因的调控是正调控还是负调控。4.分析miR-202-5p的启动子区的潜在c-Myc结合位点,用CHIP实验证实。分别过表达和敲低c-Myc后用双荧光素酶实验证实miR-202-5p是否受c-Myc调控。5.用结直肠癌病人组织样本做免疫组化连续切片,作统计学分析miR-202-5p的表达与c-Myc、p-Akt以及PTEN的相关性。结果1.MiR-202-5p在结直肠癌组织和细胞中高表达。2.MiR-202-5p促进细胞增殖和细胞周期进展。3.MiR-202-5p直接靶向PTEN,促进Akt的激活。4.MiR-202-5p受c-Myc转录调控。5.C-Myc-miR-202-5p-PTEN-pAkt轴在结直肠癌中发挥着重要的临床意义。结论C-Myc-miR-202-5p-PTEN-pAkt轴在促进肿瘤发生中发挥重要作用,并提示miR-202-5p是在结直肠癌治疗中的一个有价值的靶点。
陈晓文[8]（2021）在《Skp2对慢性髓细胞白血病细胞增殖及其对伊马替尼敏感调控机制的研究》文中提出研究背景:慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是临床常见的血液系统恶性肿瘤,主要特征为骨髓造血生成大量未成熟的白细胞,其发病率高达新发成人白血病的20%。BCR-ABL融合基因目前被认为是CML发病的重要原因和基本特征,该融合基因表达可生成具备组成性酪氨酸激酶活性的BCR-ABL嵌合蛋白。在CML的临床治疗中,特异性BCR-ABL抑制剂,如酪氨酸激酶抑制剂（Tyrosine kinase inhibitors,TKI）可将患者生存率显着提高,已被临床广泛应用。伊马替尼是（IM）一种通过阻断BCR-ABL蛋白的非活性构象的TKI,首次应用于CML的治疗,疗效显着,毒性较低。但仍有大量CML患者对伊马替尼不敏感或通过多种细胞机制产生耐药性。因此,在CML进展过程中筛选出有效的治疗靶点是非常迫切的,这将有助于提高CML在TKI药物治疗中的效果。S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase associated protein 2,Skp2）是由人Skp2基因编码的E3泛素连接酶。Skp2是一种C-Myc直接靶基因,在细胞周期进程的调控中起重要作用,多种恶性肿瘤中常发现有其表达上调。在血清缺乏的细胞中,Skp2过表达从而诱导细胞周期素A积累和p27磷酸化依赖性的降解从而促进细胞进入S期。Skp2还参与其他细胞周期调节蛋白的泛素化,包括细胞周期蛋白E和转录因子E2F1。目前国内外多项研究证实Skp2与许多实体肿瘤的化疗耐药性有关。如Skp2通过p27-CDKs-E2F1途径正向调节有丝分裂阻滞缺陷蛋白2（mitotic arrest deficient 2,MAD2）的表达,通过抑制Skp2可以增强肺癌细胞对紫杉醇的敏感性。但Skp2在CML中的发生和抗肿瘤耐药中的作用尚待明确。研究目的:比较CML患者与正常对照组外周血白细胞中Skp2的蛋白水平与m RNA水平。探究Skp2的异常表达在K562细胞中的作用机制:在K562细胞中稳定敲减和过表达Skp2基因,检测细胞数量变化和细胞的增殖能力变化。在K562细胞中分别敲减和过表达c AMP应答元件结合蛋白（CREB）基因,检测Skp2的m RNA水平。检测抑制PI3K/Akt-CREB-Skp2轴后K562细胞对伊马替尼的敏感性变化。研究方法:1.收集24例新诊断的CML患者（研究组）和7例健康体检者（对照组）外周血,对外周血样本进行白细胞分离。分别通过实时荧光定量PCR（q RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot）分析两组样本中Skp2的m RNA水平和蛋白水平。2.人CML细胞系K562在37℃,5%的CO2条件下用的RPMI 1640培养基（含10%胎牛血清）培养。构建基于PLK0.1的sh RNA-Skp2质粒,在K562细胞中稳定敲减Skp2,用Western Blot法检测稳定表达sh RNA-ctrl、sh RNA-skp2-1或sh RNA-skp2-2的K562细胞中Skp2蛋白水平,验证敲减Skp2基因的效果。通过细胞计数分析,比较K562细胞在Skp2稳定敲减和未敲减情况下的细胞增殖率,对稳定表达sh RNA-ctrl、sh RNA-skp2-1或sh RNA-skp2-2的K562细胞用Ed U染色及Hoechst 33342染色法观察细胞核,检测Ed U阳性细胞与Hoechst 33342阳性细胞的比值。在K562细胞中转染Flag-Skp2质粒,对过表达Skp2的K562细胞行Western Blot分析,采用细胞计数分析法测定过表达Skp2的K562细胞的细胞数变化,并用Ed U染色及Hoechst33342染色观察细胞形态,检测Ed U阳性细胞与Hoechst 33342阳性细胞之比。3.利用Jas PAR软件对编码Skp2基因的上游基因组序列进行分析,在Skp2启动子中发现一个潜在保守的CREB结合区（BR）。染色质免疫沉淀（Ch IP）分析证实CREB基因和Skp2启动子中CREB结合区（BR）的基因片段之间存在特异性结合。构建一系列含野生型CREB-BR（WT）PGL3荧光素酶报告质粒和缺失CREB-BR的突变型（MUT）PGL3荧光素酶报告质粒。将K562细胞与含有野生型或突变型Skp2启动子区的PGL3荧光素酶报告质粒以及Flag或Flag-CREB质粒共转染K562细胞,转染后取细胞溶解物,使用荧光素酶测定其转录活性,用Western Blot法验证CREB的过表达效果,同时通过q RT-PCR测定Skp2的m RNA水平。K562细胞与含有sh RNA-CREB基因或sh RNA-ctrl基因共转染,转染后行Western Blot法证实基因敲减效果,荧光素酶分析转录活性。用q RT-PCR测定CREB基因敲减前后K562细胞中Skp2 m RNA水平变化。4.