一、镉中毒致肺损伤的病理形态学观察（论文文献综述）
岳茂兴,秦锡虎,申捷,汤黎明,刘广军,朱大伟,贾中芝,朱晓瓞,尹进南,刘宁,邵义如,王大明,吴兑[1]（2021）在《特种危险化学品事故紧急救援与处置关键技术创新研发与应用》文中认为目前全世界化学品已为人知的品种达500万～700万种,每年还有成千上万种新化学品问世[1]。特种危险化学品有易燃、易爆、有毒、有害等特性。在化学品的生产、经营、存储、运输、使用及其废弃物处置过程中,由于对其管理、防护不当,很容易导致重大事故[2]。1984年印度博帕尔农药厂异氰酸甲酯泄漏事故,致使3 150居民死亡,20 000人中毒,是世界工业史上绝无仅有的大惨案[3]。
喻娟娟[2]（2021）在《CB2受体激动剂JWH133和抑制剂SR144528对卵蛋白诱导大鼠气道重塑的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过建立卵蛋白（OVA）诱导大鼠气道重塑动物模型,用大麻素CB2受体激动剂JWH133和抑制剂SR44528分别对气道重塑大鼠进行干预,观察各组大鼠肺组织切片病理改变,检测各组大鼠肺泡灌洗液中基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）的浓度,以及上述因子在肺组织中的蛋白表达情况。探讨大麻素受体激动剂JWH133和抑制剂SR44528分别对气道重塑大鼠影响。方法:将32只SD雌性大鼠平均分成4组（n=8）,分别为空白对照组、气道重塑组、气道重塑+JWH133组、气道重塑+SR144528组。空白对照组大鼠不进行干扰,气道重塑组于第1天和第8天分别经腹腔注射OVA（上海源叶,货号S12012,纯度98%）生理盐水溶液（100mg/ml）1ml进行致敏,第15天到第56天每天用2%OVA生理盐水30ml雾化进行激发,每天雾化一次,每次约半小时。气道重塑+JWH133组:致敏和激发处理同气道重塑组,此外,于第28天到第56天每次雾化前半小时经腹腔注射大麻素受体激动剂JWH133生理盐水溶液1ml,每只大鼠JWH133的用量2.5mg/kg,每天1次。气道重塑+SR144528组致敏和激发处理同气道重塑组,此外,于第28天到第56天每次雾化前半小时经腹腔注射大麻素受体激动剂SR144528生理盐水溶液1ml,每只大鼠SR144528133的用量2.5mg/kg,每天1次。动物模型完成后全部处死并取材,取肺组织做HE染色观察大鼠肺组织形态并进行肺损伤评分,Masson染色观察大鼠肺组织胶原纤维沉积情况;取支气管肺泡灌洗液ELISA检测基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）的浓度;取肺组织Western blot方法检测大鼠肺组织MMP-9、MMP-2、VEGF蛋白表达情况,用image lab软件对蛋白印迹条带进行密度分析测定其灰度值。结果:第56天雾化结束后,各组大鼠一般情况良好,整个造模期间无大鼠死亡。（1）肺组织HE染色观察组织形态学改变:空白对照组大鼠肺组织切片HE染色显示肺组织结构清晰,肺泡腔完整,无明显肺泡充血、出血,肺泡腔及血管壁可见少许中性粒细胞浸润,肺泡壁间隔薄、支气管壁无增厚,肺损伤评分为（0.56±0.5）分。气道重塑组大鼠肺组织切片HE染色显示肺组织结构紊乱、肺泡破裂、肺泡间隔厚、完整的肺泡数目少,肺泡及气道上皮基底膜增厚,肺损伤评分为（3.44±0.5）分。气道重塑+JWH133组大鼠肺组织切片HE染色显示肺组织结构清晰,肺泡腔完整,无明显肺泡充血、出血,肺泡腔及血管壁可见少许中性粒细胞浸润,肺泡壁间隔薄、支气管壁无增厚,肺损伤评分为（0.67±0.47）分。气道重塑+SR144528组肺组织切片HE染色显示肺组织结构紊乱,肺泡破裂较多,肺泡间隔明显增厚,肺泡壁及气道上皮基底膜增厚,肺损伤评分为（3.56±0.5）分。与空白对照组比较,气道重塑组大鼠肺组织损伤评分重,差异有显着性（P<0.01,t=11.63）。与气道重塑组比较,气道重塑+JWH133组大鼠肺组织损伤评分轻,差异有显着性（P<0.01,t=11.47）。与气道重塑组比较,气道重塑+SR144528组大鼠肺组织损伤评分有轻微增加,差异没有显着性（P>0.05,t=0.45）。（2）肺组织切片Masson染色胶原蛋白结果:空白对照组肺组织切片Masson染色可见肺泡间隔、肺泡腔胶原纤维散在分布。气道重塑组大鼠肺组织切片Masson染色可见肺泡间隔、肺泡腔胶原纤维密集分布。气道重塑+JWH133组肺组织切片Masson染色可见肺泡间隔、肺泡腔胶原纤维散在分布。气道重塑+SR144528组大鼠肺组织切片Masson染色可见肺泡间隔、肺泡腔胶原纤维密集分布。（3）Elissa检测结果:各组大鼠BALF中MMP-2的浓度分别为空白对照组（0.9±0.17）,气道重塑组（1.78±0.34）,气道重塑+JWH133组（1.07±0.41）,气道重塑+SR144528组（1.78±0.44）。各组大鼠BALF中MMP-9的浓度分别为空白对照组（0.56±0.36）,气道重塑组（1.04±2）,气道重塑+JWH133组（0.52±0.36）,气道重塑+SR144528组（1.31±0.55）。各组大鼠BALF中VEGF浓度分别为空白对照组（0.95±0.24）,气道重塑组（1.75±0.41）,气道重塑+JWH133组（1.14±0.58）,气道重塑+SR144528组（1.87±0.68）。与空白对照组比较,气道重塑组大鼠BALF中MMP-9、MMP-2、VEGF的浓度均增高,差异有显着性（P<0.01）。与气道重塑组比较,气道重塑+JWH133组大鼠BALF中MMP-9、MMP-2、VEGF的浓度明显降低,差异有显着性（P<0.01）。与气道重塑组比较,气道重塑+SR14452组大鼠BALF中MMP-9、MMP-2、VEGF的浓度升高,差异无显着性（P>0.05）。（4）Western Blot检测各组大鼠肺组织MMP-9、MMP-2、VEGF蛋白表达情况结果显示:上述因子蛋白表达经SDS-PAGE分析均有条带表达,空白对照组各因子灰度与内参灰度的比值依次为MMP-9（0.56±0.36）,MMP-2（0.9±0.17）,VEGF（0.95±0.24）。气道重塑组各因子灰度与内参灰度的比值依次为MMP-9（1.04±0.32）,MMP-2（1.7±0.34）,VEGF（1.75±0.41）。气道重塑+JWH133组各因子灰度与内参灰度的比值依次为MMP-9（0.52±0.36）,MMP-2（1.07±0.41）,VEGF（1.14±0.58）。气道重塑+SR144528组各因子灰度与内参灰度的比值依次为MMP-9（1.31±0.55）,MMP-2（1.78±0.44）,VEGF（1.87±0.68）。与空白对照组比较,气道重塑组大鼠肺组织MMP-9、MMP-2、VEGF蛋白表达均高,差异有显着性（P<0.01）。与气道重塑组比较,气道重塑+JWH133组大鼠肺组织MMP-9、MMP-2、VEGF蛋白表达明显降低,差异有显着性（P<0.01）。与气道重塑组比较,气道重塑+SR144528组大鼠肺组织MMP-9、MMP-2、VEGF蛋白表达高,差异无显着性（P>0.05）。结论:1、用卵蛋白腹腔注射致敏大鼠并雾化56天,可以导致大鼠气道重塑样改变。2、大麻素受体激动剂JWH133可以减轻卵蛋白气道重塑大鼠的肺组织损伤3、下调MMP-9、MMP-2、VEGF表达有可能是大麻素受体激动剂JWH133减轻气道重塑大鼠肺损伤的机制之一。
