一、神经胶质生长因子对周围神经损伤后作用的组织学观察（论文文献综述）
张立鹏[1]（2020）在《枸杞多糖干预雪旺细胞在周围神经损伤修复中的研究》文中指出目的研究枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharide,LBP）对周围神经损伤修复所需的雪旺细胞（schwann cells,SCs）的生长、增值及生物活性的影响。研究LBP联合异种神经移植体（acellular nerve xenograft,ANX）修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法获取SD大鼠坐骨神经的SCs,使用差速贴壁法培养SD大鼠来源的SCs。将0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、150ug/ml、200ug/ml、250ug/ml、500ug/ml LBP与SCs混合培养,分成七组。在培养皿中培养后第1、3、5、7和9天,用CCK-8法检测各组SCs生物学活性,通过rt-PCR检测各组脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的基因表达水平,筛选最佳干预SCs的LBP浓度。在无菌条件下制备10mm坐骨神经缺损的大鼠模型,选取兔的胫神经制作ANX,将SD大鼠分为三组（n=10）:ANX组、ANX-SCs组和ANX-LBP-SCs组。术后八周,检测各组患肢热刺痛、坐骨神经功能指数（Sciatic nerve function index,SFI）及神经传导速度（Motor nerve conduction velocity,MCV）,另通过投射电镜比较三组模型的脱细胞异种神经移植体内的神经纤维及髓鞘再生。结果离体实验中,LBP趋于150-250ug/ml浓度与其他浓度相比有统计学意义（P<0.05）,剩余各组细胞的活性在两两之间均没有统计学差异（P>0.05）。在第2-4天,七组的活性无显着差异（P>0.05）。通过rt-PCR检测200ug/ml LBP-SCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达量高,与其他组相比具有明显统计学意义（P<0.05）。移植术后八周,发现ANX-LBP-SCs组热刺痛实验、SFI检测、神经传导速度更优。通过透射电镜检测ANX-LBP-SCs组结果显示此组髓鞘再生及神经纤维再生明显。结论1.LBP浓度为200ug/ml时,可促进SCs的增殖,并分泌大量神经营养因子;2.含有LBP干预的SCs培养体系联合ANX移植可显着促进周围神经再生。
李越[2]（2019）在《新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用》文中研究表明现代战争中各种火器的强大动能极易导致周围神经缺损,平时周围神经损伤则常见于交通事故、肿瘤切除、炎性疾病、先天性畸形等因素。缺损性周围神经损伤不仅难以修复,也给病人及社会带来沉重负担。与再生能力低下的中枢神经系统损伤相比,长度小于0.5cm的周围神经缺损可采用神经吻合术进行处理,预后往往较好。当神经缺损大于4cm时则首先采用自体神经移植进行修复,但以自体神经为供体不仅来源受限、匹配困难,也存在很多后遗症,且修复效果也并非尽如人意。同种异体神经虽已开展临床应用研究,但修复效果远不如自体神经,亦存在免疫排斥问题。近年来快速发展的组织工程神经技术为神经缺损修复带来了新希望,其优点在于:一是可以作为自体神经和同种异体神经的替代物,二是可以修复更长的神经缺损,三是可以根据神经缺损长度和直径“量身定做”。虽已有少量组织工程神经用于临床,但存在神经再生缓慢、神经结构和功能恢复欠佳等问题。从以往组织工程神经及其修复周围神经缺损的研究来看,目前学者正从以下几个方面对组织工程神经技术进行改进:一是支架材料的合成、筛选与神经导管制作,目前认为PLGA是较为理想的支架材料;二是选择更适宜的种子细胞,以往曾用种子细胞有ESCs、NSCs、BMSCs、ADSCs、DPSCs、SCs、OECs等多种,表皮神经嵴干细胞（Epidermal neural crest stem cells,EPI-NCSCs）易于获取、自我更新能力强、且具有多向分化、分泌神经营养因子、致瘤风险低等优点,显示了较好的应用前景;三是选择更优秀的细胞外基质,以强化移植修复过程中对神经再生的诱导和促进作用。同时,人们还发现,炎性免疫反应对于神经缺损的修复有十分重要的影响,这也成为近年研究的一个热点,对其进行探讨将有助于从机制上突破现有神经缺损修复的困境。炎性免疫反应在组织创伤修复过程中具有重要作用,深刻影响着神经再生的病理生理过程。炎性免疫反应是由免疫活性细胞和炎性细胞因子构成的复杂网络,近年来人们逐渐认识到巨噬细胞是这一网络中关键的免疫活性细胞,它在神经缺损修复过程中既能向M1型极化从而产生神经毒性,也能向M2型极化而利于神经损伤修复。目前认识到炎性细胞因子主要有两类,一类是促炎因子,如IL-1β、IL-6、TNF-α、IFN-γ等,可加剧炎性反应;另一类是抗炎因子,如IL-4、IL-10、IL-13、TGF-β1等,则可以抑制炎性反应。本研究在课题组既往建立的人工神经制备方法基础上,提出以EPI-NCSCs这样一种从自体毛囊获得的神经干细胞,结合PLGA支架及ECM细胞基质构建出新型组织工程神经,观察其桥接移植的修复效果,并着重从其对炎症反应调控的角度,研究其作用机制。首先将新型组织工程神经桥接于大鼠坐骨神经（Sciatic nerve,SN）缺损处（缺损总长度为15mm,该长度相当于人体神经缺损12.8-14.2cm）。再于桥接后9周内分别采用不同指标,观察新型组织工程神经在移植修复过程中对巨噬细胞的极化状态、炎性因子表达变化的调控及其对于缺损坐骨神经结构和功能的修复作用。拟解决的关键科学问题是:新型组织工程神经对局部神经组织内的巨噬细胞极化是否具有调节作用?新型组织工程神经能否调控局部炎性细胞因子的表达?调控后的炎性免疫微环境是否更有利于周围神经缺损的移植修复?材料与方法1.EPI-NCSCs培养与组织工程神经制作及坐骨神经桥接（1）细胞培养:EPI-NCSCs取自GFP转基因大鼠毛囊中,用DMEM/F12/FBS/bFGF培养液原代培养,PBS液洗涤覆有细胞的载玻片后,用Nestin/SOX10一抗工作液4℃孵育过夜,PBS漂洗后用Cy5-IgG/Alexa-Flour-594-IgG二抗工作液37℃避光孵育,然后计算SOX10+/Nestin+细胞数量。（2）PLGA支架:将PLA/PGA按85/15的比例混匀后溶于三氯甲烷制备5%溶液,玻璃培养皿中蒸发形成厚约25um的PLGA膜,然后卷膜制成PLGA导管,γ射线照射灭菌,用前以DMEM/F12浸润。（3）常规麻醉SD大鼠,暴露右侧坐骨神经,切除10mm坐骨神经,残端回缩形成长约15mm缺损。然后用PLGA导管套接于神经断端,注入25μL EPI-NCSCs/ECM,8-0缝线缝合断端,逐层缝合肌肉皮肤。2.调控巨噬细胞极化（1）免疫荧光鉴定:同上麻醉SD大鼠,暴露并取出长约20 mm坐骨神经,切为20μm冰冻切片,入TritonX-100 15分钟,山羊血清封闭1小时,用CD68/iNOS一抗（M1型巨噬细胞）和CD206/Arginase-1一抗（M2巨噬细胞）4℃孵育过夜,TRITC-IgG/FITC-IgG二抗避光孵育2小时,Hoechst33342细胞核染色,避光孵育30分钟。（2）成纤维细胞和SCs免疫荧光鉴定:SD大鼠麻醉后取出坐骨神经,制成20μm冰冻切片,用Vimentin一抗（成纤维细胞）和S-100一抗（SCs）孵育,二抗工作液为TRITC-IgG/FITC-IgG（1:200）,细胞核用Hoechst33342染色。3.炎性细胞因子调节（1）Western-blot测定:将所取坐骨神经匀浆后提取总蛋白,然后定量蛋白浓度,再进行SDS-PAGE电泳、转膜,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α/actin一抗孵育,再用辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG二抗孵育,PVDF膜曝光后用Image J图像分析软件测算条带灰度值,actin内参作对照。（2）免疫组化染色:SD大鼠麻醉、取出坐骨神经后制作4μm石蜡切片,脱蜡水化后经3%过氧化氢室温10分钟,山羊血清封闭1小时,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α一抗过夜孵育,再用山羊抗兔/鼠IgG二抗孵育,链霉亲和素-过氧化物酶30分钟,DAB显色,光镜观察分析。（3）免疫荧光染色:SD大鼠麻醉、灌注固定、取出坐骨神经后后制作20μm冰冻切片,入0.3%TritonX-100室温15分钟,山羊血清室温封闭1小时,用IL-4/IL-6/IL-13/TNF-α一抗过夜孵育,二抗TRITC-IgG/FITC-IgG避光孵育2小时,Hoechst33342细胞核染色,荧光显微镜下拍照与分析。4.缺损坐骨神经修复（1）组织学观察:术后9周时麻醉、固定大鼠、取出坐骨神经行石蜡包埋,切4μm切片,HE染色,光学显微镜观察分析。（2）运动终板检测:术后9周取腓肠肌制作30μm冰冻切片,AChE染色,光学显微镜观察,Image ProPlus图像软件分析。（3）感觉功能评估:术后9周时将大鼠两侧后足浸入50℃热水中,记录两侧后足的回缩反射时间,痛温觉用LFRT表示。（4）运动功能评估:术后9周时记录大鼠后足足印迹,分别测量TS、ITS、PL,然后根据公式计算SFI。（5）神经电生理检测:术后9周时麻醉大鼠,暴露实验侧和正常侧坐骨神经,双钩状电极（极间距2 mm）刺激,双极针形电极记录,刺激间期0.25 ms,刺激强度10mA,刺激频率1Hz,每只大鼠重复记录5次,结果用PowerLab软件分析。