用伊马替尼（1μmol/L）处理稳定表达sh RNA-ctrl、sh RNA-Akt、sh RNA-CREB或sh RNA-Skp2的K562细胞24 h,采用MTT比色法测定各组细胞活力,分别与sh RNA-ctrl组比较,通过三次实验得出相对细胞活力。用二甲基亚砜或磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂Ly294002（10μmol/L）预处理K562细胞4 h,伊马替尼（1μmol/L）处理24 h,采用MTT比色法测定各组细胞活力,分别与对照组比较,通过三次实验得出相对细胞活力。用伊马替尼（1μmol/L）处理稳定表达sh RNA-ctrl、sh RNA-Akt、sh RNA-CREB或sh RNA-Skp2的K562细胞24 h,Western Blot分析caspase-3/7活性和PARP的裂解。K562细胞分别加用和不加Ly294002预处理再加用伊马替尼（1μmol/L）处理24 h,试剂盒检测caspase-3/7活性并用Western Blot分析PARP的裂解。研究结果:1.和健康对照组相比,Skp2在CML患者中异常表达。收集24例CML患者和7例健康体检者外周血白细胞,CML样本显示Skp2的m RNA水平及蛋白水平均较健康对照组显着上调。数据表明CML患者Skp2表达上调,Skp2蛋白水平与m RNA水平呈一致性改变。2.Skp2是K562细胞增殖的关键。在K562细胞中稳定敲减Skp2基因,与对照组细胞相比,敲减了Skp2的K562细胞的细胞数量显着减少。Ed U分析显示敲减Skp2的K562细胞增殖能力显着低于对照组细胞。3.Skp2过表达影响K562细胞的增殖。与敲减基因结果相反,通过过表达Skp2基因,K562细胞数量增加。与此相关,Skp2过表达导致K562细胞中Ed U阳性细胞百分比显着增加。4.Skp2通过CREB转录调控。利用Jas PAR软件对Skp2编码基因上游基因组序列进行分析,在Skp2启动子中发现一个潜在的CREB结合区（BR）。染色质免疫沉淀（Ch IP）分析显示,CREB能和Skp2基因中CREB结合区（BR）的基因片段特异性。构建一系列包含野生型CREB-BR（WT）PGL3荧光素酶报告质粒和缺失CREB-BR的突变型（MUT）PGL3荧光素酶报告质粒,将含有WT或MUT的Skp2启动子区以及Flag或Flag-CREB的质粒共转染K562细胞,野生型CREB-BR（WT）转录活性在过表达CREB后明显升高,但突变型质粒（MUT）和p GL3空载体转录活性未见明显升高。相反,野生型CREB-BR（WT）转录活性在稳定敲减CREB基因的K562细胞中降低,同样突变型构建体（MUT）和PGL3空载体均未显示转录活性的改变。5.CREB的稳定敲减导致K562细胞中Skp2 m RNA水平显着降低。鉴于CREB的转录活性是由其第133位丝氨酸磷酸化后被活化的,我们试图评估野生型的Flag-CREB和第133位丝氨酸被突变的Flag-CREB-Ser-133A对Skp2表达的影响。野生型的Flag-CREB能够上调Skp2的m RNA水平,但第133位丝氨酸被突变的Flag-CREB-Ser-133A对于Skp2的m RNA水平无明显的调控作用。以上结果提示,在K562细胞中Skp2的表达在转录水平受到CREB的调控。6.抑制PI3K/Akt-CREB-Skp2轴增加K562细胞对伊马替尼的敏感性。用伊马替尼处理（1μmol/L）CREB或Skp2稳定敲减的K562细胞并观察其存活率,CREB或Skp2稳定敲减的K562细胞在伊马替尼处理后表现出细胞活力的急剧下降。7.CREB或Skp2的敲减导致伊马替尼处理的K562细胞中caspase-3/7活性的显着增加。caspase-3/7的活化是对伊马替尼治疗敏感性的响应,CREB或Skp2稳定敲减的K562细胞在伊马替尼处理后与对照组细胞药物处理后相比,caspase-3/7的活化及PARP的裂解更明显。8.PI3K/Akt信号通路在关联CREB的激活及Skp2的表达中起到特定的作用。在K562细胞中稳定敲减Akt或使用LY294002来抑制PI3K/Akt通路,结果导致伊马替尼处理的K562细胞活力显着下降,Skp2蛋白水平降低,caspase-3/7活化及PARP裂解明显增强,说明K562细胞对伊马替尼更加敏感。结论:与健康对照者相比,初治CML患者外周血白细胞中Skp2高表达,并且Skp2高表达对CML细胞增殖至关重要。从机制上讲,在K562细胞中Skp2受PI3K/Akt-CREB信号通路的转录调控。此外,稳定敲减Skp2的表达或阻断PI3K/Akt-CREB通路可显着提高K562细胞对伊马替尼的敏感性。
马晓丽[9]（2021）在《ILK对食管鳞癌恶性表型的影响及其功能研究》文中研究说明目的:本研究目的是探讨整合素连接激酶（ILK）基因对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响,研究其在食管癌中功能,为食管癌的精准诊疗奠定理论基础和临床参考。方法:1)采用meta分析评价ILK在消化系统肿瘤组织中的表达,及与消化系统肿瘤临床表型及预后间的相关性;2)筛选ILK高表达的人食管鳞癌细胞系,建立ILK慢病毒干扰序列。将ILK慢病毒干扰序列转染食管鳞癌细胞系TE-1和KYSE-150,用q RT-PCR检测干扰载体转染后ILK的表达。在细胞水平上,利用MTT增殖、克隆检测、流式细胞仪凋亡检测、Transwell小室侵袭及划痕愈合等技术,研究ILK基因消减对食管鳞癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响;3)建立ILK慢病毒干扰载体,转染KYSE-150细胞。在裸鼠皮下分别接种sh ILK及对照细胞株,建立KYSE-150细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过观察肿瘤生长,测量肿瘤大小和体积。