夏瑶丹[3]（2021）在《银甘汤对TGF-β1重组腺病毒载体诱导小鼠肺纤维化的干预机制研究》文中指出特发性肺纤维化属于纤维化性间质性肺炎的一种,其形成原因不明,呈慢性、进行性发展,病死率较高。临床患者主要症状表现为咳嗽以及进行性呼吸困难,在现代已研究出的药物治疗下,患者的症状能够得到改善,而疾病却无法完全治愈,同时这些西药也有一定的副作用。目前肺移植是最有效的治疗方法,但器官来源和移植费用使得此种方法难以推广。因此,中医药治疗对肺纤维化的症状改善存在显着优势,对中医药作用机制的研究也值得不断探讨。既往研究发现,免疫炎性作用在肺纤维化的发生发展过程中扮演重要角色,而TGF-β1是目前发现的最重要的致肺纤维化因子。Sime等首次利用腺病毒载体将TGF-β1转入大鼠体内,成功复制出肺纤维化模型。根据以上条件,本研究以TGF-β1重组腺病毒载体诱导的肺纤维化模型小鼠为研究对象,观察银甘汤对小鼠肺纤维化的影响,研究炎性因子的表达,探讨可能的作用机制,继而为临床治疗提供理论依据。研究目的建立TGF-β1重组腺病毒载体诱导的小鼠肺纤维化模型,观察模型制备的成功与否,从BRP-39、IL-17、IL-13等免疫炎性因子角度探讨银甘汤对肺纤维化小鼠的干预机制。研究方法通过气管滴注TGF-β1重组腺病毒载体的方式,制备肺纤维化小鼠模型。将C57BL/6小鼠随机分为空白组、空载体组、模型组和银甘汤组,从造模第二天开始（标记为第1天）,空白组、空载体组和模型组予生理盐水灌胃,银甘汤组予银甘汤灌胃,灌胃持续28天。28天后取材,分别留取小鼠肺组织和血液。肺组织利用HE染色和Masson染色,检测观察肺组织炎症浸润和胶原纤维增生程度。利用RT-qPCR检测肺组织TGF-β1、BRP-39、IL-17 mRNA 水平,利用 ELISA 测定血清 TGF-β1、BRP-39、IL-17、IL-13 蛋白含量。研究结果1.病毒滴度:TGF-β1重组腺病毒载体滴度为1.61x1011PFU/mL,腺病毒空载体滴度为 1.29x1011PFU/mL。2.肺组织形态学表现:空白组和空载体组小鼠肺组织结构正常;模型组肺组织可见较多炎性细胞浸润和胶原纤维增生,肺泡间隔增宽以及有片状实变;银甘汤组肺组织炎性细胞浸润情况和胶原纤维增生程度较模型组减轻。3.TGF-β1 mRNA和蛋白表达情况:与空白组和空载体组比较,模型组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均上调（P<0.01）;与模型组比较,银甘汤组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均下降（P<0.01）。4.BRP-39、IL-17、IL-13mRNA和蛋白表达情况:与空白组和空载体组比较,模型组IL-17 mRNA水平升高（P<0.01）;BRP-39和IL-17蛋白表达水平升高（P<0.05）;BRP-39mRNA和IL-13蛋白表达水平均有所升高,但无统计学差异（P>0.05）。与模型组比较,银甘汤组IL-17mRNA水平降低（P＜0.01）;BRP-39和IL-17蛋白表达水平降低（P<0.05）;BRP-39mRNA和IL-13蛋白表达水平亦有所降低,但无统计学差异（P>0.05）。研究结论1.利用气管滴注TGF-β1重组腺病毒载体诱导的小鼠肺纤维化模型制备成功。2.银甘汤在一定程度上可以下调TGF-β1重组腺病毒载体诱导的小鼠肺组织和血清TGF-β1、BRP-39、IL-17、IL-13水平,从而抑制肺纤维化。
王娜[4]（2020）在《cGAS-STING通路介导百草枯中毒急性肺损伤的作用机制研究及熊果酸的治疗作用》文中进行了进一步梳理目的:百草枯（PQ）是一种高效、廉价的除草剂,与土壤接触后可迅速失活,植物体内很少残留,如能正常使用,则安全性高,且环境污染少,有利于可持续农业的发展。然而,因偶然摄入或蓄意自杀所致的PQ中毒事件,在临床上却屡见不鲜,在世界范围内口服农药自杀事件中也非常常见,且致死率很高,严重中毒后存活率不足50%。由于其中毒机制迄今不明,没有特效解毒剂,其中毒后给人们带来的危害不可忽视。PQ中毒可导致多种器官功能障碍,且以肺损伤最为严重,中毒早期以急性肺损伤及急性呼吸窘迫综合征为主要表现,也是中毒早期主要的死亡原因。目前研究认为,氧化损伤及免疫炎症反应在PQ中毒发病过程中的作用不可估量,但具体分子机制不明。PQ中毒可以引起细胞DNA损伤。正常情况下,在真核细胞中,只有细胞核和线粒体中存在DNA,它是遗传信息的载体,对维持机体生命活动至关重要。当组织细胞损伤时导致遗传物质外漏,易位的self-DNA异常增多,可以作为损伤相关分子模式（DAMPs）而存在,是诱发免疫炎症反应的重要原因,也是导致肺部炎症损伤的重要因素。线粒体DNA（mtDNA）是self-DNA的重要成员之一,其在PQ中毒发病机制中的重要性已得到认可。近年来,细胞内DNA感应通路cGAS-STING信号通路,在介导self-DNA所致机体免疫炎症疾病中的重要作用,受到广大学者的关注。熊果酸（UA）,是一种五环三萜类化合物,具有抗炎、抗氧化、保护线粒体功能、修复DNA损伤等重要作用,可以减轻LPS引起的小鼠急性肺损伤及脓毒症大鼠肺损伤。我们的实验旨在探索UA对PQ中毒小鼠急性肺损伤的治疗作用,并证实这一作用的发挥,与抑制cGAS-STING信号通路相关。研究方法:一、动物模型的建立C57BL/6J小鼠,SPF级,雄性,体重18-22g。一次性腹腔注射PQ 30mg/kg,构建急性肺损伤模型。二、细胞模型的建立RAW264.7小鼠巨噬细胞,用含10%热灭活胎牛血清的DMEM高糖培养基培养。以不同浓度PQ处理细胞,并结合CCK8实验筛选最佳药物处理浓度。三、STING-IRF3信号通路介导PQ中毒急性肺损伤的研究1、分别在PQ给药后2、12、24和48 h采集标本。通过检测肺组织中MDA和SOD表达水平,评估肺组织氧化损伤。分别用RT-qPCR、western blot、ELISA法检测肺组织或血清中Sting、Irf3、Ifnβ的mRNA或蛋白表达水平。2、在PQ给药后1 h,予小鼠腹腔注射地塞米松5 mg/kg（日一次）治疗。染毒后观察48 h,采集标本。HE染色观察肺组织病理变化,计算肺组织湿重/干重（W/D）比值评估肺水肿程度,免疫组化法观察STING、IRF3在肺组织的表达情况,RT-qPCR、western blot、ELISA法分别检测地塞米松治疗后,肺组织或血清中Sting、Irf3、Ifnβ的mRNA或蛋白表达水平。3、以小干扰RNA靶向沉默RAW264.7细胞中Sting、Irf3的表达。于PQ染毒后24 h,分别用免疫荧光、RT-qPCR、western blot、ELISA法观察RAW264.7细胞中或细胞上清中Sting、Irf3、Ifnβ的mRNA或蛋白表达水平。四、TBK1参与STING-IRF3信号通路介导PQ中毒急性肺损伤的研究1、在PQ染毒前3日开始给予小鼠氨来占诺100 mg/kg日一次灌胃。在PQ染毒后72 h收集标本。用HE染色及肺泡灌洗液蛋白浓度测定评估肺组织病理损伤情况,活性氧（ROS）检测评估肺组织氧化损伤情况,免疫组化法观察肺组织NF-κBp65、IRF3的表达分布情况,western blot检测肺组织细胞浆蛋白中STING、TBK1、pTBK1及细胞核蛋白中NF-κBp65、IRF3的表达水平,RT-qPCR、ELISA法检测肺组织或肺泡灌洗液中Il-1β、Ifnβ的mRNA或蛋白表达水平。2、利用CCK8实验筛选氨来占诺处理RAW264.7细胞的最佳浓度。ROS检测评估RAW264.7细胞氧化损伤情况,免疫组化法观察NF-κBp65、IRF3在RAW264.7细胞的表达分布情况,western blot检测RAW264.7细胞的胞浆蛋白中STING、TBK1、pTBK1及细胞核蛋白中NF-κBp65、IRF3的表达,RT-qPCR、ELISA法检测RAW264.7细胞或细胞上清中Il-1β、Ifnβ的mRNA或蛋白表达水平。