（6）腓肠肌湿重恢复检测:术后9周时,麻醉大鼠后切取实验侧和正常侧腓肠肌,吸去血迹后立即用电子天平称重,结果以实验侧腓肠肌重量/正常侧腓肠肌重量×100%表示。5.统计学分析以SPSS（版本22.0）数据统计软件进行统计分析,以均数±标准差表示,以独立样本t检验进行组间比较,P<0.05表示存在显着性差异,P<0.01表示存在极显着性差异。结果1.从GFP大鼠毛囊中获得EPI-NCSCs,经SOX10和Nestin双标鉴定,其纯度高达99.23±2.1%,移植到缺损10mm坐骨神经后,至少在宿主组织内存活9周。所制作的PLGA导管管壁表面为网状结构,间有很多直径约6μm左右的微孔,从而为EPI-NCSCs粘附生长提供了结构基础,也为种子细胞获得环境营养提供了结构保障。2.组织工程神经桥接坐骨神经缺损后1周,可明显提高M2巨噬细胞的比例,降低M1巨噬细胞的数量。桥接后3周时,有利于神经再生的SCs数量和活性被显着提高,而阻碍神经再生的成纤维细胞数量和活性则被明显降低。在所用组织工程神经各成分中,种子细胞EPI-NCSCs在这些有益效应中发挥了关键作用。3.组织工程神经桥接坐骨神经缺损后1、3、7、14、21天,Western-blot、免疫荧光和免疫组化实验证实,宿主组织抗炎因子IL-4和IL-13的表达呈逐渐增强的趋势,而促炎因子IL-6和TNF-α则呈逐渐下降的趋势。抗炎因子水平的提高和促炎因子水平的下降,为坐骨神经损伤后的神经纤维再生提供了更适宜的炎性免疫微环境。4.术后9周时,形态组织学观察证实组织工程神经桥接恢复了缺损坐骨神经的连续性,且神经直径更粗,组织结构更致密,神经纤维成分更多,运动终板数量更多体积也更大。LFRT测定表明感觉功恢复更好。SFI评估显示明显提高了运动功能的恢复水平。与此同时,肌肉湿重恢复率明显优于对照组动物。神经电生理检查证实电位的潜伏期缩短,电位幅度提高,说明神经传导速度更快,对刺激反应更强。结论本研究制备的组织工程神经中的种子细胞EPI-NCSCs至少可在宿主组织内存活9周。组织工程神经在移植过程中一方面促使宿主组织内巨噬细胞向M2型极化,促进抗炎因子（IL-4,IL-13）表达,增加有利于神经纤维再生的SCs数量;另一方面降低M1巨噬细胞的数量,抑制促炎因子（IL-6,TNF-α）的表达,降低抑制神经纤维再生的成纤维细胞数量。组织工程神经调控的局部炎性免疫微环境提高了长节段缺损坐骨神经结构与功能的恢复水平。
乔文兰[3]（2019）在《兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性》文中提出背景:周围神经缺损在神经科学中的常见病,其修复是临床治疗的难点。近年来,应用组织工程技术,在体外架构具有良好生物相容性的支架材料用于修复周围神经的损伤已经成为研究热点。将神经修复支架应用于被桥接神经的两断端,可以引导轴突的轴向生长,避免神经瘤的形成,并为神经再生提供相对孤立的微环境。本研究旨在使用Myroilysin酶制备一种新的脱细胞异种神经支架,并在支架上复合具有神经分化潜能的兔牙髓前体细胞,从而获取一种可以促进缺损区域周围神经修复和再生的牙髓前体细胞-脱细胞异种神经复合物神经组织工程复合物。第一部分Myr o i I ys i n 酶法脱细胞异种神经支架的制备与组织结构观察以及机械性能评价目的:应用Myroilysin酶法制作脱细胞异种神经支架,并对支架进行组织结构观察和机械力学评估。方法:获得Wistar大鼠的坐骨神经后,分别用Myroilysin酶和Sondell化学方法对坐骨神经进行脱细胞处理。大体观察脱细胞处理后的神经支架并制作组织切片,光学显微镜下观察HE染色和Masson染色后的支架的脱细胞效果及神经基底膜和胶原结构。通过扫描电子显微镜观察神经支架的表面物理性质。应用Wintest力学测试软件评估支架的一系列机械力学性能指标,如极限载荷、弹性模量、韧度、极限应力、极限应变、断裂功耗等。结果:与Sondell化学处理的神经相比,用Myroilysin酶法处理的神经呈现出显着的膨胀现象。组织学观察可见两种脱细胞神经支架的轴突,细胞,髓鞘结构消失,胶原纤维排列均匀有序,神经基底膜呈波浪状排布。扫描电子显微镜显示,Myroilysin酶法获得的脱细胞神经支架的孔隙和有序排列模式与天然神经更为相似,纵形沟壑状结构更明显。Wintest力学分析表明,Myroilysin酶法脱细胞神经支架的机械力学性能指标与天然神经相比无统计学差异（P>0.05）。结论:Myroilysin酶法与sondell化学法脱细胞效果相似,利用Myroilysin酶法制备神经支架对神经支架机械力学影响小,满足支架植入的力学要求,是值得考虑的一种神经支架材料。第二部分兔牙髓前体细胞的体外培养鉴定和神经方向诱导分化目的:体外培养鉴定牙髓前体细胞,并对获得的细胞进行神经方向诱导分化。方法:获取三月龄纯系新西兰大白兔健康牙髓组织以及12-15岁患者中因正畸需要 除的健康前磨牙牙髓组织。应用Gronthos酶消化法对牙髓组织进行原代培养,对获得人牙髓前体细胞进行流式细胞术检测鉴定间充质干细胞标记物和神经细胞标记物。对获得的兔牙髓前体细胞进行神经方向诱导并对诱导前后的细胞进行免疫荧光染色,并进行相关间充质干细胞标记物和神经细胞标记物qRT-PCR及 Western blotting 检测。结果:体外培养获得了能够高度增殖的细胞,通过流式细胞术检测人牙髓前体细胞为 CD29+,CD106+,CD44+,CD73+,CD90+/CD34-,CD45-,CD271-,CD133-,CD31-,免疫荧光结果显示培养的兔牙髓前体细胞中存在GFAP,MBP,P75和S-100阳性的细胞。兔牙髓前体细胞神经方向诱导后获得的类神经细胞免疫荧光结果显示 GFAP,MBP,P75,S-100 阳性,qRT-PCR 及 Western blotting结果显示神经表面标记GFAP和MBP表达增加。结论:在本研究中体外培养获得的细胞中存在牙髓前体细胞,将牙髓前体细胞神经方向诱导后可以得到神经表面标记物阳性和分泌神经营养因子的类神经细胞;在牙髓前体细胞中存在功能与神经细胞相似的细胞,可以考虑将GFAP,MBP,P75,S-100阳性的牙髓前体细胞应用于牙髓前体细胞-脱细胞异种神经组织工程神经移植复合物。第三部分Myro i I ys i n酶法脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能评估目的:评估脱细胞异种神经支架的胶原稳定性和体内外生物相容性,将牙髓前体细胞复合在Myroilysin酶法及Sondell化学法脱细胞异种神经支架,探讨脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能。方法:应用I型胶原酶酶解天然神经,Myroilysin酶法脱细胞神经支架和Sondell化学法脱细胞神经支架,比较三者的降解情况,从而评估其胶原稳定性。制备支架提取液,并将兔牙髓前体细胞与提取液体外共培养,通过流式细胞增殖与凋亡检测和CCK-8细胞增殖试验评估支架的体外细胞相容性。将兔牙髓前体细胞植入到Myroilysin酶法和Sondell化学法脱细胞异种神经支架中,通过EdU试验观察支架上有无增殖期细胞以及细胞的排列分布。使用与支架浸提液共培养的兔牙髓前体细胞,通过qRT-PCR及Western blotting分析支架浸提液对牙髓前体细胞在mRNA和蛋白水平上表达神经表面标记物及神经营养因子的影响。将复合兔牙髓前体细胞和脱细胞异种神经的神经移植物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型内,分别于30天,90天后分析兔坐骨神经缺损模型移植后坐骨神经及其支配骨骼肌恢复情况。结果:Myroilysin酶法和Sondell化学法脱细胞神经支架的降解速率与天然神经基本一致;将兔牙髓前体细胞与脱细胞神经浸提液共培养后,Myroilysin酶法脱细胞异种神经浸提液的细胞增殖活性高于单独培养和Sondell组,表现出良好的细胞相容性,但Sondell组细胞增殖速度明显下降,表现出对细胞明显的毒性;Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架可使兔牙髓前体细胞粘附其上并呈现较为明显的方向性生长方式,但在Sondell组支架上并没有发现增殖细胞,并且细胞分布散乱。用Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架浸提液培养兔牙髓前体细胞后,细胞的神经表面标记物MBP和S-1 00在mRNA水平和蛋白水平出现上调,betaⅢ Tubulin,CD90,NeuN和神经营养因子BDNF及NGF在mRNA水平出现了上调。将复合兔牙髓前体细胞和脱细胞异种神经的神经移植物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型内后,30天后EdU检测见Myroilysin复合牙髓前体细胞组S-100阳性增殖期细胞增加,CD31阳性增殖期细胞深入支架内部,90天后Myroilysin复合牙髓前体细胞组复合动作电位幅度和神经传导速度与自体神经移植对照组差异减小（P>0.05）,肌湿重恢复率无明显差异（P>0.05）。结论:在本研究中Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架具有与天然神经类似的体外降解率,体外和动物体内细胞相容性良好,可诱导牙髓前体细胞向神经细胞方向的分化。其多孔纵向沟壑状结构和保存完好的周围神经细胞外基质成分可使牙髓前体细胞粘附生长在支架上。将兔牙髓前体细胞-Myroilysin酶法脱细胞异种神经移植复合物植入三月龄纯系新西兰大白兔坐骨神经缺损模型后,修复效果接近自体神经移植。牙髓前体细胞-Myroilysin酶法脱细胞异种神经神经组织工程复合物可以成为修复周围神经缺损的神经移植物新选择。