在动物水平上,研究ILK基因消减对食管鳞癌细胞生长的影响。基于RNA-seq技术筛选食管癌的差异表达基因,通过GO功能富集和KEGG通路分析预测其可能的发病机制,筛选可能参与食管癌发生发展的关键调控基因及相关信号通路。结果:第一部分:meta分析结果显示ILK在消化系统肿瘤组中高表达,ILK表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤浸润程度及生存预后呈相关性,与年龄及性别无明显相关性。第二部分:在体外ESCC细胞水平,沉默ILK基因后,可显着抑制TE-1、KYSE-150细胞增殖和集落形成,促进TE-1、KYSE-150细胞凋亡。ILK基因消减后,TE-1、KYSE-150细胞侵袭及迁移能力明显减弱。第三部分:裸鼠移植瘤动物模型结果发现,ILK干扰组裸鼠肿瘤生长缓慢,相比较于对照组,肿瘤的重量及体积均偏小,ILK基因消减后影响了裸鼠成瘤的能力。基于RNA-seq技术,ILK基因干扰后挖掘到5540个食管癌差异表达基因,其中上调基因为2839个,下调基因为2601个。上调的基因有SOD2、IRF6、PER1、PHLDB2、TNFAIP3等,下调的基因有RPL21、HYOU1、WARS、SUPT16H、DHCR24等。可能参与TNF信号通路、AMPK信号通路、Fox O信号通路、P53信号通路、NF-k B信号通路等。结论:ILK在消化系统肿瘤中高表达,与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移、肿瘤浸润程度及生存预后呈相关性,与年龄及性别无明显相关性。ILK基因消减抑制ESCC细胞增殖、克隆形成、侵袭及转移,促进细胞凋亡。体内致瘤研究证实,ILK基因消减会阻碍KYSE-150移植瘤的生长。基于RNA-seq技术筛选出食管癌的差异表达基因,通过GO功能富集和KEGG通路分析预测差异表达基因,可能相关的信号传导通路。
李春燕[10]（2021）在《邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯与双酚A单独和联合暴露通过microRNA影响大鼠卵巢肿瘤发生的实验研究》文中指出目的:近年来,在女性相关癌症死亡原因中,卵巢肿瘤已成为主要原因之一,其发病率处于不断上升状态。卵巢肿瘤的危险因素很多,包括家族及遗传史、生育及年龄和环境影响等。随着科技的发展和化工产品的大量应用,近年来,内分泌干扰物引起了人们的关注,它们对身体和环境的稳态具有一定的破坏作用和影响。目前,邻苯二甲酸酯类（PAEs）和双酚类（BPs）这两大类物质是备受关注的内分泌干扰物,其被广泛应用于塑料制品的增塑剂和主要制造原料,在环境及生物体内也都可以被检测到,成为危害较严重的环境污染物。由于环境污染物在实际生活中多以混合暴露形式存在,同时在人体接触途径形式多样,而且与各污染物单独暴露作用相比,此种混合暴露模式会呈现不同毒性作用,因此,对个别污染物的单独毒性作用的研究已不再能足够满足人类社会的需求。邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯（DEHP）与双酚A（BPA）分别作为PAEs与BPs的代表性物质,普遍存在于自然和社会环境中。它们的交互作用较复杂,人群研究也存在有一定的局限性,会使得调查结论出现较大偏差,同时实验证据尚不充分,缺乏准确可靠的安全性评价数据。其中,卵巢是DEHP和BPA有害作用的靶器官之一,二者单独或联合暴露是否会影响卵巢肿瘤的发生及其作用机理仍有待探讨。因此,评价邻苯二甲酸酯类和双酚类化合物单独或联合暴露所致卵巢肿瘤发生及其相关机制,为环境内分泌干扰物的安全性评价提供理论依据和科学线索是本文的研究目的。研究方法:1.选用雌性健康SD大鼠（4周龄）160只,构建大鼠卵巢肿瘤模型。采用DMD（二乙基亚硝胺DEN,N-甲基亚硝基脲MNU和二异丙醇亚硝胺DHPN）致癌模型,将大鼠随机分为DA（给予致癌物DMD预处理）组与DN（未给予致癌物DMD预处理）组。随后将DN组分为四组,分别为对照（Control）组,DEHP150mg/kg组,BPA 20 mg/kg组及DEHP 150 mg/kg+BPA 20 mg/kg组,每组20只大鼠,DA组则分为DMD组,DMD+DEHP 150 mg/kg组,DMD+BPA 20 mg/kg组,DMD+DEHP 150 mg/kg+BPA 20 mg/kg组,同样每组20只大鼠。首先DA组造模动物在第1天按照100 mg/kg给予大鼠腹腔注射DEN,在第5、8、11、14天按照20 mg/kg给予大鼠腹腔注射MNU,第1周和第3周按照0.1%DHPN饮水染毒,DN组动物给予生理盐水注射和日常饮水,第4周进行休息调整后,所有动物开始给予DEHP和BPA单独及联合灌胃染毒至第30周后处死。造模期间观察并记录各组大鼠生长状态、体重变化、死亡情况以及各组大鼠卵巢的脏器系数变化;2.染毒结束后留取所有大鼠的卵巢组织,行HE染色后镜下扫片,由病理科医师阅片,观察各组大鼠卵巢组织的病理改变情况并统计其肿瘤发生率;3.采用IHC法测定各组大鼠卵巢组织中肿瘤标记物增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况,通过阳性细胞计数对卵巢组织IHC结果进行统计分析;4.采用RT-PCR方法检测大鼠卵巢组织中ERα、PTEN m RNA表达水平;5.采用RT-PCR方法检测大鼠卵巢组织中候选micro RNA（mi R-let7b、mi R-21、mi R-200c、mi R-200a-3p、mi R-205、mi R-212-3p、mi R-141-3p、mi R-222、mi R-203-3p）的表达水平;6.采用Western blot方法检测大鼠卵巢组织中ERα、PTEN、AKT、P-AKT的蛋白表达水平;7.Kaplan-Meier plotter网站进行在卵巢组织中部分有差异表达的micro RNA生存分析并确定最终筛选出相关micro RNA。