M_2受体抗肽抗体对cAMP产生和钙电流的影响

一、抗M_2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响（论文文献综述）

连亦田^[1]（2012）在《高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其对人心房肌细胞电生理特性影响的研究》文中研究指明第一部分高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其临床意义目的：自身抗体在心血管疾病中逐渐被发现,越来越多的证据表明自身免疫机制参与其中并发挥着重要作用,在心律失常中也是如此。本实验的目的是观察高血压合并房颤患者自身抗体抗M2胆碱能受体抗体（AAM2R）和抗肌球蛋白重链抗体（AAMHC）的变化以及二者与房颤的关系。方法：研究选取高血压患者共295例,分为高血压合并房颤组（145例）和高血压非房颤组（150例）。采集血样,通过ELISA方法检测血清中四种自身抗体（AAM2R/AAMHC/AAβ1R/AAANT）的阳性率,并进一步通过单变量和多变量logistic回归分析自身抗体与房颤的关系。研究还选取了健康体检者80例作为正常对照组,与上述两组高血压患者比较自身抗体阳性率的差异。结果：与高血压非房颤组患者相比,高血压合并房颤组患者自身抗体AAM2R和AAMHC的阳性率显着升高（AAM2R:44.8%vs13.3%:AAMHC:27.6%vs14.7%:P<0.01）,并且自身体阳性组患者房颤的发病率较抗体阴性组也显着增加（AAM2R:76.5%vs38.1％,P<0.001;AAMHC:64.5%vs45.1%,P<0.01）；多变量分析显示自身抗体是高血压患者发生房颤的危险因素和强预测因子（AAM2R:OR=5.251; AAMHC:OR=2.696）。正常对照组抗体阳性率显着低于上述两组高血压患者（P<0.05）。结论：自身抗体AAM2R和AAMHC与高血压患者房颤的发生密切相关,是其重要危险因素和强预测因子,这可能提示自身免疫参与并促进了房颤的发生与维持,在其中发挥了重要作用。第二部分抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的提取、纯化和鉴定目的：在高血压合并房颤患者体内自身抗体AAM2R和AAMHC有较高检出率,本部分实验主要目的是验证两种自身抗体与相应抗原结合的特异性。方法：利用心外科开胸手术患者（窦性心律）右心耳组织标本,提取组织蛋白和酶解分离单个心房肌细胞。采用盐析法和亲和层析法提纯血清中的抗体,利用免疫印迹和细胞免疫荧光技术验证自身抗体与相应抗原的特异性结合。结果：自身抗体AAM2R能够与人心房组织蛋白M2受体和表达于CHO细胞的重组人M2受体特异性结合,免疫荧光共聚焦显微镜下可见AAM2R能与人心房肌细胞膜表面相结合,抗体阴性患者血清提取物和用抗原中和后的抗体未能结合；自身抗体AAMHC可与猪心肌肌球蛋白重链和人心房肌球蛋白重链特异性结合,并且免疫荧光共聚焦显微镜下可见AAMHC能与经破膜处理的人心房肌细胞结合,抗体阴性患者血清提取物和用抗原中和后的抗体未能结合；自身抗体AAMHC与人β1受体可发生交叉反应。结论：高血压合并房颤患者血清中存在特异性的自身抗体AAM2R和AAMHC,能够分别与人心房肌M2受体和肌球蛋白重链结合,且自身抗体AAMHC与β1受体具有交叉反应。第三部分抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体对人心房肌细胞复极电流及动作电位的影响目的：自身抗体AAM2R和AAMHC与高血压患者房颤发生密切相关,是其重要危险因素和强预测因子。本部分实验探讨两种自身抗体对人心房肌细胞复极化电流和动作电位的影响,以阐明这两种自身抗体致心律失常的电生理作用机制。方法：采集窦性心律心脏外科手术患者右心耳组织,酶解分离单个心房肌细胞；利用全细胞膜片钳技术和穿孔膜片钳技术分别记录两种自身抗体对心房肌细胞各种复极化电流（Ikach、ICa-L、Itol、Ikur）的影响；利用全细胞穿孔膜片钳电流钳模式观察两种自身抗体对心房肌细胞动作电位的影响。结果：与自身抗体阴性血清提取物相比,自身抗体AAM2R产生了受体激动样作用,可使心房肌细胞Ikach通道开放,使ICa-L电流减少,并缩短动作电位时程,但对Itol、Ikur电流无明显影响,用相应M2受体抗原肽段中和抗体后,此作用消失；自身抗体AAMHC对ICa-L、Itol、Ikur电流及心房肌细胞动作电位均无影响。结论：自身抗体AAM2R改变了心房肌细胞离子通道的电生理特性,使之发生重构,从而有利于房颤的发生与维持,而自身抗体AAMHC未能产生这种作用,可能是通过其他机制促发房颤。因此,研究结果表明自身免疫机制与房颤密切相关,在其中发挥着重要作用,可能为将来房颤的治疗提供了新的靶点。