赵斌[4]（2019）在《基于EPCs及VEGF165促血管生成作用促进组织工程神经修复大段周围神经缺损》文中研究指明目的:临床医学对大段周围神经缺损的修复有迫切需求,然而目前构建的神经移植物的血管化问题是困扰大段周围神经缺损修复的重要瓶颈之一。本项目在前期构建组织工程化周围神经的基础上,认为移植物早期血管化对组织工程化周围神经在体内存活起重要作用,提出促血管化组织工程化周围神经促进大段周围神经缺损修复的新方法,即利用携带血管内皮生长因子165基因（VEGF165）的重组腺病毒转染自体内皮祖细胞（EPCs）,并与自体脂肪干细胞（ADSCs）诱导后的类许旺细胞共同作为种子细胞,利用本课题组改良制备的同种异体脱细胞神经支架材料作为载体,构建促血管化组织工程化周围神经,并修复大鼠坐骨神经大段缺损（2cm）,通过大体观察、神经电生理检测、组织学观察等方法评估神经修复情况。探讨基于VEGF165基因及EPCs促血管生成作用构建的神经移植物对动物体内大段神经缺损修复的影响。方法:1、取SD大鼠,无菌分离双侧胫骨及股骨,采用骨髓EPCs分离液分离大鼠EPCs并进行鉴定。采用酶消化法获取大鼠ADSCs,并采用经典诱导方法将其向许旺细胞进行诱导,并进行鉴定。将上述两种细胞按照不同接种比例进行共培养（1:2,1:1及2:1）,测定不同比例下EPCs对ADSCs诱导后的类许旺细胞生物学行为的影响。以此来确定EPCs与类许旺细胞共培养时的最佳比例。2、在体外构建含VEGF165基因的复制缺陷型腺病毒表达载体Ad-VEGF165,并对其进行鉴定;经过多次感染、扩增和纯化等一系列步骤,获得重组腺病毒载体Ad-VEGF165,之后采用终点稀释法对上述病毒载体的滴度进行测定,计算Ad-VEGF165滴度。测定腺病毒转染的最佳浓度,在此浓度的基础上将Ad-VEGF165转染大鼠EPCs;通过CCK-8检测腺病毒转染后对EPCs存活的影响;通过Transwell小室检测腺病毒转染后对EPCs迁移的影响;细胞免疫荧光、Matrigel基质胶体外成血管实验、荧光定量PCR及Western-blot检测腺病毒转染后对EPCs功能表达的影响。3、按照实验（1）所得出的共培养细胞比例,将实验（2）所构建的转染VEGF165后的EPCs与ADSCs诱导后的类许旺细胞共同作为种子细胞;将其采用显微注射法注入课题组先前制备的改良脱细胞周围神经支架;构建促血管化组织工程化周围神经。通过病理HE染色、扫描电镜及Live/Dead荧光染色观察其在体外的生长情况。4、采用实验（3）所制备的促血管化组织工程化周围神经修复大鼠坐骨神经缺损（长度为2cm）,分别以自体神经移植、普通组织工程化周围神经为对照组,通过对各组大体观察、神经电生理检测、组织学观察等来比较各组移植物血管化程度及神经修复情况。结果:1、通过将大鼠EPCs与ADSCs诱导后的类SCs共培养,我们获得了上述两种细胞共培养的最佳比例（1:1）;并发现在该比例下,EPCs能够促进类SCs存活及功能表达等生物学行为,且该现象可能是通过Wnt/β-catenin信号通路所介导。2、体外成功构建携带VEGF165基因的重组腺病毒表达载体Ad-VEGF165,MOI=200时成功转染大鼠EPCs,通过一系列检测表明转染VEGF165基因能促进EPCs增殖、迁移及向内皮细胞分化,提高EPCs成血管能力,这一现象可能是通过Notch/Jagged信号通路所介导。3、采用转染VEGF165基因的EPCs与自体ADSCs诱导后的类SCs共同作为种子细胞,利用本课题组改良制备的脱细胞神经支架材料作为载体,成功构建了促血管化组织工程化周围神经,并在体外生长良好。4、综合病理学、大体观察、超声及神经电生理等结果,表明基于EPCs及VEGF165基因预血管化策略能促进组织工程神经尽早地实现血管化,恢复神经移植区的血供。神经缺损区域早期血管化的实现极大地促进了神经缺损区域的神经再生、重建速度,使得神经重建与修复进程能够大大提前。结论:基于EPCs及VEGF165基因促血管生成作用能够促进组织工程化周围神经在体内早期血管化,加速恢复周围神经的正常形态结构及功能,促进周围神经缺损的修复重建。
韩雪峰[5]（2019）在《丙泊酚对BALB/c小鼠坐骨神经损伤后相应脊髓节段PSD-95表达的影响》文中研究说明目的观察丙泊酚对坐骨神经离断伤小鼠L4-6脊髓节段PSD-95表达的影响。方法选择清洁级健康雄性BALB/c小鼠144只,体重20±2g,8周龄,采用随机数字量表法将小鼠分为3组:假手术组（S组）、模型组（M组）、丙泊酚组（P组）,每组48只,观察时间点分别为1W、2W、4W、8W,每个时间点为4只,通过离断右侧坐骨神经后进行端端吻合来建立经典坐骨神经损伤模型。P组造模成功后腹腔注射丙泊酚50mg·kg-1·d-1,M组腹腔注射等体积生理盐水,连续干预7天。采用Real-time PCR法与Western Blot法检测小鼠L4-6脊髓节段PSD-95 mRNA及蛋白的表达;通过LFB染色观察小鼠损伤侧坐骨神经髓鞘形态学变化;通过TUNEL法染色标记小鼠L4-6脊髓节段神经元细胞并统计神经元凋亡数目情况;分别称取每只小鼠右侧与左侧腓肠肌肌肉湿质量,并计算腓肠肌肌肉湿质量残存率。结果1.PSD-95 mRNA结果显示:与S组比较,在1W、2W、4W时M组PSD-95 mRNA表达上调（P<0.05）;与M组比较,1W、2W、4W时P组PSD-95mRNA的表达明显下调（P<0.05）;2.PSD-95 Western Blot结果显示:1W时M组与P组PSD-95蛋白表达开始上调;2W时M组与P组PSD-95蛋白表达均达到高峰;与S组比较,2W与4W时M组PSD-95蛋白表达明显上调（P<0.05）;与M组比较,2W与4W时P组PSD-95蛋白表达下调（P<0.05）3.LFB染色显示:与S组比较,M组损伤段坐骨神经髓鞘分布杂乱、髓鞘厚度不均及轮廓不完整;与M组比较,P组髓鞘形态、厚度及轮廓规整程度均有所改善;4.TUNEL法染色标记小鼠脊髓L4-6节段神经元凋亡结果显示:随着术后时间的延长,脊髓L4-6节段神经元细胞凋亡数目逐渐减少（P<0.05）;与S组比较,M组与P组脊髓神经元凋亡数目增加（P<0.05）;与M组比较,P组脊髓L4-6节段神经细胞凋亡数目明显减少（P<0.05）。5.腓肠肌湿质量残存率结果显示:与S组比较,2W、4W、8W时M组腓肠肌肌肉湿质量残存率下降（P<0.05）;与M组比较,2W、4W、8W时P组腓肠肌湿质量残存率升高（P<0.05）结论:1.丙泊酚促进神经功能恢复的可能机制是通过抑制PSD-95的表达。2.丙泊酚能够减少坐骨神经损伤后相应脊髓节段神经元的凋亡。
高建一[6]（2019）在《人发角蛋白促进大鼠坐骨神经挤压伤后的神经修复》文中提出研究背景:周围神经损伤后轴突的再生和相应靶器官功能的恢复仍是重要的临床挑战。损伤导致轴突崩解,雪旺细胞（Schwann cells,SCs）和巨噬细胞被激活重新参与到再生修复的过程中。随着组织再生工程的不断发展,越来越多的生物材料被用以修复周围神经损伤。角蛋白是一种广泛存在于毛发、指甲和羽毛中的天然物质,具有氨基酸组成稳定、可塑性强、生物相容性好、降解性好等优点。据报道,从羊毛或羽毛中提取的角蛋白能够支持细胞的生长并促进组织的再生。本研究采用还原法提取人发角蛋白（human hair keratin,HHK）,并通过进一步改变提取条件制备了人发角蛋白海绵（human hair keratin sponge,HHK sponge）,分别应用于体外和体内实验。体外研究表明,HHK能促进SCs的粘附、增殖、迁移和神经营养因子的分泌,调节巨噬细胞炎性细胞因子的表达,促进背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）神经元轴突的延伸。体内将HHK海绵包裹于坐骨神经挤压伤部位可促进损伤后神经功能的恢复。此外,HHK海绵可在5周内被机体分解和吸收,不仅为早期修复创造出一个合适的微环境,又不影响后期轴突的延伸。因此,HHK被认为是一种能够促进神经再生有前景的生物材料。研究目的:探讨HHK作为一种新型组织工程生物材料,在体外调节SCs、巨噬细胞和DRG神经元的生物学活性,在体内促进周围神经损伤后轴突的再生。研究方法:（1）HHK的提取和HHK海绵的制备。（2）通过计数分析、CCK-8实验、Transwell小室和划痕实验以及RT-q PCR来观察HHK对SCs黏附、增殖、迁移和营养因子表达的影响。（3）通过免疫荧光检测HHK调节DRG神经元轴突的延伸。（4）通过RT-q PCR检测HHK对巨噬细胞炎症因子表达的影响。（5）建立体内SD大鼠坐骨神经挤压伤模型。（6）通过坐骨神经功能指数（sciatic nerve function index,SFI）、足印分析、腓肠肌湿重和肌纤维形态等指标观察HHK海绵对坐骨神经损伤后相应功能的改善情况。（7）通过透射电镜（transmission electron microscope,TEM）分析HHK海绵调节髓鞘再生的能力。研究结果:（1）经还原法提取了HHK并制备HHK海绵。（2）HHK能够促进SCs黏附、增殖、迁移和神经营养因子的表达。（3）HHK能够促进DRG神经元轴突的生长。（4）HHK能够降低巨噬细胞中促炎因子IL-6、TNF-α、i-NOS、IL-1β的表达,提高抑炎因子IL-10的表达。（5）HHK海绵在体内加快了SD大鼠坐骨神经挤压伤后神经恢复。研究结论:（1）成功的从人发提取出角蛋白并制备出HHK海绵。（2）HHK在体外能够调节多种参与神经损伤修复细胞的生物活性。（3）HHK海绵在体内加速了损伤后轴突的再生,为轴突和靶器官的连接争取了宝贵的时间。