结果:1.大鼠在30周的饲养过程中,随时记录各组大鼠的生存及死亡情况。与对照组比较,DA组（给予致癌物DMD预处理组）中大鼠生存曲线趋势均呈降低趋势,并在BPA与DEHP单独及联合暴露之后,大鼠生存曲线出现显着性差异（P<0.05）;2.DEHP与BPA单独及联合染毒期间,DN组（无致癌物DMD预处理组）大鼠生长稳定,摄食正常,体毛光滑,同时体重随着时间稳步增长,但组间未见显着性差异。DA组（给予致癌物DMD预处理组）大鼠生长缓慢,摄食量较少,精神萎靡,染毒期间各处理组大鼠均生长缓慢,从第10周开始至第30周染毒结束,各处理组大鼠体重与对照组相比均呈下降趋势（P<0.05）。染毒结束后留取各组大鼠卵巢组织并对其称重,进行大鼠卵巢脏器系数的计算与分析,与对照组相比,各处理组大鼠卵巢脏器系数改变未见显着性差异;3.通过HE染色检测大鼠卵巢病理改变情况,结果显示,DN组大鼠卵巢结构基本正常,颗粒细胞排列规则且紧密,而DA组大鼠卵巢正常结构基本消失,且DEHP与BPA单独及联合暴露后大鼠颗粒细胞排列疏松紊乱,闭锁卵泡增多,部分肿瘤细胞呈乳头状和菜花状排列,分化程度低,与对照组相比,DA组中的DEHP与BPA单独及联合暴露显着提高了大鼠卵巢肿瘤的发生率（P<0.05）;4.通过IHC检测大鼠卵巢组织中PCNA的表达,对照组PCNA阳性细胞数较少,而DN组中DEHP和BPA的联合暴露使得大鼠卵巢组织PCNA阳性细胞数升高。DA组PCNA的阳性细胞数显着升高,且在DEHP与BPA单独及联合暴露之后,PCNA的阳性细胞数远高于对照组,差异具有显着性（P<0.05）;5.通过RT-PCR和Western blot检测各处理组大鼠卵巢组织ERα的表达,结果显示,与对照组相比,DN组中DEHP和BPA的联合暴露导致大鼠卵巢组织ERα的蛋白表达水平升高,m RNA表达水平未呈现明显升高或降低趋势,而在DA组中,DEHP与BPA单独及联合暴露导致大鼠卵巢组织ERα的蛋白表达水平升高且具有显着性差异（P<0.05）,但其m RNA表达水平同样未呈现明显升高或降低趋势;6.通过RT-PCR和Western blot检测各处理组大鼠卵巢组织PTEN表达情况,结果显示,与对照组相比,DN组中,BPA与DEHP单独及联合暴露组大鼠卵巢组织PTEN的m RNA和蛋白表达均低于对照组,且DEHP和BPA联合暴露后PTEN蛋白表达有显着差异（P<0.05）。在DA组中,BPA单独暴露及二者联合暴露诱导大鼠卵巢组织PTEN的m RNA和蛋白表达均降低且差异具有显着性（P<0.05）;7.通过RT-PCR检测各处理组大鼠卵巢组织micro RNA的表达情况,结果显示,与对照组相比,mi R-200c和mi R-222的表达水平呈现升高趋势,在DA组中,单独给予致癌物和DEHP与BPA单独及联合暴露后使其表达水平与对照组相比有显着差异（P<0.05）,同时与DMD组相比,DEHP和BPA联合暴露组大鼠卵巢组织的mi R-200c和mi R-222的表达有显着差异（P<0.05）;与对照组相比,mi R-let7b和mi R-21的表达水平上调,在DA组中DEHP与BPA单独及联合暴露后,其表达水平有显着差异（P<0.05）,同时与DMD组相比,DEHP和BPA联合暴露组大鼠卵巢组织mi R-let7b和mi R-21表达有显着差异（P<0.05）;mi R-200a-3p的表达水平呈现降低趋势,与对照组相比,在DA组中给予DEHP与BPA单独及联合暴露后,其表达水平有显着差异（P<0.05）;mi R-203-3p的表达水平呈现不规律变化趋势;mi R-141-3p和mi R-205的表达水平与对照组相比均呈现降低趋势,但整体表达水平呈现不规律变化趋势;mi R-212-3p的表达水平与对照组相比均呈现降低趋势;8.Kaplan-Meier plotter网站对在卵巢组织中具有显着升高趋势的mi R-let7b、mi R-200c,mi R-222,mi R-21进行人群生存分析验证。结果显示,与低表达组相比,hasmir-222高表达组预后差,差异具有显着性（P=0.028）;has-let-7b（P=0.092）、hasmir-200c（P=0.21）高表达组预后较差,但差异不具显着性;has-mir-21高表达组预后较好,同样差异不具显着性（P=0.25）;9.大鼠卵巢肿瘤组织中,ERα表达水平与mi R-222表达水平呈正相关（P<0.05）,即ERα高表达,则mi R-222高表达;mi R-222表达水平与PTEN表达水平呈负相关（P<0.05）,即mi R-222高表达,则PTEN低表达。结论:1.双酚A和邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期联合暴露会影响大鼠卵巢卵泡和颗粒细胞等的正常生长发育,但尚未观察到两者诱发卵巢肿瘤的直接致癌作用。2.双酚A和邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期联合暴露可协同促进致癌剂所致大鼠卵巢肿瘤的发生,两者作为促长剂增加卵巢肿瘤的发生率。3.双酚A和邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯长期联合暴露后可能会经ERα促进mi R-222表达水平的升高,进而抑制PTEN并激活下游PI3K/AKT信号通路,增加大鼠卵巢肿瘤发生的易感性。
二、Role of genetic abnormalities of PTEN and the phosphatidylinositol 3kinase pathway in breast and ovarian cancer tumorigenesis,prognosis and therapy（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Role of genetic abnormalities of PTEN and the phosphatidylinositol 3kinase pathway in breast and ovarian cancer tumorigenesis,prognosis and therapy（论文提纲范文）