洪昌明^[2]（2008）在《抗M2受体自身抗体对心房电生理特性的影响及其机制的研究》文中研究指明研究背景及目的心房颤动是临床最常见的心律失常之一。心房颤动发病率高,严重危害人类健康,是医疗资源的严重负担。因此,加强对房颤防治的研究具有重要临床意义。房颤的发病机制复杂,目前尚未完全明确。许多心脏疾病是房颤的危险因素:心衰、高血压、心脏瓣膜病等。迷走神经兴奋后释放乙酰胆碱,作用于M2受体,改变心房的电生理特性,在房颤的发生、发展中有重要的作用。M2受体自身抗体是近年来在扩心病、高心病、Chagas心肌病等心脏疾病患者中发现的一种抗体。前期的研究发现,M2受体自身抗体作用于M2受体细胞外第二环,起部分激动剂的作用,在扩心病等心肌疾病的发生、发展中起重要作用。迷走神经系统兴奋有利于房颤发生,而且扩心病、高心病、Chagas心肌病等心肌疾病均是心房颤动的高危因素,M2受体自身抗体是否与这些疾病的房颤发生率高有关系?近期的临床调查显示,M2受体自身抗体阳性的扩心病患者心房颤动发病率明显增高,而且在部分被认为是孤立性房颤的患者中也可以检出M2受体自身抗体,说明在这些患者中,M2受体自身抗体通过某种方式改变了心房肌的电生理特性,可以促进心房颤动的发生。但M2受体自身抗体对心房电生理特性有何影响,其作用机制是什么,均不清楚,值得研究。本课题通过建立M2受体自身抗体阳性家兔模型,观察长期M2受体自身抗体负荷对心房电生理特性的影响;研究该模型心房肌组织M2受体及其下游离子通道表达的变化;初步探讨M2受体自身抗体对心房影响的机制。旨在从自身免疫的角度提出心房颤动发病的新机制,为心房颤动的防治提供新思路和理论依据。研究方法本研究通过给家兔注射人工合成多肽复合物建立M2受体自身抗体阳性家兔模型,采用ELISA、离体心脏灌流、心脏电生理实验、比色法、RT-PCR、Western blot、组织病理学分析等方法和技术,观察:（1）动物模型M2受体自身抗体的滴度、特异性;（2） M2受体自身抗体阳性家兔的心率、有无自发心律失常;（3） M2受体自身抗体阳性家兔的心房有效不应期、心房有效不应期的频率适应性、房内传导时间、窦房结功能、心房重复反应、Burst刺激下房颤的发生率;（4） M2受体及其下游离子通道的表达变化、心房组织cAMP含量变化、乙酰胆碱酯酶活性变化以及心房的纤维化程度变化。研究结果（1）合成的特征性多肽与生物大分子KLH连接成功。注射多肽-KLH复合物4周后家兔可检出抗体,4周以后实验动物持续稳定表达该抗体,滴度符合要求;Westernblot实验证实该抗体可特异性识别M2受体,与临床患者检出的M2受体自身抗体一致。（2） M2受体自身抗体（M2-AAB）阳性动物可观察到房性早搏、短阵房速,对照组无;M2-AAB阳性动物心率较正常对照稍慢,但差异无显着性（P>0.05）。（3）离体心脏灌流电生理实验显示:与正常对照相比,M2-AAB阳性动物心房有效不应期（AERP）显着缩短（P<0.01）;AERP频率适应性显着下降（P<0.05）;房内传导时间显着延长（P<0.01）;窦房结恢复时间和校正的窦房结恢复时间均显着延长（P<0.05）;S1S2刺激诱发的心房重复反应（RAR）明显增多（P<0.01）;Burst刺激下的房颤诱发率明显增高（P<0.05）。（4）心房M2受体在心房分布不均匀,左房高于右房（P<0.05）;M2-AAB阳性动物左、右心房M2受体密度均增加（P<0.05）;M2-AAB阳性动物心房组织cAMP含量下降（P<0.05）;M2-AAB阳性动物心房组织乙酰胆碱酯酶活性下降（P<0.05）。（5）乙酰胆碱敏感钾通道的两个组成基因Kir3.1（GIRK1）和Kir3.4（GIRK4）在心房分布不均匀,其mRNA水平左房高于右房（P<0.05）;M2-AAB阳性动物Kir3.1和Kir3.4在左、右心房的mRNA水平较正常对照均增加（P<0.05）;Kir3.4的蛋白水平亦为左房高于右房（P<0.05）,M2-AAB阳性动物Kir3.4在左、右心房的蛋白水平较正常对照均增加（P<0.05）。（6） L型钙通道在左、右心房分布无差别;M2-AAB阳性动物L型钙通道α亚单位的mRNA和蛋白水平较正常对照均增加（P<0.05）。（7）与正常对照相比,M2-AAB阳性动物的心房纤维化程度显着增加（P<0.01）。研究结论（1）注射合成多肽-KLH复合物可建立持续、高效、特异地表达M2受体自身抗体的动物模型（2）长期的M2-AAB刺激可造成心房电重构,改变心房电生理特性,损害窦房结功能,有利于房颤的发生。（3）长期的M2-AAB刺激可激活M2受体信号转导系统,引起乙酰胆碱敏感钾通道和L型钙通道的重构,可能是M2-AAB阳性动物心房电生理变化的原因之一;（4） M2-AAB刺激可引起心房纤维化,可能是M2-AAB阳性动物心房电生理变化的另一原因。综上所述,M2受体自身抗体可激活M2受体信号转导系统,引起乙酰胆碱敏感钾通道和L型钙通道的重构,并可引起心房纤维化;离子通道重构和心房纤维化可引起心房电生理特性的改变,使房颤易于发生。本研究的结果表明自身免疫可能参与了心房颤动的发生,有望为心房颤动的防治提供新思路和理论依据。