李婷[7]（2019）在《大鼠坐骨神经损伤后不同修复方法中GAP43和S100B变化规律的研究》文中研究指明周围神经损伤后神经的再生和功能恢复是周围神经科学研究的重点。目前常用的周围神经损伤修复方法有端端吻合、自体移植和人工神经,但外科手术技术很难进一步提高运动神经修复的精细程度。因此充分了解外周神经再生过程中细胞特性和分子层面的调控,对神经损伤后功能恢复具有重要意义。雪旺细胞是周围神经系统中特有的胶质细胞,周围神经损伤后,雪旺细胞大量增殖、迁移,分泌营养因子等机制促进外周神经损伤后修复。S100B在周围神经中特异性标记雪旺细胞。GAP43是一种神经组织特异性生长相关蛋白,在发育或再生的轴突中产生并被转运到生长锥,神经损伤后需要GAP43来促进突起的延伸和重建。本课题检测胚胎和体外坐骨神经原代培养细胞中GAP43和S100B表达,探讨雪旺细胞分化、增殖中GAP43和S100B表达模式;采用了端端吻合、自体移植和人工神经导管三种修复方法,探讨周围神经损伤修复方法研究中GAP43和S100B变化规律与不同修复效果之间的相关性,有利于理解神经再生和神经功能修复中基因调控层面的分子机理,对临床上周围神经损伤后的修复具有重要指导意义。实验结果显示:1.检测大鼠胚胎神经板-脊髓发育阶段GAP43和S100B的表达分布规律,发现胚胎期18天脊髓周围细胞中GAP43与S100B共定位。2.在体外培养神经来源的原代坐骨神经中,细胞形态形态特异呈典型的双极细长梭形,极少数有三个突起,细胞聚集排列规律,为雪旺细胞。原代培养第7天细胞增殖明显,检测到细胞GAP43和S100B荧光信号共定位。3.神经免疫荧光分析:（1）在近端神经各实验组中GAP43蛋白水平呈先上升后下降趋势,术后第14天端端吻合组和自体移植组GAP43蛋白水平达到最高峰,而导管组中GAP43蛋白水平达到最高峰时间点推延至术后第21天;在远端神经中,术后第21天端端吻合组和自体移植组GAP43蛋白水平达到最高峰,而导管组GAP43蛋白水平持续上升至术后第30天且高于其他实验组（p<0.05）。（2）在近端神经中,术后神经修复初期各实验组S100B蛋白水平下降,导管组S100B蛋白水平比其他两实验组下降明显（p<0.05）,术后第7天导管组S100B蛋白水平降至谷底,而端端吻合组和自体移植组S100B蛋白水平下降相对缓慢,蛋白水平最低点推延至术后第14天,术后第21天各实验组S100B蛋白水平有所回升;在远端神经中,术后第3天各实验组S100B蛋白水平急剧下降,术后第21天各实验组S100B蛋白水平回升到对照组水平。4.荧光定量PCR分析:术后14天内,各实验组Gap43 mRNA表达量呈上升趋势,端端吻合组和自体移植组Gap43 mRNA表达量达到最高峰,而导管组Gap43mRNA表达量持续上升。术后第21到第30天,端端吻合组和自体移植组Gap43mRNA表达量逐渐下降,导管组Gap43 mRNA表达量持续上升,而且高于其他两实验组Gap43 mRNA表达量（p<0.05）;各实验组中S100b mRNA表达量与蛋白水平趋势类似,术后第3天急剧下降,术后第7天平稳回升,端端吻合组和自体移植组S100b mRNA表达量在术后第7到14天达到最高峰,而导管组S100b mRNA表达量最高峰时期推延至术后第21天。5.通过对各实验组术后形态学观察、横切HE染色、轴突NF200免疫荧光检测、感觉功能检测和腓肠肌湿重率检测评估神经损伤修复效果,端端吻合组和自体移植组的神经组织形态结构功能恢复进程快于导管组,这与GAP43和S100B mRNA和蛋白水平出现高峰期早于导管组的变化规律相呼应。综上实验结果表明,在外周神经损伤修复早期阶段,从基因层面调控雪旺细胞GAP43和S100B的协同表达,有利于促进神经修复进程、提高术后修复效果。
亚穆罕默德·阿力克[8]（2019）在《仿生多通道人工神经导管的研究》文中提出目的:（1）研究采用高分辨显微断层扫描（Micro-CT）扫描获取新西兰大白兔坐骨神经三维结构的最佳实验条件。（2）以兔坐骨神经为“原型”,设计可引导神经组织内部各神经束准确支配远端靶神经纤维的多通道神经导管数字化模型。以PLGA及明胶为原材料制备仿生多通道神经导管,评价多通道导管物理及生物性能。（3）将制备的仿生多通道神经导管植入新西兰大白兔坐骨神经缺损处,探讨定制化的仿生多通道组织工程神经导管对新西兰大白兔坐骨神经缺损修复的作用机制。方法:（1）取成年新西兰大白兔中段坐骨神经组织标本10mm,A、B组分别用20%、40%Lugol’s液对神经标本染色,光学显微镜及Micro-CT下分别采集两组标本在1-3天染色过程中,每1天时间点的显像变化。将显像良好的Micro-CT图像序列导入三维重建软件（Mimics）软件,通过三维重建图形实现兔坐骨神经显微三维结构的可视化。（2）取6只成年新西兰大白兔中段坐骨神经25mm标本,采用Micro-CT扫描及H&E色切片染法获得神经各束解剖学数据,对上述两种图像从神经束的数量、面积、是否存在神经束之间融合或分离现象等方面进行对比观察。依据神经组织H&E染色切片及Micro-CT图像,采用Adobe Photoshop软件设计4组具有多组通道结构神经导管数字模型。采用静电纺丝、冷冻干燥、3D打印等技术构建4种通道类型的PLGA/明胶微孔神经导管。通过观察其外貌特征,吸水膨胀实验、热收缩及力学性能测量等实验进行导管物理属性评价,细胞增殖实验及酶降解实验被用于评价导管生物学属性。（3）将仿生多通道神经导管植入新西兰大白兔中段坐骨神经10mm缺损模型。以自体神经移植及单通道（1-CANC）神经导管作为对照组,通过组织学切片观察、肌电生理检测、逆向荧光示踪等实验探讨仿生神经导管定制化的多通道结构对周围神经轴突再生的作用。结果:（1）A组神经标本在染色3天、B组标本在染色2天可经Micro-CT扫描获得较为清晰的神经显微三维结构的图像。Micro-CT图像显示新西兰大白兔坐骨神经中各神经束立体行径相对固定,生成的数字化三维模型可在任意横断面实现坐骨神经内部显微结构可视化观察。（2）新西兰大白兔坐骨神经中段具有11±1个呈不规则排列的神经束,Micro-CT扫描提示坐骨神经中段25mm各神经束之间无明显的融合或分离现象。采用Adobe Photoshop软件测量CANC导管通道和神经束匹配指数（MI）得出:3-CANC组最高（84.4%）,4-CANC组最低（51.4%）,2-CANC和3-CANC组MI分别为75.5%、77.1%。实验结果表明:制备的CANC导管具有一致的外貌、孔隙率、热收缩性能特征;吸水膨胀方面:1-CANC导管组与2-,3-,4-CANC组相比,其吸水后管腔横截面积更易于减小（p<0.05）;侧方应力实验中1-通道导管抗压强度最高,4-CANC较2-CANC组可承受更高的侧方压力（p<0.05）;抗弯曲实验显示:4-CANC抗弯强度高于3-CANC和2-CANC（p<0.05）;体外降解实验显示:与PLGA生物膜相比1-、4-CANC神经导管具有较快的降解速率;细胞增殖实验显示:附着于PLGA/明胶导管组Schwann细胞数量多余于PLGA生物膜组（p<0.05）,CANC导管组组间Schwann细胞数量无差异（p>0.05）。（3）在植入兔坐骨神经缺损模型术后第12、24周观察发现,自体神经移植组在组织学观察、电生理检测及（感觉、运动）功能恢复方面效果优于所有神经导管植入组（p<0.01）。有髓神经纤维计数结果显示:各CANC神经导管组之间有髓神经纤维数量无差异。但（2-CANC、3-CANC组）相对（1-CANC和4-CANC组）,在电镜下观察到了直径更大且髓鞘更厚的成熟神经轴突组织。类似的对比结果也出现在肌电生理检测、自噬行为及运动功能评定实验。逆行荧光示踪实验结果显示,CANC导管组中各组被荧光标记的神经元计数无统计学差异（p>0.05）,而其中被FB-NY双标记神经元比例最高的是1-CANC组（7.1%±2.4%）,4-CANC组最低（2.2%±1.2%）,结果具有显着差异（p<0.05）。结论:（1）采用20%Lugol’s液染色3天或40%Lugol’s液染色2天后的神经标本经Micro-CT扫描可获得较为清晰的显微三维图像。生成的三维重建模型可作为设计三维仿生人工神经导管重要参考依据。（2）Micro-CT扫描可准确、清晰的连续观察新西兰大白兔坐骨神经中段显微三维结构,联合3D打印模具、冷冻干燥及静电纺丝等技术可制备出简易的以兔坐骨神经解剖结构为“原型”的仿生多通道神经导管。上述方法制备的多通道仿生PLGA/明胶神经导管具有较好的生物属性和物理机械性能,可满足人工神经导管植入于动物前期实验研究要求。（3）仿生数字化人工神经的多通道结构参数对神经组织修复再生过程具有显着影响。高度仿生的神经导管多通道结构具有降低神经轴突发生错配的作用。导管通道与神经束匹配指数（MI）可能可作为研究定制化多通道神经导管仿生程度的一项评价指标。定制化的仿生神经导管多通道结构（管腔直径大小、管腔分布位置等）与修复靶神经中相应神经束解剖结构越相似,多通道神经导管MI指数越高其修复效果可能越好。
任登鹏[9]（2018）在《干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究》文中指出目的:研究骨髓间充质干细胞（BMSCs）源性的干细胞活性生长因子对体外培养的神经干细胞增殖、分化及低氧耐受的影响,以及对大鼠脑创伤模型的体内损伤修复效果,为未来脑创伤神经功能恢复提供理论指导和实验依据。方法:（1）原代分离培养SD大鼠BMSCs,流式细胞术测定特异性的表面标志蛋白的表达。（2）酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测培养48 h的BMSCs条件培养液中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF的蛋白质水平,了解BMSCs条件培养液中的主要干细胞活性因子的表达水平。（3）原代分离培养大鼠的神经干细胞（NSCs）,将其培养于含间充质干细胞活性因子的培养环境中,观察细胞克隆球的生长情况,以及其向神经元和神经胶质细胞分化潜能;建立氧糖剥夺模型,检测上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）含量,观察干细胞活性因子对低氧应激环境下的NSCs的保护作用。（4）制作冲击性脑损伤大鼠模型,给予干细胞活性因子治疗,观察脑损伤大鼠术后一般情况,水迷宫实验检测实验动物的神经功能恢复情况。（5）行HE染色进行大体病理组织学观察;干/湿重法检测脑水肿程度。