（1）安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1篇 综述 天然产物治疗肺癌的前景与争议 |
| 1 背景 |
| 2 按来源分类的抗肿瘤药物 |
| 2.1 来源于植物 |
| 2.2 来源于动物 |
| 2.3 来源于微生物 |
| 2.4 来源于海洋生物 |
| 3 抗肿瘤的机制 |
| 3.1 诱导凋亡 |
| 3.1.1 诱导ROS |
| 3.1.2 诱导内质网应激 |
| 3.1.3 通过线粒体途径诱导凋亡 |
| 3.2 诱导自噬 |
| 3.3 抑制PI3K/AKT途径 |
| 3.4 抑制NF-κB信号途径 |
| 3.5 阻滞细胞周期 |
| 3.6 调控表观遗传学 |
| 3.7 调控其他机制以及多种机制联合作用 |
| 4 天然产物使用的困境及解决方案 |
| 5 总结 |
| 第2篇 实验研究 |
| 第1章 ANW抑制NSCLC细胞生长和转移 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 仪器设备 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.2 细胞复苏及培养 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1CCK-8 实验测定细胞活力 |
| 1.3.2 成克隆实验 |
| 1.3.3 EDU实验 |
| 1.3.4 细胞流式实验 |
| 1.3.5 细胞划痕实验 |
| 1.3.6TRANSWELL实验 |
| 1.3.7 WESTERN BLOT |
| 1.3.8 统计学分析 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 ANW抑制NSCLC细胞的增殖 |
| 1.4.2 ANW抑制NSCLC细胞的侵袭和转移 |
| 1.4.3 ANW增强顺铂对NSCLC的抗肿瘤作用 |
| 1.5 结果讨论 |
| 第2章 ANW上调NSCLC细胞中的LET-7C-3P表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 仪器设备 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 引物序列 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 DEEP SEQUENCING检测细胞准备及RNA提取 |
| 2.2.2 LET-7C-3P靶基因预测 |
| 2.2.3 LET-7C-3P检测 |
| 2.2.4 构建及获取携带PIK3CA基因的慢病毒 |
| 2.2.5 MIRNAS转染A549和H460细胞 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因基因测定 |
| 2.2.7 WESTERN BLOT检测PI3K/AKT/MTOR信号通路相关蛋白表达 |
| 2.2.8 QRT-PCR检测PIK3CA MRNA水平 |
| 2.2.9 LET-7C-3P对NSCLC细胞的影响 |
| 2.2.10 统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 ANW上调NSCLC细胞中的MICRORNA HSA-LET-7C-3P |
| 2.3.2 ANW抑制NSCLC细胞中PI3K/AKT/MTOR信号通路 |
| 2.3.3 LET-7C-3P通过直接靶向PIK3CA来抑制PI3K/AKT/MTOR通路 |
| 2.3.4 LET-7C-3P可抑制NSCLC细胞增殖和转移 |
| 2.4 结果讨论 |
| 第3章 LET-7C-3P是ANW发挥抗NSCLC作用的必须靶点 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 仪器设备 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞分组 |
| 3.2.2 检测下调LET-7C-3P后细胞增殖 |
| 3.2.2 检测下调LET-7C-3P后细胞侵袭和转移 |
| 3.2.3 细胞流式实验检测下调LET-7C-3P后细胞凋亡 |
| 3.2.4 WESTERN BLOT检测下调LET-7C-3P后细胞内相关蛋白表达 |
| 3.2.5 建立裸鼠异种移植模型及分组 |
| 3.2.6 苏木素-伊红(H&E)染色 |
| 3.2.7 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的抗NSCLC细胞增殖作用 |
| 3.3.2 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的抗NSCLC细胞转移和侵袭作用 |
| 3.3.3 抑制LET-7C-3P可以抵消ANW的促NSCLC细胞凋亡作用 |
| 3.3.4 裸鼠异种移植模型证实了ANW通过上调LET-7C-3P发挥抗肿瘤作用 |
| 3.4 结果讨论 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的的科研成果 |
| 致谢 |
（2）GPR35基因调控PI3K/AKt/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料、试剂与仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 2.结果 |