李正在^[3]（2007）在《高血压患者抗α1-肾上腺素能受体抗体与心脏重构的临床观察》文中指出目的观察抗α1-肾上腺素能受体抗体（简称α1-受体抗体）对高血压患者心室重构的影响。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）对553例高血压患者进行血清抗α1-受体抗体检测并记录所有患者的超声心动图检查结果。以入选的高血压患者的相关因素:性别、年龄、病程、平均心率、血压、血清抗α1-受体抗体、高血压病家族史等作为自变量,以是否左心室扩大为因变量,运用多元logistic回归分析高血压患者左心室扩大的影响因素。结果553例高血压患者血清抗α1-受体抗体阳性率为32.3% （179/553）。抗体阳性组和阴性组相比较,阳性组平均年龄、病程、心率、蛋白尿的发生率均明显高于阴性组（P均<0.05）;阳性组中左心房扩大占的比例明显高于阴性组（分别为53.6% VS 44.3%,P<0.05）,左心室扩大所占比例也明显高于阴性组（分别为12.8% VS 6.1%,P <0.01）。而右心房内径、右心室内径、室间隔厚度以及左室射血分数在两组间无明显差异（P >0.05）。多元logistic回归共筛选出4个左心室扩大的危险因素:男性、病程、心率、血清抗α1-受体抗体（P均<0.05）。结论抗α1受体抗体与高血压患者左心室扩大有关,可能是导致高血压患者左心室重构的重要因素之一。高血压患者血清抗α1受体抗体阳性对预测左心室重构具有重要意