（6）荧光定量PCR方法检测实验大鼠脑组织中目标基因IL-1β、Gap43、Jun、和TNF的表达;免疫组织荧光方法检测目标蛋白BrdU+NeuN、BrdU+GFAP的表达;Western Blot方法检测目的蛋白NF-κBp65在脑组织中的表达情况。结果:（1）流式细胞术检测结果显示,本实验所培养的第四代骨髓源性的细胞表达间充质干细胞的标记蛋白CD90和CD105的阳性表达率均高于95%;同时表达造血干细胞标记物CD34的阳性表达率和成熟造血细胞的标志蛋白CD45的阳性表达率均低于5%。证实所培养的细胞为高纯度的BMSCs,符合实验要求。（2）酶联免疫吸附测定实验结果显示,第4代至第14代BMSCs表达VEGF水平始终维持在400 pg/ml浓度以上,IGF-1的水平一直维持在100pg/ml-150 pg/ml浓度之间,NGF维持在380 pg/ml-430 pg/ml浓度之间,BDNF的水平维持在310 pg/ml-330 pg/ml浓度之间。（3）原代分离培养的大鼠神经干细胞（NSCs）培养于含BMSCs细胞活性因子的培养环境中,细胞克隆球较单纯NSCs培养基培养具有更快的生长速度;并且BMSCs细胞活性因子能够诱导NSCs更容易向神经元分化;氧糖剥夺模型实验结果显示,BMSCs细胞活性因子能够增强NSCs对低氧应激的耐受能力。（4）冲击性脑损伤大鼠模型结果显示,假手术组实验大鼠在麻醉清醒后精神状态迅速好转,大鼠体重较术前无明显变化;脑损伤模型（TBI）组实验动物能够出现明显偏瘫,主要表现为创伤对侧肢体不活动或活动明显减少,体重于手术初期下降明显,后稍有回升;TBI+干细胞活性因子治疗组实验动物亦出现明显偏瘫现象,体重于手术初期亦下降明显,但在5天之后回升较快,最终体重优于TBI组。水迷宫实验检测结果显示干细胞活性因子治疗组实验动物具有更佳的神经功能恢复能力。（5）HE染色实验结果显示,假手术组脑组织完整,结构正常,细胞形态符合正常大鼠脑组织组织与解剖结构特点;TBI组创伤侧大鼠脑组织可见明显创伤灶,脑组织结构紊乱;活性因子治疗组创伤侧大鼠脑组织同样可见细胞排列较TBI组相对更为规整。干/湿重法检测结果显示TBI组脑组织水肿程度最高,活性因子治疗组的脑水肿程度明显低于TBI组。（6）荧光定量PCR方法检测结果显示,TBI组实验大鼠脑组织中IL-1β、Jun和TNF的表达水平明显高于假手术组,干细胞活性因子治疗能降低TBI后上述因子的mRNA表达水平;实验大鼠脑组织中GAP43的表达水平于TBI后第3天时处于较低水平,随后逐渐升高,干细胞活性因子治疗后能增加GAP43的表达水平;免疫组织荧光方法检测结果显示,脑创伤大鼠创伤侧海马BrdU、NeuN和GFAP的表达水平均明显高于假手术组,活性因子治疗组则可进一步提高BrdU/NeuN的蛋白质表达水平;Western Blot方法检测结果显示NF-κBp65在TBI组实验大鼠脑组织中的蛋白表达水平明显高于假手术组,活性因子治疗组则可降低该蛋白的表达水平。结论:（1）培养第4代至第14代的BMSCs始终维持表达较高水平的VEGF、IGF-1、NGF和BDNF,对周围细胞具有持续的细胞营养作用。（2）BMSCs细胞活性因子能够促进NSCs克隆球的增殖,诱导NSCs更容易向神经元分化,此外BMSCs细胞营养因子能够增强NSCs对低氧应激的耐受能力。（3）BMSCs细胞活性因子能够促进内源性的NSCs动员,并诱导NSCs易于向神经元分化。（4）BMSCs细胞活性因子能够帮助脑创伤大鼠增进学习和记忆功能的恢复,改善运动能力,降低炎症水平,抑制细胞凋亡。
张晓峰[10]（2018）在《PHBV纳米纤维修复骨组织及神经组织的实验研究》文中指出组织工程的三要素是由种子细胞、支架材料、生长因子组成,我们选取了PHBV这种具有生物降解性、生物相容性以及无免疫源性等特征的微生物产生的聚酯作为支架材料,并用静电纺丝法制备出PHBV纳米纤维。基于PHBV纳米纤维我们分别制备出适用于骨组织工程的非定向和定向PHBV/HA纳米纤维支架,非定向和定向PHBV纳米纤维支架以及适宜于神经组织工程的非定向PHBV/Laminin纳米纤维导管、定向PHBV纳米纤维导管以及非定向PHBV/Laminin纳米纤维导管、非定向PHBV纳米纤维导管。通过CCK-8测试干细胞在材料上的增殖情况,通过成骨标志物检查来观察材料对成骨的影响,通过对体外施旺细胞的培养来观察材料对于神经再生功能的影响。结果表明,细胞接种1,4,7天后,不含HA的非定向PHBV纤维支架更适宜BMSCs的粘附和增殖;接种1,2,4周后,检测成骨标志物:碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）以及钙结节,分化实验结果表明含有HA的纳米纤维支架更有利于促进MSCs向成骨细胞的分化。而体外施旺细胞在PHBV纳米纤维膜上的培养表明,无论定向与非定向还是有无层粘蛋白修饰,均适宜于施旺细胞的黏附和增殖细胞。通过SEM扫描我们发现,BMSCs以及施旺细胞在定向纳米纤维上会顺着纤维方向生长、伸展,而在非定向纳米纤维上细胞则呈现随机排列和伸展。在体内修复骨缺损的研究中,分别将定向及非定向PHBV纳米纤维三维支架,定向及非定向PHBV/HA纳米纤维三维支架,植入新西兰兔的梭骨缺损处,在植入术后通过大体观察,放射学检查,组织学检查,扫描电镜观察,CT扫描三维重建以及力学测试来进行评估。结果表明定向及非定向PHBV纳米纤维三维支架,定向及非定向PHBV/HA纳米纤维三维支架均可促进骨缺损的修复,其中非定向PHBV/HA纳米纤维三维支架对于骨组织的再生作用最佳,而定向PHBV纳米纤维三维支架成骨能力最弱,HA对于材料的修饰对于体内骨组织再生的影响较为明显。我们分别在术前及术后通过对新西兰兔的抽血检测,发现PHBV材料具有良好的生物相容性。在体内神经缺损修复的研究中,我们制备了基于PHBV纳米纤维的三维神经导管,分别是定向及非定向PHBV纳米纤维三维神经导管,定向及非定向PHBV/Laminin纳米纤维三维神经导管,植入SD大鼠的坐骨神经缺损处,在植入术后通过步态测试,神经电生理,大体观察,组织学检查来进行评估。结果表明定向及非定向PHBV纳米纤维三维神经导管,定向及非定向PHBV/Laminin纳米纤维神经导管均可促进神经缺损的修复,但是定向PHBV纳米纤维神经导管及定向PHBV/Laminin纳米纤维神经导管对于神经缺损的效果更好。定向纳米纤维对于神经再生的影响更为明显。我们通过对大鼠坐骨神经远端内源性神经营养因子的检测,发现材料对于神经的修复可能通过影响大鼠内源性神经营养因子的分泌而实现。
二、神经胶质生长因子对周围神经损伤后作用的组织学观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、神经胶质生长因子对周围神经损伤后作用的组织学观察（论文提纲范文）
（1）枸杞多糖干预雪旺细胞在周围神经损伤修复中的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第1章 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 SCs培养及鉴定 |
| 1.2.2 LBP与 SCs共培养 |
| 1.2.3 CCK-8 检测 |
| 1.2.4 实时定量PCR检测 |
| 1.2.5 脱细胞异种神经支架的制备 |
| 1.2.6 神经移植手术步骤 |
| 1.2.7热刺痛实验 |
| 1.2.8 坐骨神经功能指数检测(SFI) |
| 1.2.9 神经电生理 |
| 1.2.10 再生神经的组织学观察 |
| 1.3 统计学方法 |
| 第2章 结果 |
| 2.1 细胞培养及鉴定 |
| 2.2 CCK-8 检测 |
| 2.3 各组BDNF、NGF及bFGF因子mRNA表达 |
| 2.4 SD大鼠坐骨神经缺损移植体建立 |
| 2.5热刺痛实验 |
| 2.6 神经电生理 |
| 2.7 坐骨神经指数SFI |
| 2.8 各组腓肠肌肌细胞HE染色 |
| 2.9 电镜 |
| 第3章 讨论 |
| 第4章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 综述参考文献 |
| 在校期间研究成果 |
| 致谢 |
（2）新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 新型组织工程神经制作与大鼠坐骨神经长段缺损损伤模型的建立 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 组织工程神经对坐骨神经缺损损伤后巨噬细胞极化及炎性细胞的影响 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 组织工程神经修复坐骨神经缺损过程中对炎性细胞因子的调节作用 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 组织工程神经对坐骨神经长段缺损的结构和功能修复作用 |
| 5.1 研究背景 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文总结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 巨噬细胞极化在神经系统损伤修复中的作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的成果 |
| 致谢 |
（3）兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架的制备,结构观察以及机械性能评价 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 兔牙髓前体细胞的体外培养鉴定和神经方向诱导分化 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 Myroilysin酶法脱细胞异种神经支架的体内和体外生物学性能评估 |