五、UA通过抑制cGAS-STING通路缓解PQ中毒小鼠急性肺损伤的研究1、在PQ染毒前1日开始给予小鼠UA 50 mg/kg日一次灌胃。在PQ染毒后72h收集标本。测量小鼠体重变化,HE染色观察肺组织病理变化,计算肺组织W/D比值评估肺水肿程度,DHE染色观察肺组织氧化损伤情况,定量检测肺泡灌洗液及血清中dsDNA的水平并利用real-time PCR鉴别dsDNA的来源,western blot检测肺组织cGAS、STING、TBK1、pTBK1、IRF3、pIRF3的表达,ELISA法检测肺泡灌洗液及血清中IFNβ的表达。2、利用CCK8实验筛选UA处理RAW264.7细胞的最佳药物浓度。DHE染色观察RAW264.7细胞氧化损伤情况,定量检测细胞培养上清中dsDNA的水平并利用real-time PCR鉴别dsDNA的来源,western blot检测cGAS、STING、TBK1、pTBK1、IRF3、pIRF3的表达,ELISA法检测细胞培养上清中IFNβ表达水平。结果:1、PQ诱发小鼠肺组织病理改变及W/D比值增高,肺组织及RAW264.7细胞中STING、IRF3（p IRF3）及IFNβ的表达水平增多,STING发生细胞核周聚集,IRF3出现细胞核内转移。地塞米松降低PQ染毒小鼠肺组织中STING、IRF3（pIRF3）及IFNβ的表达水平。靶向抑制细胞中Sting的表达,可以抑制IRF3的活化,减少IFNβ表达。靶向抑制细胞中Irf3的表达,对STING无明显影响,但可抑制IFNβ表达。2、PQ作用于小鼠肺组织及RAW264.7细胞后,伴随STING-IRF3通路的活化,出现pTBK1/TBK1水平增多。TBK1的抑制剂氨来占诺,可以抑制TBK1、NF-κBp65及IRF3的活化,减少IL-1β及IFNβ表达,减轻PQ中毒小鼠肺组织的病理及氧化损伤,减少肺泡灌洗液中蛋白浓度,但对STING无明显影响。3、PQ作用于小鼠肺组织及RAW264.7细胞后,肺泡灌洗液、血清、细胞培养上清中dsDNA（包括nDNA及mtDNA）的表达量增多。肺组织及RAW264.7细胞中cGAS的表达量增多,其下游STING、pTBK1/TBK1、p IRF3/IRF3表达水平增多,肺泡灌洗液、血清及细胞培养上清中IFNβ表达量增多。UA可以有效缓解上述情况,减轻中毒小鼠肺组织的病理及氧化损伤,延缓小鼠体重减轻。结论:1、STING-IRF3信号通路介导了PQ中毒小鼠急性肺损伤。2、TBK1对PQ中毒急性肺损伤时STING-IRF3信号通路的激活起了重要作用。TBK1抑制剂氨来占诺,可以改善PQ中毒小鼠急性肺损伤。3、dsDNA（包括mtDNA及nDNA）参与了PQ中毒急性肺损伤。cGAS-STING信号通路在PQ中毒急性肺损伤过程中发挥了重要作用。UA可以减少PQ中毒急性肺损伤时dsDNA的表达,抑制cGAS-STING信号通路的活化,改善PQ中毒小鼠急性肺损伤。
孙熙桐[5]（2020）在《健脾化痰、解毒护肺方对PM2.5颗粒致大鼠肺损伤的干预效果及机制研究》文中指出目的:探究“健脾化痰、解毒护肺”方对南京市城区近地面层与燃煤火电厂两种来源的P M2.5所致肺损伤的干预效果及机制,为防治PM2.5提供治疗靶点及新思路,并为临床应用本方提供科学依据。方法:实验一:收集两种PM2.5颗粒并用WD-XRF法分析其成分。实验二:将45只大鼠随机分成空白组、城市模型组、电厂模型组、城市中药高剂量组、城市中药低剂量组、电厂中药高剂量组、电厂中药低剂量组、城市西药组、电厂西药组,各组均5只。将采集好的两种PM2.5颗粒配置成混悬液,分别对相应分组大鼠进行染毒,持续3周;空白对照组于模型建立当日起经鼻腔滴入0.9%氯化钠溶液,持续3周。染毒结束后,予城市/电厂中药低剂量组低浓煎剂、城市/电厂中药高剂量组高浓煎剂、城市/电厂西药组7.5%盐酸氨溴素口服液灌胃,给药量为每只3ml/日;空白组和模型组每日予生理盐水灌胃,每只3ml/日;连续给药9天。给药结束后制作肺组织切片,采集血清并检测IFN-γ、MDA、AP-1、NF-κB表达水平,提取肺组织中RNA及总蛋白,检测HO-1mRNA,Nrf 2、TGF-β、Smad2 蛋白水平。结果:实验一结果:城市PM2.5颗粒样本中氧元素（O）占比约44.3%;钙、铁、铝、镁、钠、钾等数种金属元素共占约30.64%;非金属元素硅占约21.05%、硫占约2.34%;电厂PM2.5颗粒中氧元素占比96.66%,以及可检测出少量金属元素与少量氯元素,两种PM2.5样本成分构成差异较大。实验二结果:两种模型大鼠血清中AP-1、MDA水平均显着上升,城市模型血清中IFN-γ、NF-κB显着上升（P<0.05）;与相应模型组比较,城市中药低剂量组、城市西药组血清中IFN-γ、MDA、AP-1、NF-κB及城市中药高剂量组MDA、AP-1水平均有下降（P<0.05）;电厂西药组血清中MDA水平显着降低（P<0.01）;两模型组大鼠肺组织中Smad、TGF-β、Nrf2、HO-1 mRNA的表达水平较空白组呈损伤性改变（P<0.01）;各药物组较相应模型组则呈不同程度的良性改变（P<0.05）.结论:健脾化痰、解毒护肺”方可以通过Keap1/Nrf2/ARE、AP-1/Smad/TGF-β、NF-κB等多条通路增强机体的抗氧化能力,抑制IFN-y介导的炎症损伤,从而减轻PM2.5对肺组织的损害。城区综合PM2.5颗粒可以通过多种炎症通路及氧化应激通路损伤呼吸道,而火电厂PM2.5颗粒对呼吸系统的损伤机制主要通过AP-1/Smad/TGF-β通路介导的氧化应激损伤为主。“健脾化痰、解毒护肺”方与盐酸氨溴索分别对两种PM2.5颗粒引发的肺损伤状态干预效果不同,因此应对不同来源的PM2.5颗粒应制定相应治疗方案,以期疗效。
薛洁[6]（2020）在《镉暴露HeLa细胞调控HMOX1表达的启动子活化区域和转录因子研究》文中指出目的:金属镉可以通过食物链进入人体并在人体中蓄积。金属镉也可以与体内的巯基蛋白结合导致蛋白功能丧失,引起氧化应激、凋亡、坏死等。HMOX1基因在体内目前多数研究认为是保护因子的一种,在抗炎、抗氧化应激以及免疫调节方面起到至关重要作用。本文研究Cd2+处理的HeLa细胞中调控HMOX1表达的启动子活化区域,初步鉴定转录因子。以期理解在女性生殖系统中抗Cd2+毒性机制中HMOX1转录调节的机制。同时该研究也为临床上以后治疗Cd2+引起氧化应激相关的疾病提供依据。方法:通过普通PCR和Western Blot分别检测0?mol/L、1?mol/L、2?mol/L、5?mol/L、10?mol/L、20?mol/L、50?mol/L Cd2+处理HeLa细胞后HMOX1分别在mRNA与蛋白水平的变化;用构建载体PGL6-HMOX1-846转染HeLa细胞24小时后用不同浓度氯化镉处理,12小时,通过报告基因确定后续实验的最适Cd2+浓度;用PGL6为载体构建系列启动子报告基因,通过系列报告基因检测鉴定HMOX1启动子的活化区域,初步确定启动子的活化区域;根据活化区域预测转录因子,设计对应引物,通过普通PCR初步鉴定HMOX1的转录因子。结果:（1）Cd2+处理的HeLa细胞模型中和对照组相比,10?mol/L、20?mol/L、50?mol/L Cd2+处理的HeLa细胞,HMOX1在mRNA与蛋白水平的变化差异均有统计学意义（P<0.05）;（2）报告基因检测确定最适Cd2+浓度为10?M;（3）报告基因检测逐步发现:和HMOX1-577+92启动子活性相比,逐步发现HMOX1-587+92和HMOX1-567+92的活性升高（P<0.05）,说明HMOX1启动子片段-577-567和-587-577分别存在抑制性和激活性转录因子结合位点;（4）和PGL6相比,HMOX1启动子片段在-272-28活性均显着升高（P<0.05）,而启动子片段在-14+29活性均无明显变化（P>0.05）,说明HMOX1启动子片段在-28-14存在激活性转录因子结合位点;（5）突变启动子报告基因发现:与PGL6-HMOX1-272+92相比,HMOX1启动子片段-28-26和-19-11突变后启动活性均显着降低（（49）<0.05）,说明在该位置上可能存在HMOX1激活性转录因子结合位点;（6）根据启动子活化区域-30-10的碱基序列预测可能的转录因子,通过普通PCR初步验证转录因子为MYC。结论:一定浓度Cd2+处理宫颈癌细胞后,HMOX1基因在蛋白和mRNA水平表达均上调;HMOX1启动子片段-587-577和-577-567分别存在激活性和抑制性转录因子结合位点;HMOX1启动子片段在-30-10内存在激活性转录因子结合位点且通过这个片段初步研究转录因子为MYC。