王文泽,赵荣瑞,吴博威,郭光伟,唐进,李家成,Hjalmarson Ake,Michael Fu LX^[4]（2001）在《抗M2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响》文中研究表明应用放射免疫分析方法及全细胞膜片钳技术研究了抗M2 受体细胞外第二环上的抗肽段抗体 （Abs ）对豚鼠心室肌细胞cAMP产生量和内向钙电流 （ICa）的影响并同M受体激动剂的效应进行了比较。结果如下 :M受体激动剂carbachol（Carb10 μmol/L）和抗肽段抗体 （Abs 10 0nmol/L）两者均可抑制异丙肾上腺素 （Iso 0 .8μmol/L）所引起的cAMP量的增加〔Carb可使组织中cAMP从 （10 8.2± 7.0 ）降为 （88.4± 7.2 ）pmol/ （mg·min） ,Abs可使组织中cAMP从 （10 8.2± 7.0 ）降为 （88.6± 5 .1）pmol/ （mg·min）〕及ICa的增加〔Carb可使ICa从 （5 3.5± 7 0 ） %降为 （13.0± 2 0 ） % ,而Abs可使ICa从 （6 6 .9± 10 .5 ） %降为（34 .5± 8 0 ） %〕。M受体阻断剂阿托品 （Atr）可以阻断Carb和Abs的以上效应。以上结果提示 :此抗肽段抗体同M受体激动剂一样可以通过减少 β受体激动剂所引起的cAMP的增加从而达到降低 β受体激动剂所引起的ICa的增加 ,由此可以对心室肌M2 受体产生作用。以上结果进一步提示自身免疫有可能参与了特发性扩张性心肌病的发病过程 ,而M2 受体细胞外第二环上的氨基酸肽段可能为免疫反应的靶作用区。