| 材料和方法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文总结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 学位论文评阅及答辨情况表 |
| 外文论文 |
（4）基于EPCs及VEGF165促血管生成作用促进组织工程神经修复大段周围神经缺损（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、大鼠内皮祖细胞与脂肪干细胞诱导后的类许旺细胞共培养的实验研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料及试剂 |
| 1.1.2 实验试剂配制 |
| 1.1.3 实验仪器 |
| 1.1.4 实验方法 |
| 1.1.5 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠EPCs形态学观察及鉴定 |
| 1.2.2 大鼠ADSCs形态学观察、鉴定及向类SCs诱导 |
| 1.2.3 大鼠EPCs对类SCs生物学行为的影响 |
| 1.2.3.1 大鼠EPCs/类SCs细胞接种比例对类SCs活性的影响 |
| 1.2.3.2 大鼠EPCs对类SCs存活的影响 |
| 1.2.3.3 大鼠EPCs对类SCs功能表达的影响及其可能机制分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 周围神经损伤修复与血管形成关系密切 |
| 1.3.2 EPCs促进类SCs存活 |
| 1.3.3 EPCs促进类SCs功能表达 |
| 1.4 小结 |
| 二、转染VEGF165基因对大鼠EPCs增殖、迁移及功能表达的影响 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料及试剂 |
| 2.1.2 实验试剂配制 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 实验方法 |
| 2.1.5 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 Ad-VEGF165体外转染大鼠EPCs |
| 2.2.2 转染VEGF165基因促进大鼠EPCs增殖 |
| 2.2.3 转染VEGF165基因促进大鼠EPCs迁移 |
| 2.2.4 转染VEGF165基因促进大鼠EPCs向内皮细胞(EC)分化及其可能机制 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 干细胞治疗与基因治疗在神经组织工程中的应用 |
| 2.3.2 基因技术载体的选择 |
| 2.3.3 转染VEGF165基因对大鼠EPCs生物学行为的影响 |
| 2.4 小结 |
| 三、促血管化组织工程化周围神经的体外构建及评估 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验材料及试剂 |
| 3.1.2 实验试剂配制 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.1.4 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 改良脱细胞神经支架评估 |
| 3.2.2 大鼠ADSCs分离、培养及向类SCs诱导 |
| 3.2.3 大鼠EPCs分离、培养及VEGF165基因转染大鼠EPCs |
| 3.2.4 促血管化周围神经体外培养及观察 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 内皮祖细胞促进血管新生的基础 |
| 3.3.2 周围神经再生的局部微环境及局部血供 |
| 3.4 小结 |
| 四、促血管化组织工程化周围神经修复大鼠大段坐骨神经缺损 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验材料及试剂 |
| 4.1.2 实验试剂配制 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.1.4 实验方法 |
| 4.1.5 统计学分析 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 大体观察 |
| 4.2.2 坐骨神经功能指数(SFI指数) |
| 4.2.3 神经超声下观察 |
| 4.2.4 神经电生理检测 |
| 4.2.5 双侧腓肠肌湿重比及患侧腓肠肌组织学染色 |
| 4.2.6 组织学评价 |
| 4.2.7 分子生物学评价 |
| 4.2.7.1 QRT-PCR |
| 4.2.7.2 Western-blot |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 组织工程化周围神经的血管化 |
| 4.3.2 神经损伤修复期各项评价指标 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 组织工程化周围神经血管化研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）丙泊酚对BALB/c小鼠坐骨神经损伤后相应脊髓节段PSD-95表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（6）人发角蛋白促进大鼠坐骨神经挤压伤后的神经修复（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 本文所涉及的英文缩写与英汉对照表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 周围神经损伤 |
| 1.2 周围神经中的SCs |
| 1.3 周围神经中的巨噬细胞 |
| 1.4 周围神经中的神经元 |
| 1.5 周围神经和组织工程材料 |
| 1.6 结语 |
| 第二章 研究目的及意义、内容、方法及技术路线 |
| 2.1 研究目的及意义 |
| 2.1.1 研究目的 |
| 2.1.2 研究意义 |
| 2.2 研究内容 |
| 2.2.1 HHK体外对SCs、巨噬细胞、DRG神经元的影响 |
| 2.2.2 HHK海绵体内对SD大鼠周围神经损伤的影响 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.4 实验技术路线 |
| 第三章 人发角蛋白的提取及体外对参与周围神经损伤修复细胞的调节作用 |
| 3.1 材料和试剂 |
| 3.1.1 实验器材 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 细胞来源 |
| 3.1.4 主要溶液配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 HHK的制备 |
| 3.2.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 3.2.3 HHK的包被 |
| 3.2.4 细胞的培养、冻存与复苏 |
| 3.2.5 大鼠原代SCs的分离和培养 |
| 3.2.6 大鼠原代DRG神经元的分离和培养 |
| 3.2.7 细胞黏附 |
| 3.2.8 CCK-8 实验 |
| 3.2.9 HE染色 |
| 3.2.10 Transwell 实验 |
| 3.2.11 划痕实验 |
| 3.2.12 mRNA表达分析 |
| 3.2.13 免疫荧光 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 HHK的提取 |
| 3.3.2 HHK调节SCs的活性 |
| 3.3.3 HHK对 DRG神经元的影响 |
| 3.3.4 HHK对巨噬细胞的炎症因子表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 人发角蛋白海绵在体内对大鼠坐骨神经损伤的修复作用 |
| 4.1 材料和试剂 |
| 4.1.1 主要器材和试剂 |
| 4.1.2 试剂配制 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 HHK海绵的制备 |
| 4.2.2 场发射SEM分析HHK海绵 |
| 4.2.3 SD大鼠坐骨神经挤压损伤模型的建立 |
| 4.2.4 SFI |
| 4.2.5 组织学观察 |
| 4.2.6 TEM分析 |
| 4.2.7 统计学方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 HHK海绵的性能 |
| 4.3.2 HHK海绵对SD大鼠坐骨神经损伤恢复的影响 |
| 4.3.3 HHK海绵对SD大鼠坐骨神经髓鞘再生的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间发表的学术论文及参加的会议 |
（7）大鼠坐骨神经损伤后不同修复方法中GAP43和S100B变化规律的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 周围神经损伤修复 |
| 1.1.1 周围神经系统 |
| 1.1.2 周围神经损伤和修复 |
| 1.1.3 周围神经损伤修复再生机制 |
| 1.2 雪旺细胞与周围神经损伤修复 |
| 1.2.1 雪旺细胞的概述 |
| 1.2.2 雪旺细胞生理功能和作用 |
| 1.3 周围神经损伤修复再生中相关因子 |
| 1.3.1 生长相关蛋白 |
| 1.3.2 酸性钙结合蛋白 |
| 1.3.3 纤维连接蛋白 |