郭荣[7]（2020）在《Toll样受体信号传导通路对硒缺乏雏鸡脾脏炎性损伤的影响》文中进行了进一步梳理硒是动物机体维持正常生理活动中的必需微量元素。Toll样受体（Toll like receptors,TLRs）是一类重要的模式识别受体（Pattern recognition receptors,PRRs）。其中,TLR4信号通路是一条重要的炎症因子调控通路,参与多种疾病的发生与调控。目前对硒缺乏致鸡脾脏炎性损伤机制的研究较少,尤其是关于TLR如何参与硒缺乏雏鸡脾脏的炎性损伤机制尚不明确。因此,本试验从TLR及其信号传导的角度对硒缺乏雏鸡脾脏炎性损伤的机制进行了研究。首先,将200只1日龄健康肉鸡随机分为试验组和对照组。试验组鸡饲喂自配低硒饲料,对照组鸡饲喂全价配合饲料,分别于鸡15、25、35、45、55日龄时采取脾脏,应用组织病理学及超微病理学方法观察脾脏病理形态结构变化;实时荧光定量PCR方法检测脾脏8种ChTLRs（ChTLR1、ChTLR2、ChTLR3、ChTLR4、ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15和ChTLR21）、My D88、TRIF、NF-κB及细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-2和IFN-γ）mRNA表达变化;Western blot方法检测ChTLR4蛋白表达变化;主成分分析法分析8种ChTLRs与衔接蛋白My D88、TRIF之间的相关性。病理形态学结果显示,试验组雏鸡脾脏组织红髓和白髓分界不清,淋巴细胞数量减少,细胞核形状不规则,核内染色质分布不均,核膜破裂;线粒体肿胀,嵴紊乱、断裂;内质网肿胀。实时荧光定量PCR结果显示,在15、25、35、45、55日龄雏鸡脾脏中8种ChTLRs均有所表达,但表达量存在差异。与对照组相比,实验组雏鸡ChTLR1、ChTLR2、ChTLR3 mRNA的相对表达量先升高后降低,ChTLR5、ChTLR7、ChTLR15 mRNA的相对表达量降低,ChTLR21 mRNA的相对表达量先降低后升高,而在15-45d,ChTLR4 mRNA的相对表达量及蛋白表达均高于对照组,且在15 d差异极显着（P<0.01）。试验组雏鸡TRIF mRNA的相对表达量在25-55 d高于对照组,NF-κB及IL-6 mRNA的相对表达量在15-45 d高于对照组。Western blot结果显示,在15-45 d ChTLR4蛋白表达量与对照组相比显着升高（P<0.01）。主成分分析结果显示ChTLR4和TRIF有很强的相关性。之后,又以鸡巨噬细胞HD11细胞为研究对象,将HD11细胞的ChTLR4基因沉默后,观察HD11细胞内ChTLR4及其通路分子mRNA表达情况。结果发现,ChTLR4 siRNA转染至HD11细胞后,细胞内ChTLR4、IL-6和NF-κB mRNA表达水平与试验组相比均显着下调（P<0.05）。TRIF siRNA转染至HD11细胞后,细胞内IL-6、TRIF和TNF-αmRNA表达水平与试验组相比均显着下调（P<0.05）。综上,ChTLR4在调节硒缺乏雏鸡脾脏炎性细胞因子表达过程中起着重要的作用,硒缺乏可通过ChTLR4/TRIF/NF-κB信号通路引起雏鸡脾脏炎性损伤。本研究从分子水平阐述了硒缺乏雏鸡脾脏免疫损伤发病机制,丰富了雏鸡硒缺乏免疫损伤的理论研究内容,为有效防治禽类代谢性疾病提供重要的科学依据。
郑冲,张人华,赵大志,刘利亚,刘佳,林野[8]（2019）在《氟乙酰胺经miR-223及TLR4-NF-κB信号通路诱导的大鼠急性肺损伤》文中认为目的探讨氟乙酰胺诱导大鼠急性肺损伤的分子作用机制。方法将40只健康成年SPF级SD大鼠按照体重随机分成4组,分别为对照（去离子水）组和4.0、6.0、9.0 mg/kg氟乙酰胺染毒组,每组10只,雌雄各半。采用一次性灌胃方式进行染毒,染毒容量为20 ml/kg。24 h后,进行肺损伤评分,测定动脉氧分压（PaO2）以及肺组织miR-223、TLR4、NF-κBp65mRNA和TLR4、NF-κBp65、IL-2、TNF-α蛋白的表达水平。结果与对照组比较,各剂量氟乙酰胺染毒组大鼠肺损伤评分升高,而PaO2水平降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;且随着氟乙酰胺染毒剂量的升高,大鼠肺损伤评分呈上升趋势,而PaO2水平呈下降趋势。与对照组比较,各剂量氟乙酰胺染毒组大鼠肺组织miR-223、TLR4、NF-κBp65 mRNA和TLR4、NF-κBp65、IL-2、TNF-α蛋白的表达水平升高,差异均有统计学意义（P<0.05）;且随着氟乙酰胺染毒剂量的升高,大鼠肺组织miR-223、TLR4、NF-κBp65 mRNA和TLR4、NF-κBp65、IL-2、TNF-α蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论氟乙酰胺可诱导大鼠急性肺部炎症反应,其机制与氟乙酰胺上调miR-223表达和激活TLR4-NF-κB炎症信号通路有关。
孙雪倩,邱玉保,吴晨,陈丹,吴亚先,庞庆丰[9]（2019）在《血红素加氧酶-1对小鼠海水淹溺性肺损伤的保护作用》文中研究指明目的 探讨血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1, HO-1）对小鼠海水淹溺性肺损伤的保护作用,为海水淹溺性肺损伤的治疗提供新方法。方法 48只健康成年雄性BALB/c小鼠按随机数字表法分为正常对照组（n＝8）、锌原卟啉（zinc protoporphyrin, ZnPP）处理组（n＝8）、海水淹溺组（3、7、15 d,n＝24）、海水淹溺＋ZnPP处理组（n＝8）。将小鼠沉浸于水深为6 cm的人工海水中28 s[(水温（25±2） ℃]后取出并及时进行心肺复苏,建立小鼠海水淹溺模型。观察小鼠肺组织大体形态,检测肺湿干质量比、血清乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）水平,观察肺组织病理形态变化、肺纤维化情况、肺上皮细胞凋亡与增殖水平,检测肺组织中HO-1的蛋白表达与活性。结果 海水淹溺3 d和7 d后肺组织出现出血,肺湿干质量比和血清LDH水平较正常对照组明显升高（P<0.05）,SOD水平较正常对照组明显降低（P<0.05）,肺泡腔破坏、肺泡壁增厚、红细胞与炎性细胞浸润,肺组织中HO-1的蛋白表达与活性水平较正常对照组明显升高（P< 0.05）,正常对照组、海水淹溺3 d组和海水淹溺7 d组HO-1蛋白表达分别为（0.313±0.027）、（0.604±0.092）和（0.945±0.252）,HO-1活性分别为（75.0±45.6）、（220.0±109.5）和（350.0±218.9）；海水淹溺15 d后,以上病理变化均明显减轻,较正常对照组无明显差异（P>0.05）,肺组织中HO-1的蛋白表达（1.367±0.284）较正常对照组仍明显增加（P<0.05）,而HO-1活性（125.0±50.0）较正常对照组无明显差异（P>0.05）；ZnPP处理组肺组织中HO-1的蛋白表达（1.192±0.341）较海水淹溺组（1.070±0.119）无明显差异（P>0.05）,而HO-1活性水平（40.0±22.4）较海水淹溺组（135.0±51.8）明显降低（P<0.05）,与海水淹溺组比较,ZnPP处理组以上病理变化均明显加重（P<0.05）,肺纤维化、肺上皮细胞凋亡程度增加（P<0.05）,肺上皮细胞增殖减少。结论 HO-1可以通过发挥其酶活性减轻小鼠海水淹溺性肺损伤,在肺组织自身修复过程中发挥重要作用。