| 2.1 过表达GPR35 乳腺癌细胞(MDA-MB-231)模型的建立 |
| 2.2 MTT检测过表达GPR35 对乳腺癌细胞生长和增殖的影响 |
| 2.3 GPR35 过表达对乳腺癌细胞中PI3K、AKt、mTOR基因表达水平的影响 |
| 2.4 GPR35 过表达对各组乳腺癌细胞中信号通路蛋白PI3K、AKt、mTOR、p-PI3K、p-AKt、p-mTOR表达水平的影响 |
| 2.5 GPR35 过表达对各组乳腺癌细胞中TRAP1 的表达的影响 |
| 3.讨论 |
| 3.1 验证GPR35 过表达乳腺癌细胞(MDA-MB-231)模型的建立 |
| 3.2 过表达GPR35 基因对乳腺癌细胞增殖的影响 |
| 3.3 过表达GPR35 基因对各组乳腺癌细胞中PI3K/AKt/m TOR信号通路m RNA、蛋白水平的影响 |
| 3.4 过表达GPR35 基因对乳腺癌细胞TRAP1 蛋白表达的影响 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 PI3K/AKt/mTOR信号通路在乳腺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（3）EphA2、Ephrin A1在乳腺癌组织的表达及意义（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验标本 |
| 1.2 主要仪器、其他耗材 |
| 1.3 主要材料、试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 免疫组化检测及结果判定 |
| 2.2 原位杂交检测及结果判定 |
| 2.3 细胞的分离培养与鉴定 |
| 2.4 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 EphA2、Ephrin A1蛋白及相应mRNA在乳腺癌病理标本中的表达情况 |
| 3.2 EphA2、Ephrin A1 蛋白及相应mRNA在乳腺癌病理标本中的表达与临床病理因素相关性 |
| 3.3 EphA2蛋白与Ephrin A1蛋白及EphA2 mRNA与Ephrin A1 mRNA在乳腺癌病理标本中表达的相关性;EphA2蛋白与EphA2mRNA及Ephrin A1蛋白与 Ephrin A1 mRNA在乳腺癌病理标本中表达的相关性 |
| 3.4 细胞分离培养结果 |
| 3.5 细胞鉴定 |
| 4 讨论 |
| 4.1 EphA2和Ephrin A1的介绍 |
| 4.2 EphA2与恶性肿瘤发生发展的关系 |
| 4.3 Ephrin A1导致恶性肿瘤的发生发展 |
| 4.4 EphA2和Ephrin A1导致乳腺癌的发生进展 |
| 5 结论 |
| 6 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 EphA2、Ephrin A1在乳腺癌中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 |
（4）TGF-β1、p-AKT在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 英语术语及缩略语对照表 |
| 附录 B 攻读学位期间发表论文情况 |
| 附录 C 综述 PI3K/AKT 信号传导通路的研究进展 |
| 参考文献 |
（5）基于条件重编程细胞培养的三阴性乳腺癌敏感药物筛选的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分: 条件重编程细胞的培养、鉴定 |
| 一、实验材料 |
| 1、患者与样本 |
| 2、主要试剂、耗材 |
| 3、主要仪器 |
| 二、实验方法 |
| 1、条件重编程细胞培养及传代 |
| 2、高通量测序 |
| 三、实验结果 |
| 1、条件重编程细胞及其镜下形态 |
| 2、条件重编程细胞与肿瘤组织的一致性 |
| 四、讨论 |
| 1、条件重编程培养技术的发展过程 |
| 2、条件重编程细胞与原肿瘤组织的一致性 |
| 五、小结 |
| 第二部分: 条件重编程三阴性乳腺癌细胞高通量药筛试验 |
| 一、实验方法 |
| 1、药物组设计 |
| 2、敏感药物筛选实验 |
| 3、药筛实验数据分析 |
| 二、实验结果 |
| 1、条件重编程细胞药敏筛查 |
| 2、条件重编程细胞药敏试验DSS评分的整合 |
| 3、条件重编程药敏试验的稳定性 |
| 三、讨论 |
| 1、条件重编程细胞药敏试验的稳定性 |
| 2、PI3K-Akt通路靶向药物在三阴性乳腺癌治疗中的应用 |
| 3、mTOR通路靶向药物在三阴性乳腺癌治疗中的应用 |
| 4、表皮生长因子受体靶向药物在三阴性乳腺癌治疗中的应用 |
| 5、靶向血管形成在三阴性乳腺癌中的应用 |
| 6、拓扑异构酶靶向药物在三阴性乳腺癌治疗中的应用 |
| 7、靶向乏氧在三阴性乳腺癌治疗中的应用 |
| 四、小结 |
| 第三部分: 条件重编程细胞的高通量测序 |
| 一、实验方法 |
| 1、条件重编程三阴性乳腺癌细胞的外显子基因突变分析 |
| 2、条件重编程三阴性乳腺癌细胞与条件重编程正常乳腺组织细胞总体转录组差异分析 |
| 3、条件重编程细胞基因集变异分析 |
| 二、实验结果 |
| 1、外显子基因突变情况 |
| 2、条件重编程三阴性乳腺癌细胞与条件重编程正常乳腺组织细胞的转录组差异 |
| 3、三阴性乳腺癌来源的条件重编程细胞的基因集变异分析 |
| 4、基因集变异分析与药物敏感性的相关性 |
| 三、讨论 |
| 1、靶点基因外显子突变对药物敏感性的预测作用 |
| 2、基因集变异分析对药物敏感性的预测作用 |
| 四、小结 |
| 第四部分: 三阴性乳腺癌预后相关通路分析 |
| 一、实验方法 |
| 1、数据获取及批间差校正 |