| 1.3.4 神经丝蛋白 |
| 1.4 周围神经损伤修复再生评价 |
| 1.5 绪论 |
| 1.5.1 研究背景 |
| 1.5.2 研究内容 |
| 1.5.3 拟解决的关键科学问题 |
| 1.5.4 本研究的创新点 |
| 第2章 GAP43和S100B在胚胎中的表达研究 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 动物 |
| 2.1.2 试剂 |
| 2.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 孕鼠制备 |
| 2.2.2 精子检查法 |
| 2.2.3 鼠胚取材 |
| 2.2.4 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 胚胎外形观察 |
| 2.3.2 胚胎免疫荧光染色 |
| 2.4 小结与讨论 |
| 第3章 细胞的分离培养与鉴定 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 动物 |
| 3.1.2 试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 大鼠坐骨神经的原代培养 |
| 3.2.2 细胞免疫荧光鉴定 |
| 3.2.3 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 小结与讨论 |
| 第4章 GAP43和S100B在周围神经损伤修复中蛋白研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 动物 |
| 4.1.2 试剂 |
| 4.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 神经导管的制备 |
| 4.2.2 动物模型的建立与分组 |
| 4.2.3 免疫荧光染色 |
| 4.2.4 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 GAP43和S100B在周围神经损伤近端的蛋白表达 |
| 4.3.2 GAP43和S100B在周围神经损伤远端的蛋白表达 |
| 4.4 小结与讨论 |
| 第5章 GAP43和S100B在周围神经损伤修复中基因研究 |
| 5.1 材料 |
| 5.1.1 动物 |
| 5.1.2 试剂 |
| 5.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 5.2 方法 |
| 5.2.1 Total RNA提取 |
| 5.2.2 cDNA合成 |
| 5.2.3 目的基因扩增 |
| 5.2.4 实时荧光定量PCR |
| 5.2.5 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 Gap43 mRNA在周围神经损伤修复中的表达研究 |
| 5.3.2 S100b mRNA在周围神经损伤修复中的表达研究 |
| 5.3.3 Fibronectin mRNA在周围神经损伤修复中的表达研究 |
| 5.3.4 Nf200 mRNA在周围神经损伤修复中的表达研究 |
| 5.4 小结与讨论 |
| 第6章 不同坐骨神经损伤修复研究 |
| 6.1 材料 |
| 6.1.1 动物 |
| 6.1.2 试剂 |
| 6.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 6.2 方法 |
| 6.2.1 动物模型建立 |
| 6.2.2 大体和术部形态学观察 |
| 6.2.3 石蜡切片HE染色 |
| 6.2.4 轴突NF200 免疫荧光染色 |
| 6.2.5 感觉功能检测 |
| 6.2.6 腓肠肌湿重率检测 |
| 6.2.7 统计学分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 大体与术部形态学观察 |
| 6.3.2 石蜡切片的HE染色 |
| 6.3.3 轴突NF200 免疫荧光染色 |
| 6.3.4 感觉功能检测 |
| 6.3.5 腓肠肌湿重率检测 |
| 6.4 小结与讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间科研实践情况 |
（8）仿生多通道人工神经导管的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 兔坐骨神经显微三维结构的获取与重建 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验动物及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第二部分 多通道导管的模型设计及制备及物理性能及生物相容性能检测评价 |
| 1.内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验动物及主要试剂 |
| 1.3 相关液体配置 |
| 1.4 实验分组与方法 |
| 1.5 检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 第三部分 多通道人工神经导管修复兔坐骨神经的实验研究 |
| 1.研究内容与方法 |
| 1.1 相关试剂 |
| 1.2 相关设备 |
| 1.3 实验动物及分组 |
| 1.4 观察及检测指标 |
| 1.5 统计方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 4.小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（9）干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、干细胞活性因子改善大鼠受损神经干细胞 |
| 1.1 对象与方法 |
| 1.1.1 实验材料 |
| 1.1.2 方法 |
| 1.1.2.1 大鼠BMSCs的原代分离、培养、传代及保存 |
| 1.1.2.2 流式细胞术鉴定BMSCs细胞膜标记蛋白的表达情况 |
| 1.1.2.3 双抗体夹心法酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA）测定BMSCs培养基中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF细胞活性因子的水平 |
| 1.1.2.4 大鼠NSCs的原代分离、培养与传代 |
| 1.1.2.5 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs增殖的影响 |
| 1.1.2.6 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs分化的影响 |
| 1.1.2.7 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs乏氧耐受能力的影响 |
| 1.1.2.8 活性因子对细胞损伤模型中大鼠NSCs耐受能力的影响 |
| 1.1.2.9 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 大鼠BMSCs初期克隆形成、细胞形态及传代特点 |
| 1.2.2 大鼠BMSCs细胞膜表面标记蛋白的表达特点 |
| 1.2.3 大鼠BMSCs培养基中BDNF、IGF-1、VEGF和NGF细胞活性因子的表达水平 |
| 1.2.4 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs增殖的影响 |
| 1.2.5 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs分化的影响 |
| 1.2.6 BMSCs细胞活性因子对大鼠NSCs乏氧耐受能力及牵张损伤耐受力的影响 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 脑创伤救治的国内外研究现状 |
| 1.3.2 脑创伤靶向治疗药物的研发现状 |
| 1.3.3 干细胞治疗脑创伤的研究进展 |
| 1.3.4 本研究的主要发现与分析 |
| 1.4 小结 |
| 二、BMSCs源性细胞活性因子改善TBI大鼠神经功能的体内实验研究 |
| 2.1 对象与方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 |
| 2.1.3 SD实验大鼠的购置与日常饲养 |
| 2.1.4 脑损伤大鼠模型的制作与实验分组 |
| 2.1.5 脑损伤大鼠模型术后观察及行为学检测 |
| 2.1.6 脑损伤大鼠模型术后解剖及组织病理学检查 |
| 2.1.6.1 组织解剖及一般组织观察 |
| 2.1.6.2 干/湿重法检测脑水肿程度 |
| 2.1.6.3 mRNA提取及荧光定量PCR检测组织中目标基因的表达 |
| 2.1.6.4 免疫组织荧光方法检测目标蛋白的表达 |
| 2.1.6.5 Western Blot方法检测目的蛋白在脑组织中的表达情况 |
| 2.1.7 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 实验动物一般状况观察 |
| 2.2.2 实验动物活体实验结果 |
| 2.2.2.1 水迷宫训练结果 |
| 2.2.2.2 Morris水迷宫定位航行实验结果 |
| 2.2.3 实验动物离体实验结果 |
| 2.2.3.1 HE染色实验结果分析 |
| 2.2.3.2 实验大鼠脑水肿检测结果 |
| 2.2.3.3 荧光定量PCR检测目标基因在脑组织中的mRNA表达结果 |