李有幸[10]（2019）在《氯化镉对大鼠免疫毒性及Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡影响的研究》文中认为第一部分亚慢性镉暴露对SD大鼠的免疫毒性效应目的:建立动物染毒模型,观察亚慢性镉暴露对SD大鼠血常规、肝肾功能指标的影响及肝、肾、肺、胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结的病理学改变,探讨长期低剂量镉暴露对机体的免疫毒性效应。方法:选择SD大鼠40只,雌雄各半,平均体重（284.71±55.95）g,随机分为4组:对照组（ddH2O）、CdCl275 mg/L组、150 mg/L组、300 mg/L组。常规喂养标准饲料,自由采食和饮水,其中对照组饮用纯双蒸水,染镉组饮用含CdCl2双蒸水,连续染毒9个月,每周称量大鼠体重并记录。实验结束后,麻醉处死并行腹主动脉采血,采血后取肝、肾、肺、胸腺、脾脏、肠系膜淋巴结等脏器,称重及计算其脏器系数,将部分组织进行染色及切片,观察和分析各脏器组织的病理学改变。采用全自动血常规检测仪、全自动生化分析仪分别检测血常规及肝肾功能指标。结果:（1）各剂量组大鼠体重随时间增长呈递增趋势（P<0.05）,但各时间周期各组间大鼠体重差异均无统计学意义（P>0.05）;各剂量组肝、肾、肺、脾的脏器质量及脏器系数差异均无统计学意义（P>0.05）,75 mg/L、150 mg/L剂量组的胸腺质量和脏器系数明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）;（2）血常规指标检测结果显示:与对照组比较,300 mg/L剂量组的WBC、LYMPH、PLT均明显升高（P<0.05）,150mg/L、300 mg/L剂量组的HGB明显下降（P<0.05）;与75 mg/L剂量组比较,300 mg/L剂量组的WBC、PLT均明显升高（P<0.05）;肝肾功能指标检测结果显示:与对照组比较,150 mg/L剂量组的AST、UREA、UA和300 mg/L剂量组的ALT、AST、UREA、CREA、UA均明显升高（P<0.05）;与75 mg/L剂量组比较,150 mg/L剂量组的UA和300 mg/L剂量组的ALT、AST、UREA、CREA均明显升高（P<0.05）;（3）组织病理学检查结果显示,各组大鼠肝组织出现不同程度的淤血、水肿、坏死和增生,肾组织近曲小管上皮细胞不同程度的肿胀、空泡变性及坏死;肺组织局灶性肺间质纤维增生、间隔增宽、间质血管闭塞、消失、肺泡腔变小;胸腺和肠系膜淋巴结淋巴滤泡反应性增生,滤泡生发中心扩大、吞噬细胞增多;脾脏白髓萎缩,动脉周围淋巴鞘及边缘区淋巴细胞减少,红髓血窦扩张、淤血,吞噬细胞增多,300 mg/L剂量组的红髓出现部分纤维化;肝、肾、肺、胸腺、脾脏及肠系膜淋巴结病变程度随染毒剂量增加而逐渐加重。结论:（1）亚慢性镉暴露能够引起大鼠肝肾功能及肝、肾、肺组织不同程度的损害。（2）亚慢性镉暴露能够引起大鼠血常规指标改变及胸腺、脾、淋巴结组织不同程度的损害,提示亚慢性镉暴露对机体具有免疫毒性效应。第二部分氯化镉对Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡的影响目的:越来越多的证据表明镉可诱导自身免疫性疾病的发生,但其机制尚未清楚。本研究主要在细胞和动物水平上检测氯化镉暴露后CD4+T淋巴细胞Th1/Th2/Th17/Treg四种亚群细胞主要转录因子及相关细胞因子的表达变化,共同探讨镉对Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡的影响及其在诱导自身免疫性疾病中所起的作用。方法:（1）本实验采用Jurkat T淋巴细胞作为体外实验研究对象,用不同浓度（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L）Cd Cl2对Jurkat T淋巴细胞染毒24h、48h、72h,观察各组细胞的生长方式和形态学改变,用CCK8试剂盒检测各组细胞的增殖抑制情况,参考相关文献及半抑制率（IC50）的结果,选用（0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L）Cd Cl2浓度对Jurkat T淋巴细胞进行染毒实验,染毒时间为24h、48h、72h。染毒结束后,提取细胞RNA,逆转录合成c DNA,采用Real-time PCR技术检测Th1/Th2/Th17/Treg细胞主要转录因子T-bet、GATA3、RORC、Foxp3及相关细胞因子TGF-β、IL-6、IL-16、IL-23的m RNA表达变化。（2）将第一部分SD大鼠的外周血作为实验对象,采用ELISA试剂盒检测血浆中Ig G、Ig M抗体浓度及细胞因子IL-1α、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17A、IL-17F、TNFa的蛋白表达变化;外周血中提取RNA,检测Th1/Th2/Th17/Treg细胞主要转录因子T-bet、GATA3、RORc、Foxp3及相应细胞因子IFN-r、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A、IL-17F、IL-22、IL-10、TGF-β的m RNA表达变化。结果:1、Real-time PCR检测Jurkat T淋巴细胞各基因m RNA表达的结果显示:与对照组比较,各染毒时间段各剂量组的T-bet、GATA3、RORc表达均未出现明显改变（P>0.05）,染毒72h后各剂量组的Foxp3表达均下降（P<0.05）,染毒72h后各剂量组的TGF-β表达均下降（P<0.05）,各染毒时间段20μmol/L剂量组的IL-6表达均出现升高（P<0.05）,各染毒时间段各剂量组的IL-16表达均未出现明显改变（P>0.05）,染毒72h后各剂量组的IL-23表达均升高（P<0.05）。2、（1）ELISA检测SD大鼠外周血抗体和细胞因子蛋白表达的结果显示:与对照组比较,300 mg/L剂量组的Ig G抗体浓度出现升高（P<0.05）,150 mg/L、300 mg/L剂量组的IL-1α表达均升高（P<0.05）,各剂量组的IL-6表达均升高,各剂量组的IL-1β、IL-4、IL-5、IL-17F、TNFa表达未出现明显改变（P>0.05）,300 mg/L剂量组的IL-17A表达升高（P<0.05）。（2）Real-time PCR检测SD大鼠外周血各基因m RNA表达的结果显示:与对照组比较,各剂量组的T-bet表达未出现明显改变（P>0.05）,150mg/L剂量组的GATA3表达升高（P<0.05）,150 mg/L、300 mg/L剂量组的RORc表达均升高（P<0.05）,各剂量组的Foxp3表达均下降（P<0.05）,各剂量组的RORc/Foxp3比例均升高（P<0.05）,各剂量组的IFN-r、IL-2、IL-22表达均未出现明显改变（P>0.05）,300 mg/L剂量组的IL-4表达下降（P<0.05）,300 mg/L剂量组的IL-6、IL-17A、IL-17F表达均升高（P<0.05）,各剂量组的IL-10表达均下降（P<0.05）;150 mg/L、300 mg/L剂量组的TGF-β表达均下降（P<0.05）。结论:（1）镉暴露能够引起Jurkat T淋巴细胞及大鼠外周血Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡失衡,主要以Th17/Treg细胞比例上调为主。（2）镉暴露引起的Th17/Treg细胞失衡,可能会增加镉诱导自身免疫性疾病发生的风险。