| 2、差异基因筛选及基因集富集分析 |
| 3、生存分析 |
| 二、实验结果 |
| 1、批间差校正 |
| 2、差异基因筛选 |
| 3、基因集富集分析 |
| 4、差异基因对三阴性乳腺癌患者生存的影响 |
| 5、GSVA评分对患者生存的影响 |
| 三、讨论 |
| 1、三阴性乳腺癌的预后生物标记 |
| 2、GSVA评分可作为三阴性乳腺患者的预后评估手段 |
| 四、小结 |
| 结论 |
| 综述: 个体化肿瘤模型在乳腺癌中的应用 |
| 背景 |
| 一、2D肿瘤模型 |
| 二、肿瘤类器官 |
| 三、PDX模型 |
| 四、条件重编程细胞模型 |
| 五、微流控芯片肿瘤模型 |
| 六、3D生物打印肿瘤模型 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 博士在读期间发表的文章 |
| 致谢 |
（6）基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨固正消癌方调节PTEN治疗大肠癌的作用机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及PTEN在肠癌组织中的含量 |
| 1. 免疫组化法检测临床标本中PTEN、PI3K、mTOR、Akt蛋白的含量 |
| 1.1 临床标本采集 |
| 1.2 免疫组化试剂 |
| 1.3 免疫组化仪器设备 |
| 1.4 免疫组化试验方法 |
| 1.5 免疫组化结果判读 |
| 2. q-PCR检测临床标本中PTEN、PI3K、mTOR、Akt mRNA的含量 |
| 2.1 材料与分组 |
| 2.2 实验仪器及材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 3. 统计分析 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 免疫组化法检测pTEN及PI3K/AKT/mTORt通路蛋白在肿瘤及癌旁组织表达量 |
| 4.2 q-PCR检测PTEN及PI3K/AKT/mTORt通路相关蛋白在肿瘤及癌旁组织中表达量 |
| 5. 本章小结 |
| 第二章 固正消癌方对PI3K/AKT/mTOR通路蛋白及PTEN基因的影响 |
| 1. 实验准备 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 裸鼠皮下大肠癌模型建立 |
| 2.2 分组 |
| 2.3 给药 |
| 2.4 实验观察项目 |
| 2.5 瘤体采集 |
| 2.6. Western Blot法 |
| 2.7. 免疫组化法 |
| 3. 统计分析 |
| 4. 实验结果 |
| 4.1 固本消癌方对裸鼠肠癌皮下种植瘤的影响 |
| 4.2 固本消癌方对荷瘤鼠模型下PI3K-AKT-mTOR通路相关蛋白及PTEN的影响 |
| 5. 本章小结 |
| 第三章 讨论 |
| 第四章 总结 |
| 1. 全文结论 |
| 2. 不足与展望 |
| 2.1 不足 |
| 2.2 展望 |
| 参考文献 |
| 第五章 综述 PI3K/AKT/mTOR通路及PTEN与肠癌的相关性 |
| 参考文献 |
| 附录 中英对照表 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（7）MiR-202-5p通过抑制PTEN促进结直肠癌细胞增殖的分子机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略词对照表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 细胞系 |
| 2.2 临床肿瘤样本 |
| 2.3 表达载体和RNAi |
| 2.4 主要试剂 |
| 2.5 抗体 |
| 2.6 引物序列 |
| 2.7 主要仪器及设备 |
| 2.8 溶液的配方 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 分子克隆 |
| 3.2 细胞培养 |
| 3.3 qRT-PCR |
| 3.4 Western Blot |
| 3.5 细胞增殖实验 |
| 3.6 CHIP |
| 3.7 双荧光素酶报告基因检测 |
| 3.8 免疫组化 |
| 3.9 数据处理 |
| 4 结果 |
| 4.1 MiR-202-5p在结直肠癌组织和细胞中高表达 |
| 4.2 MiR-202-5p促进细胞增殖和细胞周期进展 |
| 4.3 MiR-202-5p直接靶向PTEN,增加Akt的激活 |
| 4.4 MiR-202-5p受 c-Myc转录调控 |
| 4.5 C-Myc-miR-202-5p-PTEN-pAkt轴在结直肠癌中发挥着重要的临床意义 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述及参考文献 MiR-202-5p及PTEN信号通路在恶性肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
（8）Skp2对慢性髓细胞白血病细胞增殖及其对伊马替尼敏感调控机制的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.前言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 Skp-2 在恶性肿瘤发生机制中的作用 |
| 参考文献 |
（9）ILK对食管鳞癌恶性表型的影响及其功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 ILK表达与消化系统恶性肿瘤临床表型及预后相关性的Meta分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 检索数据库 |