| 2.2.3.4 免疫组织荧光方法检测目标蛋白在脑组织中的表达结果 |
| 2.2.3.5 Western Blot方法检测目的蛋白在脑组织中的表达结果 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 细胞组织工程与TBI治疗概述 |
| 2.3.2 内源性修复对神经损伤的反应及其媒介因子 |
| 2.3.3 细胞因子通过调节损伤微环境影响神经干细胞行为 |
| 2.3.4 生物活性因子调节内源性神经干细胞活性 |
| 2.3.5 本研究的主要发现与分析 |
| 2.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 干细胞治疗中枢神经损伤的可行性和潜在价值 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）PHBV纳米纤维修复骨组织及神经组织的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 骨组织的损伤与修复 |
| 1.2.1 骨的生物学特征 |
| 1.2.1.1 骨的结构 |
| 1.2.1.2 骨的发育 |
| 1.2.1.3 骨的再生 |
| 1.2.2 骨组织缺损的修复 |
| 1.2.2.1 种子细胞 |
| 1.2.2.1.1 牙源性干细胞 |
| 1.2.2.1.2 胚胎干细胞 |
| 1.2.2.1.3 脂肪源性干细胞 |
| 1.2.2.1.4 诱导多功能干细胞 |
| 1.2.2.1.5 骨位间充质干细胞 |
| 1.2.2.2 细胞生长因子 |
| 1.2.2.2.1 骨形态发生蛋白 |
| 1.2.2.2.2 血管内皮生长因子 |
| 1.2.2.2.3 血小板源性生长因子 |
| 1.2.2.2.4 成纤维生长因子 |
| 1.2.2.2.5 胰岛素样生长因子 |
| 1.2.2.2.6 甲状旁腺素 |
| 1.3 骨组织工程支架材料 |
| 1.3.1 生物陶瓷类 |
| 1.3.1.1 磷酸三钙 |
| 1.3.1.2 羟基磷灰石 |
| 1.3.1.3 碳酸钙 |
| 1.3.2 天然高分子材料 |
| 1.3.2.1 壳聚糖 |
| 1.3.2.2 胶原 |
| 1.3.2.3 明胶 |
| 1.3.2.4 藻酸盐 |
| 1.3.2.5 丝纤蛋白 |
| 1.3.2.6 透明质酸 |
| 1.3.3 人工合成材料 |
| 1.3.3.1 硫酸钙 |
| 1.3.3.2 生物活性玻璃 |
| 1.3.3.3 高分子材料 |
| 1.3.3.3.1 聚乳酸和聚乙醇酸及其共聚物 |
| 1.3.3.3.2 聚己内酯 |
| 1.3.3.3.3 聚对二氧六环酮 |
| 1.3.3.3.4 羟基丁酸羟基戊酸共聚酯 |
| 1.4 外周神经组织的损伤与修复 |
| 1.4.1 外周神经的生物学特征 |
| 1.4.1.1 外周神经的组织结构 |
| 1.4.1.2 外周神经损伤的自体修复 |
| 1.4.2 外周神经损伤的治疗 |
| 1.4.2.1 自体神经移植 |
| 1.4.2.2 同种异体神经移植 |
| 1.4.2.3 其他的组织替代移植 |
| 1.4.2.4 细胞治疗 |
| 1.4.2.4.1 施旺细胞 |
| 1.4.2.4.2 嗅鞘细胞 |
| 1.4.2.4.3 干细胞 |
| 1.4.2.5 细胞因子 |
| 1.4.2.5.1 神经营养因子 |
| 1.4.2.5.2 胶质细胞源性神经营养因子 |
| 1.4.2.5.3 睫状神经营养因子 |
| 1.4.2.5.4 成纤维生长因子 |
| 1.4.2.5.5 神经调节蛋白 |
| 1.4.2.5.6 其他的细胞因子 |
| 1.5 外周神经组织工程支架材料 |
| 1.5.1 天然材料 |
| 1.5.1.1 胶原 |
| 1.5.1.2 纤维蛋白 |
| 1.5.1.3 丝纤蛋白 |
| 1.5.1.4 藻酸盐 |
| 1.5.1.5 壳聚糖 |
| 1.5.2 人工合成材料 |
| 1.5.2.1 硅管 |
| 1.5.2.2 高分子材料 |
| 1.5.2.2.1 脂肪族多聚物 |
| 1.5.2.2.2 其他高分子材料 |
| 1.6 本章总结 |
| 参考文献 |
| 第二章 PHBV 静电纺丝纤维的制备和表征 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 材料和仪器 |
| 2.2.2 PHBV纳米纤维膜的制备 |
| 2.2.3 BMSCs的提取和培养 |
| 2.2.4 用于骨组织工程的PHBV纳米纤维膜的表征 |
| 2.2.4.1 用于骨组织工程的PHBV纳米纤维膜上BMSCs的活性检测 |
| 2.2.4.2 扫描电子显微镜对PHBV纳米纤维膜上BMSCs的形貌观察 |
| 2.2.4.3 BMSCs在PHBV纳米纤维膜上成骨方向分化的观察 |
| 2.2.5 用于神经组织工程的PHBV纳米纤维膜的表征 |
| 2.2.5.1 施旺细胞在PHBV纳米纤维膜上的活性检测 |
| 2.2.5.2 扫描电子显微镜对PHBV纳米纤维膜上施旺细胞的形貌观察 |
| 2.2.5.3 PHBV纳米纤维膜上施旺细胞的免疫组化检测 |
| 2.2.6 统计学分析 |
| 2.3 结果分析 |
| 2.3.1 BMSCs在PHBV纳米纤维膜上的增殖情况 |
| 2.3.2 BMSCs在PHBV纳米纤维膜上成骨方向分化的观察 |
| 2.3.3 施旺细胞在PHBV纳米纤维膜上的增殖情况 |
| 2.3.4 扫描电子显微镜对PHBV纳米纤维膜上施旺细胞的形貌观察 |
| 2.3.5 PHBV纳米纤维膜上施旺细胞的免疫组化检测结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第三章 PHBV纳米纤维支架对骨缺损修复的体内研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料和仪器 |
| 3.2.2 基于PHBV纳米纤维的三维支架的制备 |
| 3.2.3 兔桡骨缺损模型的建立 |
| 3.2.4 术后检测方法 |
| 3.2.5 统计学分析 |
| 3.3 结果分析 |
| 3.3.1 大体观察 |
| 3.3.2 X线观察 |
| 3.3.3 组织学观察 |
| 3.3.4 SEM扫描结果 |
| 3.3.5 CT扫描三维重建结果 |
| 3.3.6 力学测试结果 |
| 3.3.7 血液检测结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 静电纺丝纳米纤维在骨组织工程中的应用 |
| 3.4.2 羟基磷灰石的成骨作用 |
| 3.4.3 PHBV纳米纤维材料上的成骨机制 |
| 3.4.4 定向与非定向PHBV纳米纤维材料对成骨作用的影响 |
| 3.4.5 PHBV纳米纤维材料的生物相容性 |
| 3.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第四章 PHBV纳米纤维神经导管对神经缺损修复的体内研究 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 材料和仪器 |
| 4.2.2 基于PHBV纳米纤维的神经导管的制备 |
| 4.2.3 大鼠坐骨神经缺损模型的建立 |
| 4.2.4 术后检测方法 |
| 4.2.5 统计学分析 |
| 4.3 结果分析 |
| 4.3.1 术后观察 |
| 4.3.2 步态测试 |
| 4.3.3 神经电生理测试 |
| 4.3.4 新生神经大体观察 |
| 4.3.5 组织学检查 |
| 4.3.6 免疫组化检查 |
| 4.3.7 两侧腓肠肌重量比值 |
| 4.3.8 腓肠肌组织学观察 |
| 4.3.9 大鼠坐骨神经远端的内源性神经营养因子的表达变化 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 PHBV材料在神经组织工程中的应用 |
| 4.4.2 静电纺丝技术在神经组织工程中的应用 |
| 4.4.3 层粘连蛋白的作用 |
| 4.4.4 内源性神经营养因子在神经损伤修复中的作用 |
| 4.5 结论 |
| 参考文献 |
| 第五章 总结与展望 |
| 5.1 论文总结 |
| 5.2 论文创新点 |
| 5.3 论文的不足 |
| 作者简介 |
| 后记 |
四、神经胶质生长因子对周围神经损伤后作用的组织学观察（论文参考文献）
- [1]枸杞多糖干预雪旺细胞在周围神经损伤修复中的研究[D]. 张立鹏. 西北民族大学, 2020(08)
- [2]新型组织工程神经调节的炎性微环境对大鼠SN长段缺损的修复作用[D]. 李越. 中国人民解放军陆军军医大学, 2019
- [3]兔牙髓前体细胞复合Myroilysin脱细胞异种神经后神经移植物的生物学特性[D]. 乔文兰. 山东大学, 2019(02)
- [4]基于EPCs及VEGF165促血管生成作用促进组织工程神经修复大段周围神经缺损[D]. 赵斌. 天津医科大学, 2019
- [5]丙泊酚对BALB/c小鼠坐骨神经损伤后相应脊髓节段PSD-95表达的影响[D]. 韩雪峰. 内蒙古医科大学, 2019(03)
- [6]人发角蛋白促进大鼠坐骨神经挤压伤后的神经修复[D]. 高建一. 江苏大学, 2019(03)
- [7]大鼠坐骨神经损伤后不同修复方法中GAP43和S100B变化规律的研究[D]. 李婷. 西南大学, 2019(06)
- [8]仿生多通道人工神经导管的研究[D]. 亚穆罕默德·阿力克. 新疆医科大学, 2019(01)
- [9]干细胞活性因子保护大鼠损伤神经干细胞及改善神经功能的研究[D]. 任登鹏. 天津医科大学, 2018(12)
- [10]PHBV纳米纤维修复骨组织及神经组织的实验研究[D]. 张晓峰. 东南大学, 2018(12)