二、镉中毒致肺损伤的病理形态学观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、镉中毒致肺损伤的病理形态学观察（论文提纲范文）
（1）特种危险化学品事故紧急救援与处置关键技术创新研发与应用（论文提纲范文）
| 一、特种危险化学品突发事故现场紧急救援与处置技术 |
| 二、创新地将国际上危险化学品事故救治指南与我国中西医结合治疗特色两者有机地结合起来 |
| 三、研制具有自主知识产权的系列中药 |
| 四、数不清的狭窄空间意外造成了非常惨痛的人员伤亡 |
| 五、针对光气具有剧毒并可作为化学武器使用，首次建立更稳定的大鼠光气吸入性肺损伤模型 |
| 六、在国际上首创通过生物激波管及吸入中毒建立冲毒复合伤动物模型，并进一步成功复制急性化学性肺损伤动物模型，在基础研究方面有较大突破 |
| 七、经多年来临床实践证实，提高了危险化学品事故卫生应急医疗救援效率，尤其是卫生应急较为薄弱的地市级和农村地区 |
| 八、总结 |
（2）CB2受体激动剂JWH133和抑制剂SR144528对卵蛋白诱导大鼠气道重塑的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验试剂 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物模型的制备 |
| 1.2.2 实验动物模型标本的采集及保存 |
| 1.2.3 肺组织病理学检查 |
| 1.2.5 Elissa检测支气管肺泡灌洗中 VEGF 浓度 |
| 1.2.5.1 试剂配制 |
| 1.2.5.2 检测步骤 |
| 1.2.6 Elissa检测支气管肺泡灌洗中 MMP-2 的浓度 |
| 1.2.6.1 试剂准备 |
| 1.2.6.2 检测步骤 |
| 1.2.7 Elissa检测支气管肺泡灌洗中 MMP-9 的浓度 |
| 1.2.8 WesternBlot检测肺组织中MMP-2、MMP-9、VEGF的蛋白表达水平 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 大鼠肺组织HE 染色病理形态学学分析 |
| 2.2 大鼠肺组织石蜡切片 Masson 染色胶原纤维结果 |
| 2.3 Elissa检测各组大鼠BALF中 MMP-2、MMP-9、VEGF的浓度 |
| 2.4 MMP-2、MMP-9、VEGFA 在各组大鼠肺组织中的蛋白表达 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 内源性大麻素抗肺纤维化的作用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 致谢 |
（3）银甘汤对TGF-β1重组腺病毒载体诱导小鼠肺纤维化的干预机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 肺纤维化的中医学研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 肺纤维化的免疫炎性机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 TGF-β1腺病毒载体的构建 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 参考文献 |
| 实验二 银甘汤对肺纤维化模型小鼠的干预作用 |
| 第一节 实验材料 |
| 第二节 实验方法 |
| 第三节 实验结果 |
| 第四节 讨论 |
| 第五节 小结 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 存在的不足与展望 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
| 个人简介 |
（4）cGAS-STING通路介导百草枯中毒急性肺损伤的作用机制研究及熊果酸的治疗作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :STING-IRF3信号通路介导百草枯中毒急性肺损伤 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 动物模型建立及分组 |
| 2.4 HE染色及肺损伤病理评分 |
| 2.4.1 HE染色 |
| 2.4.2 肺损伤病理评分 |
| 2.5 肺脏湿重/干重(W/D)比值 |
| 2.6 小鼠肺组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测定 |
| 2.6.1 MDA检测(硫代巴比妥酸反应法) |
| 2.6.2 SOD检测(黄嘌呤氧化酶法) |
| 2.7 细胞培养 |
| 2.8 细胞活性检测 |
| 2.9 细胞转染 |
| 2.10 逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR) |
| 2.10.1 RNA提取 |
| 2.10.2 cDNA合成 |
| 2.10.3 Real-time PCR |
| 2.11 免疫印迹实验(Western blot实验) |
| 2.11.1 样本蛋白的提取 |
| 2.11.2 蛋白浓度测定(BCA法) |
| 2.11.3 SDS-PAGE凝胶制备 |
| 2.11.4 电泳 |
| 2.11.5 转膜 |
| 2.11.6 抗原抗体反应 |
| 2.11.7 化学发光及结果分析 |
| 2.12 免疫组化实验 |
| 2.12.1 石蜡切片的制作 |
| 2.12.2 抗原修复 |
| 2.12.3 抗原抗体反应 |
| 2.12.4 显色反应 |
| 2.12.5 封片及图像采集 |
| 2.13 免疫荧光染色 |
| 2.13.1 细胞固定 |
| 2.13.2 细胞膜通透及抗原封闭 |
| 2.13.3 抗原抗体反应 |
| 2.13.4 DAPI染色 |
| 2.13.5 封片及图像采集 |
| 2.14 酶联免疫吸附试验(ELISA) |
| 2.14.1 标本采集 |
| 2.14.2 ELISA |
| 2.15 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠肺组织病理变化及W/D比值 |
| 3.2 小鼠肺组织MDA及SOD的表达变化 |
| 3.3 小鼠肺组织中Sting、Irf3和IfnβmRNA表达水平的变化 |
| 3.4 小鼠肺组织中STING及 IRF3的表达分布情况 |