| 1.2 文献纳入和排除标准 |
| 1.3 文献筛选和资料提取 |
| 1.4 研究方法学质量评价 |
| 1.5 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 ILK对食管鳞癌细胞恶性表型的功能影响 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 细胞系及来源 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 ILK对食管鳞癌体内成瘤性的影响及生物信息学分析 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 实验动物来源 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 实验方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 整合素连接激酶在肿瘤中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 新疆医科大学博士研究生学位论文 导师评阅表 |
（10）邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯与双酚A单独和联合暴露通过microRNA影响大鼠卵巢肿瘤发生的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.2 主要试剂的配置 |
| 2.2.1 Western Blot电泳缓冲液配置 |
| 2.2.2 Western Blot转模缓冲液配置 |
| 2.2.3 TBS配置 |
| 2.2.4 抗体稀释液与封闭液配置 |
| 2.3 研究对象 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 动物分组及染毒 |
| 2.4.2 动物卵巢肿瘤的建立 |
| 2.4.3 动物体重及脏器系数的测定 |
| 2.4.4 观察大鼠卵巢病理形态的改变 |
| 2.4.5 免疫组化检测肿瘤标记物表达 |
| 2.4.6 Western bolt检测蛋白表达 |
| 2.4.7 RT-PCR检测基因mRNA水平的变化 |
| 2.4.8 RT-PCR检测microRNA表达水平的变化 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 DEHP与BPA单独及联合暴露对大鼠生存率的影响 |
| 3.2 DEHP与BPA单独和联合暴露对大鼠体重及卵巢重量的影响 |
| 3.3 DEHP与BPA单独和联合暴露加重DMD所致大鼠卵巢肿瘤的发生 |
| 3.4 DEHP与BPA联合暴露对大鼠卵巢组织PCNA表达的影响 |
| 3.5 DEHP与BPA联合暴露影响大鼠卵巢ERα表达 |
| 3.6 DEHP与BPA联合暴露影响大鼠卵巢PTEN/PI3K/AKT信号通路相关基因表达 |
| 3.7 DEHP与BPA联合暴露影响大鼠卵巢相关microRNA表达水平 |
| 3.8 Kaplan-Meier plotter网站筛选有差异表达的相关microRNA |
| 3.9 ERα、PTEN在卵巢肿瘤组织中的表达与miR-222之间的相关性 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 环境内分泌干扰物暴露影响卵巢肿瘤发生的机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 社会实践 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、Role of genetic abnormalities of PTEN and the phosphatidylinositol 3kinase pathway in breast and ovarian cancer tumorigenesis,prognosis and therapy（论文参考文献）
- [1]安五脂素通过调控let-7c-3p/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制非小细胞肺癌发展[D]. 文婷婷. 吉林大学, 2021(01)
- [2]GPR35基因调控PI3K/AKt/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖的研究[D]. 李红娜. 桂林医学院, 2021(01)
- [3]EphA2、Ephrin A1在乳腺癌组织的表达及意义[D]. 周凌智. 大理大学, 2021(09)
- [4]TGF-β1、p-AKT在乳腺癌中的表达及其与上皮-间质转化的关系[D]. 周雪梅. 蚌埠医学院, 2021(01)
- [5]基于条件重编程细胞培养的三阴性乳腺癌敏感药物筛选的研究[D]. 赵彬. 北京协和医学院, 2021(02)
- [6]基于PI3K/AKT/mTOR通路探讨固正消癌方调节PTEN治疗大肠癌的作用机制[D]. 陈雪. 南京中医药大学, 2021(01)
- [7]MiR-202-5p通过抑制PTEN促进结直肠癌细胞增殖的分子机制研究[D]. 黄晶. 安徽医科大学, 2021(01)
- [8]Skp2对慢性髓细胞白血病细胞增殖及其对伊马替尼敏感调控机制的研究[D]. 陈晓文. 安徽医科大学, 2021(01)
- [9]ILK对食管鳞癌恶性表型的影响及其功能研究[D]. 马晓丽. 新疆医科大学, 2021
- [10]邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯与双酚A单独和联合暴露通过microRNA影响大鼠卵巢肿瘤发生的实验研究[D]. 李春燕. 中国医科大学, 2021