耿茜^[5]（2001）在《扩张型心肌病和心律失常心肌组织和心电重构的研究》文中研究指明背景 心肌重构和心电重构是多种心血管疾病发生、发展的病理生理学基础。目的 本研究前三部分在探讨DCM心室重构的基础上，从自身免疫抗体角度揭示组织重构过程中出现的电活动紊乱；论文第四部分建立了快速右心房起搏致房颤兔模型，在深入研究电重构产生机理的同时探讨电活动紊乱引发心房组织重构、纤维化，以及慢性期引致心室心肌病的机制，最终将心肌组织重构与心电重构有机结合。内容与方法（1）：合成β1AR和M2R抗原多肽片段，建立ELISA法测定扩张型心肌病（DCM）和各种原发性心律失常患者循环血中抗β1AR、抗M2R自身抗体滴度（2）：半定量RT-PCR法测定目的基因表达的mRNA水平（3）：放射免疫法测定血清/组织中ANP、NO、AngⅡ含量（4）：双抗夹心ELISA法检测心肌损伤指标cTnⅠ（5）：乳鼠心肌细胞培养，高血压、糖尿病合并DCM大鼠模型及快速右心房起搏致房颤兔模型的建立结果1、（1）DCM患者抗β1AR、抗M2R自身抗体的P/N值与阳 性率均显着高于正常对照组，且两种抗体间存在正相关；室 性心律失常（VA）或DCM伴VA者抗β1和M2受体抗体 显着高于正常者和不伴有心律失常的DCM患者；（2）DCM 患者中抗β1AR抗体阳性组的QT离散度显着高于抗体阴性 组，心源性猝死和室性心律失常组QT离散度明显延长； （3）45例临床资料完整的DCM患者中，NYHAⅢ～Ⅳ级 者抗体阳性率显着高于NYHAⅠ～Ⅱ级者。抗体阳性组 LVEDV、LVESV、EF、FS明显减低，并伴有不同程度的心 腔（LV、LA）扩大；（4）DCM患者血清ANP和NO水平 显着高于正常对照组，抗体阳性者差别更显着，且ANP和 NO水平的升高与心功能下降（NYHA评分低）相关联；（5） 南京医科大学博士学位论文D 。DCM患者外周血白细胞p l－ImLvA水平显着下降，抗 pl ARI 自身抗体阳性组和心功能 Ill～IV级组 pl AR表达略低于抗 体阴性和。。功能I～II级组，而pl－mRNA水平与患者6－受 体阻滞剂的应用未观察到明显的相关性；（6）随访DCM患D 者应用pl－受体阻滞剂（倍他乐克）治疗后1，3，6，12月，D EF、F S在1个月时即有明显升高，LVEDV、LVESV于3 个月时开始回降，6个月后 LA、SV亦有显着差异，直到 12 D 个月方出现NYHA的显着改善。l 2、1：40滴度抗p l－受体自身抗体阳性的 DCM患者血清干预 D 培养乳鼠。肌细胞48刁2小时后，。G肌细胞搏动频率显着D 增加，上清液中cTnl无升高，NO、ANP浓度均有不同程 度的减低。比索洛尔可桔抗抗体的致。。动过速和降低 NO、l ANP的作用。单纯比索洛尔干预培养细胞可显着降低 cTnl 水平，轻度升高NO和ANP。抗61受体自身抗体阳性的DCM D 患者血清对培养乳鼠心肌细胞ANP和pl－AR表达无显着影D 响，却可上调 ATI 的表达，比索洛尔干预可上调 pl－AR DIInRNA并逆转 ATI表达的升高，单纯比索洛尔可降低 ANPIl 和 ATI mRNA水平。lD3、4个月高血压、糖尿病大鼠出现明显的血压升高、高血糖高DD 尿糖和左室肥厚，肌浆网钙泵活力下降，SERCAZ表达减低， 胞膜61－和D3－I受体表达上调，ATI、RyRZ和L－CaZ－通道D 一A改变不显着。培多普利（ACEI）可降低血压、逆转D DCM大鼠的左室肥厚和上调的 pl一、IP3J受体，降低 ATI、 RyRZ－mRNA水平，不影响 SERCA、L(a》通道表达；比D 索洛尔可降低血压，逆转m3J上调，降低 ATI、RyRZ、L－ Ca‘”通道表达，对pl＼ SEmAm洲A改变无影响。D4、右。。房快速起搏致房颤兔模型中，血浆ANP显着升高，约l 在1小时达峰值，右心房组织ANP含量和表达同步呈先抑l 后扬；Angll含量迅速、持续升高，ATI表达的上调要迟于 Ansll；早期 SERCA活力、表达和 RyRZ表达均降低，L(a》l 通道表达略有增高；晚期 SERCA活力和表达一致升高，RyRZl 表达仍减低，Lcaz”通道则显着降低。与右心房不同，左室 组织 ANP除表达在 1。J、时呈一过性增高外改变不明显；Angll 南京医科大学博士学位论文D 含量和 ATI表达呈显着同步升高；SERCA活力持续降低，l 但表达于早期显着升高后晚期迅速大幅度下降，RyM和 L－l CaZ”通道持?

二、抗M_2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、抗M_2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响（论文提纲范文）

（1）高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其对人心房肌细胞电生理特性影响的研究（论文提纲范文）

（2）抗M2受体自身抗体对心房电生理特性的影响及其机制的研究（论文提纲范文）

（3）高血压患者抗α1-肾上腺素能受体抗体与心脏重构的临床观察（论文提纲范文）

（4）抗M2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响（论文提纲范文）

（5）扩张型心肌病和心律失常心肌组织和心电重构的研究（论文提纲范文）

四、抗M_2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响（论文参考文献）

• [1]高血压合并房颤患者抗M2胆碱能受体抗体和抗肌球蛋白重链抗体的检测及其对人心房肌细胞电生理特性影响的研究[D]. 连亦田. 华中科技大学, 2012(12)
• [2]抗M2受体自身抗体对心房电生理特性的影响及其机制的研究[D]. 洪昌明. 第四军医大学, 2008(01)
• [3]高血压患者抗α1-肾上腺素能受体抗体与心脏重构的临床观察[D]. 李正在. 华中科技大学, 2007(06)
• [4]抗M2受体的抗肽段抗体对cAMP产生量和钙电流的影响[J]. 王文泽,赵荣瑞,吴博威,郭光伟,唐进,李家成,Hjalmarson Ake,Michael Fu LX. 山西医科大学学报, 2001(S1)
• [5]扩张型心肌病和心律失常心肌组织和心电重构的研究[D]. 耿茜. 南京医科大学, 2001(01)

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