| 3.5 小鼠肺组织中STING和 IRF3(p IRF3)蛋白表达水平的变化 |
| 3.6 小鼠血清中IFNβ表达水平的变化 |
| 3.7 RAW264.7小鼠巨噬细胞的活性 |
| 3.8 RAW264.7小鼠巨噬细胞中STING和 IRF3的表达分布 |
| 3.9 STING在PQ诱导IFNβ表达过程中的作用 |
| 3.10 IRF3在PQ诱导IFNβ表达过程中的作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :TBK1参与调节STING-IRF3通路介导的百草枯中毒小鼠急性肺损伤 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料及方法 |
| 2.1 材料及主要仪器设备 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 动物分组 |
| 2.4 HE染色及肺损伤病理评分 |
| 2.5 肺泡灌洗液蛋白浓度测定 |
| 2.6 细胞培养 |
| 2.7 细胞模型的药物处理浓度筛选及细胞分组 |
| 2.7.1 细胞模型的药物处理浓度筛选 |
| 2.7.2 细胞分组 |
| 2.8 肺组织及RAW264.7细胞中的活性氧(ROS)水平检测 |
| 2.8.1 肺组织ROS水平检测 |
| 2.8.2 RAW264.7细胞中ROS水平检测 |
| 2.9 免疫组化实验 |
| 2.9.1 组织免疫组化实验 |
| 2.9.2 细胞免疫组化实验 |
| 2.10 Western blot实验 |
| 2.10.1 细胞核蛋白及细胞浆蛋白分离 |
| 2.10.2 BCA法测蛋白浓度并标准化 |
| 2.10.3 Western blot实验 |
| 2.11 RT-q PCR实验 |
| 2.12 ELISA实验 |
| 2.13 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肺组织病理改变及肺泡灌洗液蛋白浓度 |
| 3.2 药物处理RAW264.7细胞的浓度筛选 |
| 3.3 肺组织ROS及炎性因子表达水平的变化 |
| 3.4 RAW264.7细胞ROS及炎性因子表达水平的变化 |
| 3.5 肺组织中NF-κBp65和IRF3的表达分布 |
| 3.6 RAW264.7细胞中NF-κBp65和IRF3的表达分布 |
| 3.7 肺组织及RAW264.7细胞的胞浆蛋白中TBK1、pTBK1的表达 |
| 3.8 肺组织及RAW264.7细胞的胞浆蛋白内STING的表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 :熊果酸通过抑制cGAS-STING通路缓解百草枯中毒小鼠急性肺损伤 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料及方法 |
| 2.1 实验试剂 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 动物分组 |
| 2.4 HE染色及肺损伤病理评分 |
| 2.5 肺脏湿重/干重(W/D)比值 |
| 2.6 细胞培养 |
| 2.7 CCK8实验及细胞分组 |
| 2.7.1 CCK8实验 |
| 2.7.2 细胞分组 |
| 2.8 DHE染色 |
| 2.8.1 组织DHE染色 |
| 2.8.2 细胞DHE染色 |
| 2.9 Real-time PCR实验检测mtDNA与nDNA |
| 2.9.1 样本采集 |
| 2.9.2 样本DNA的提取 |
| 2.9.3 Real time-PCR实验 |
| 2.10 双链DNA(dsDNA)的检测 |
| 2.10.1 样本采集 |
| 2.10.2 dsDNA的检测 |
| 2.11 Western blot实验 |
| 2.12 ELISA实验 |
| 2.13 统计方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 小鼠体重变化、肺组织病理改变和肺脏W/D比值 |
| 3.2 药物处理RAW264.7细胞的浓度筛选 |
| 3.3 小鼠肺组织和RAW264.7细胞的氧化损伤情况 |
| 3.4 小鼠肺泡灌洗液、血清及细胞培养上清液中dsDNA的表达 |
| 3.5 小鼠肺组织及RAW264.7细胞中c GAS的表达变化 |
| 3.6 小鼠肺组织及RAW264.7细胞中STING、TBK1(pTBK1)、IRF3(pIRF3)的表达变化 |
| 3.7 小鼠肺泡灌洗液、血清及细胞培养上清液中IFNβ的表达变化 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）健脾化痰、解毒护肺方对PM2.5颗粒致大鼠肺损伤的干预效果及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1.PM2.5成因及危害概述 |
| 1.1 PM2.5的概念 |
| 1.2 PM2.5污染的主要来源 |
| 1.3 各种污染物对呼吸系统的影响 |
| 2.我国传统医学中PM2.5致病理论的发展源流与研究进展 |
| 2.1 我国历代医学典籍中的“雾霾” |
| 2.2 当代中医对“雾霾”致病机制的研究进展 |
| 2.3 中医药治疗PM2.5致肺损伤的治法及组方研究进展 |
| 3.“健脾化痰、解毒护肺”方的组方背景及理论依据 |
| 3.1 组方背景 |
| 3.2 导师应用“健脾化痰、解毒护肺”方治疗雾霾引发肺损伤的理论依据及经验 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验目的 |
| 实验一 城区近地面层总PM2.5与火电厂排放源PM2.5的采集制备与分析 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 检测样本 |
| 1.2 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 两种PM2.5颗粒的采集与制备 |
| 2.2 PM2.5样品成分分析 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 实验二 “健脾化痰、解毒护肺”方干预PM2.5致肺损伤效果及机制研究 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 染毒剂 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 实验仪器与试剂 |
| 1.4 实验药品 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 两种染毒剂(PM2.5颗粒)的配制及染毒方法 |
| 2.3 给药方法 |
| 2.4 大鼠肺组织病理切片及评分标准 |
| 2.5 大鼠肺组织蛋白提取及Western Blot检测 |
| 2.6 检测肺组织中HO-1mRNA表达水平 |
| 2.7 ELISA法检测大鼠血清中IFN-γ、AP-1、MDA、NF-κB含量 |
| 2.8 统计学处理 |
| 3.结果 |
| 3.1 各组大鼠一般情况及体重增长率 |
| 3.2 各组大鼠肺组织病理变化及评分 |
| 3.3 各组大鼠血清中IFN-γ、MDA、AP-1、NF-κB含量 |
| 3.4 各组大鼠肺组织中Nrf2、TGF-β、Smad2蛋白的含量 |
| 3.5 各组大鼠肺组织中HO-1mRNA表达水平 |
| 4.讨论 |
| 4.1 本研究各检测指标的选择依据 |
| 4.2 两种PM2.5染毒大鼠模型的建立及评价 |
| 4.3 “健脾化痰、解毒护肺”方干预PM2.5致肺损伤的效果 |
| 4.4 “健脾化痰、解毒护肺”方干预PM2.5致肺损伤机制初探 |
| 4.5 对比中、西药对PM2.5致大鼠肺损干预效果而引发的思考 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
（6）镉暴露HeLa细胞调控HMOX1表达的启动子活化区域和转录因子研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 附录 A 英文缩略词 |
| 附录 B 常用试剂配制方法 |
| 附录 C 专业实践报告 |
| 附录 D 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 E 个人简历 |
（7）Toll样受体信号传导通路对硒缺乏雏鸡脾脏炎性损伤的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 硒的生物学作用 |
| 1.2 硒缺乏 |
| 1.3 Toll样受体信号通路 |
| 1.3.1 Toll样受体 |
| 1.3.2 衔接蛋白 |
| 1.3.3 细胞因子 |
| 1.4 炎性损伤 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物和细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要溶剂配制 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物模型建立及分组 |
| 2.2.2 脾脏病理组织学观察 |
| 2.2.3 脾脏病理超微结构观察 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR法检测脾脏中目的基因mRNA表达变化 |
| 2.2.5 Western Blot法检测脾脏中ChTLR4蛋白表达变化 |
| 2.2.6 HD11细胞培养及处理 |
| 2.2.7 CCK-8法检测细胞活力 |
| 2.2.8 细胞中GSH-Px活性检测 |
| 2.2.9 ChTLR4、TRIF siRNA对ChTLR4通路相关分子表达的影响 |
| 2.2.10 数据统计与分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 雏鸡临床症状及剖检变化 |
| 3.2 雏鸡脾脏脏器指数的变化 |
| 3.3 脾脏病理形态学观察结果 |
| 3.4 脾脏病理超微结构观察结果 |
| 3.5 实时荧光定量PCR检测结果 |
| 3.5.1 PCR扩增结果 |
| 3.5.2 曲线分析 |
| 3.5.3 雏鸡脾脏组织中ChTLRs的mRNA表达变化 |
| 3.5.4 雏鸡脾脏信号传导分子的mRNA表达变化 |
| 3.5.5 雏鸡脾脏细胞因子的mRNA表达变化 |
| 3.5.6 主成分分析结果 |
| 3.6 雏鸡脾脏ChTLR4蛋白的表达变化 |
| 3.7 HD11细胞活力变化 |
| 3.8 细胞GSH-Px活性检测结果 |
| 3.9 siRNA对ChTLR4通路相关分子表达的影响 |
| 3.9.1 siRNA转染条件的优化 |
| 3.9.2 siRNA干扰效果优化 |
| 3.9.3 HD11细胞目的基因mRNA表达变化 |
| 4 讨论 |
| 4.1 硒缺乏雏鸡模型建立 |
| 4.2 硒缺乏对雏鸡脾脏脏器系数的影响 |
| 4.3 硒缺乏对雏鸡脾脏病理变化的影响 |
| 4.4 硒缺乏对TLR通路的影响 |
| 4.5 硒缺乏对免疫细胞的影响 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
（8）氟乙酰胺经miR-223及TLR4-NF-κB信号通路诱导的大鼠急性肺损伤（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 主要仪器及试剂 |
| 1.2 实验动物分组及染毒方法 |
| 1.3 大鼠肺脏系数的测定 |
| 1.4 病理学观察 |
| 1.5 肺损伤评分、动脉O2分压（PaO2）的测定 |
| 1.6 肺组织miR-223、TLR4、NF-κB mRNA表达水平的测定 |
| 1.7 大鼠肺组织TLR4、NF-κB蛋白表达水平的测定 |
| 1.8 大鼠肺组织IL-2、TNF-α蛋白水平的ELISA法测定 |
| 1.9 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠肺脏重量及其脏器系数的测定结果 |
| 2.2 大鼠肺损伤评分、Pa O2水平的测定结果 |
| 2.3 大鼠肺组织损伤的病理学改变 |
| 2.4 大鼠肺组织miR-223、TLR4、NF-κBp65 mRNA表达水平的测定结果 |
| 2.5 大鼠肺组织TLR4、NF-κBp65蛋白表达水平的测定结果 |
| 2.6 大鼠肺组织IL-2、TNF-α蛋白表达水平的测定结果 |
| 3 讨论 |
（10）氯化镉对大鼠免疫毒性及Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 亚慢性镉暴露对SD大鼠的免疫毒性效应 |
| 引言 |
| 1 材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 镉暴露对Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡的影响 |
| 引言 |
| 1 材料及方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
四、镉中毒致肺损伤的病理形态学观察（论文参考文献）
- [1]特种危险化学品事故紧急救援与处置关键技术创新研发与应用[J]. 岳茂兴,秦锡虎,申捷,汤黎明,刘广军,朱大伟,贾中芝,朱晓瓞,尹进南,刘宁,邵义如,王大明,吴兑. 中华卫生应急电子杂志, 2021(04)
- [2]CB2受体激动剂JWH133和抑制剂SR144528对卵蛋白诱导大鼠气道重塑的影响[D]. 喻娟娟. 桂林医学院, 2021(01)
- [3]银甘汤对TGF-β1重组腺病毒载体诱导小鼠肺纤维化的干预机制研究[D]. 夏瑶丹. 北京中医药大学, 2021(08)
- [4]cGAS-STING通路介导百草枯中毒急性肺损伤的作用机制研究及熊果酸的治疗作用[D]. 王娜. 中国医科大学, 2020(01)
- [5]健脾化痰、解毒护肺方对PM2.5颗粒致大鼠肺损伤的干预效果及机制研究[D]. 孙熙桐. 南京中医药大学, 2020(08)
- [6]镉暴露HeLa细胞调控HMOX1表达的启动子活化区域和转录因子研究[D]. 薛洁. 蚌埠医学院, 2020(01)
- [7]Toll样受体信号传导通路对硒缺乏雏鸡脾脏炎性损伤的影响[D]. 郭荣. 东北农业大学, 2020(04)
- [8]氟乙酰胺经miR-223及TLR4-NF-κB信号通路诱导的大鼠急性肺损伤[J]. 郑冲,张人华,赵大志,刘利亚,刘佳,林野. 环境与健康杂志, 2019(09)
- [9]血红素加氧酶-1对小鼠海水淹溺性肺损伤的保护作用[J]. 孙雪倩,邱玉保,吴晨,陈丹,吴亚先,庞庆丰. 中华航海医学与高气压医学杂志, 2019(04)
- [10]氯化镉对大鼠免疫毒性及Th1/Th2/Th17/Treg细胞平衡影响的研究[D]. 李有幸. 右江民族医学院, 2019(01)